甘油的檢測(cè)方法匯總

1、甘油的檢測(cè)方法匯總甘油的檢測(cè)方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會(huì)影響外源蛋白的啟動(dòng)表達(dá)效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標(biāo)，是提高工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關(guān)鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物，其含量直接影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。此外，甘油能與水結(jié)合以防止紅細(xì)胞的冷凍損傷，能延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存期，被普遍用作細(xì)胞內(nèi)冷凍保護(hù)劑等。由于甘油用

2、途很廣，因此其含量的測(cè)定具有非常重要的意義。目前國(guó)內(nèi)外甘油含量的測(cè)定方法較多，主要有高碘酸氧化法、Cu2絡(luò)合比色法、酶比色法法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法、近紅外光譜法以及原子吸收法等。下面將對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)要概述：1、高碘酸法高碘酸法1.1.原理：原理：高碘酸氧化法是目前常見用于甘油含量檢測(cè)的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧化還原反應(yīng)，剩余高碘酸及反應(yīng)生成的碘酸與碘化鉀反應(yīng)生成碘，再用硫代硫酸鈉進(jìn)行滴定，根據(jù)消耗的硫代硫酸鈉

3、的量來計(jì)算甘油的含量。2.2.操作步驟操作步驟準(zhǔn)確發(fā)酵液10ml于100mL小燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水稀釋至標(biāo)線，搖勻，靜置。用移液管準(zhǔn)確移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸鈉溶液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置40min，然后加入碘化鉀溶液和20%鹽酸溶液各15mL，調(diào)節(jié)pH值在0.8～1.0之間，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，近終點(diǎn)時(shí)，加入2mL淀粉指示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍(lán)色消失。同時(shí)

4、做試樣空白。3.3.計(jì)算計(jì)算：100100045010w12???????MCVV）（式中：w——樣品中甘油的含量，％；V1——空白試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2——試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；C——硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol／L；M——甘油相對(duì)分子質(zhì)量；（2）將甘油標(biāo)準(zhǔn)系列溶液在最佳色譜條件下進(jìn)行HPLC分析以峰面積外標(biāo)法定量得到甘油標(biāo)準(zhǔn)曲線；（3）按照樣品預(yù)處理方法處理后進(jìn)樣5微升記錄峰面積代入線性方

5、程中計(jì)算其測(cè)定值。將計(jì)算值乘以稀釋倍數(shù)后即得發(fā)酵液中甘油的含量。4、氣相色譜法氣相色譜法1.原理原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復(fù)雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一定量的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進(jìn)樣口中，在載氣帶動(dòng)下通過色譜柱，分析物的分子會(huì)受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，與特定的固定相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過速率，因此，分析物中的各種不同組分就會(huì)在不同的時(shí)間

6、到達(dá)柱的末端，從而得到分離。當(dāng)化合物從柱的末端流出時(shí)，它們被檢測(cè)器檢測(cè)到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號(hào)，并被轉(zhuǎn)化為電信號(hào)輸出，從而確定每一個(gè)組分到達(dá)色譜柱末端的時(shí)間順序以及每一個(gè)組分的含量。2.2.操作步驟操作步驟（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制在7個(gè)25mL容量瓶中分別準(zhǔn)確稱入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g甘油（精確至0.1mg），再分別移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。其中甘油質(zhì)量濃度分別為0、2、4、8、

7、12、20gL，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為8gL。（2）樣品的制備在25mL容量瓶中加入5ml的發(fā)酵液樣品，移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容至刻度并搖勻。（3）GC條件色譜柱：HP5石英毛細(xì)管柱，30m（柱長(zhǎng)）0.32mm（內(nèi)徑）0.25μm（膜厚）。柱溫：初始溫度120℃，保留5min，以20℃min升至290℃，保留10min。進(jìn)樣口溫度：280℃，進(jìn)樣量：0.2μL，分流比：100∶1。檢測(cè)器（FID）溫度：300℃，氫氣流速：40mL