豬血液的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析技術(shù)

1、樊福好，通訊作者，fanfuhao@豬血液的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析技術(shù)農(nóng)業(yè)部種豬質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（廣州）劉建營(yíng)曹長(zhǎng)仁謝水華樊福好前言前言血液學(xué)的檢測(cè)技術(shù)在當(dāng)前的養(yǎng)豬生產(chǎn)中已經(jīng)顯得越來越重要。為指導(dǎo)養(yǎng)豬生產(chǎn)提供更加科學(xué)的依據(jù)，為疫苗接種提供更加準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，為飼養(yǎng)管理方式的采用和變更提供更加詳實(shí)的數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的判定和數(shù)據(jù)分析技術(shù)越來越受到廣大科技工作者和養(yǎng)豬生產(chǎn)者的關(guān)注，本文擬對(duì)此進(jìn)行簡(jiǎn)述，以期拋磚引玉。1、血液樣本的采集、血

2、液樣本的采集豬的血液采集部位一般選擇在耳靜脈、頸靜脈和前腔靜脈進(jìn)行。耳靜脈采血雖然方便，但采血量不足；頸靜脈和前腔靜脈對(duì)采血的技術(shù)要求較高，一般難以掌握，但一旦掌握技巧，采血的速度將非常迅速，常在幾秒鐘內(nèi)即可完成。過去采血一般使用注射器直接采集，但采集的血液容易受到污染，容易導(dǎo)致紅細(xì)胞破裂和出現(xiàn)脂血的問題，大大地影響檢測(cè)結(jié)果。建議采用血液保護(hù)液進(jìn)行采血，具體步驟是：用注射器采集血液保護(hù)液約2毫升，然后采集血液約2毫升，輕度混勻。此時(shí)采集

3、的血液上清為無色狀態(tài)而非淡黃色狀態(tài)，這些血液樣本大大利于進(jìn)行ELISA、PCR和血液生理生化的檢測(cè)。在進(jìn)行血液檢測(cè)工作之前，首先要確定采集的樣本量。按照生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的原理，應(yīng)該采用分層采樣的方法。即首先確定一個(gè)類別群體，比如公豬群、經(jīng)產(chǎn)母豬群、哺乳仔豬群、保育豬群、生長(zhǎng)豬群，等等。通過抽樣確定總體樣本的屬性，要考慮檢測(cè)誤差、檢測(cè)結(jié)果的估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差和置信區(qū)間來確定樣本量，如在豬瘟抗體檢測(cè)中，容許誤差為5，標(biāo)準(zhǔn)差為15，置信區(qū)間取95%，根據(jù)N

4、=（1.96標(biāo)準(zhǔn)差誤差）2，則樣本量為35。即：容許誤差越小，估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差越大，置信區(qū)間越大，所需樣本量越大。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，按照現(xiàn)行市面上通用的檢測(cè)試劑盒的特異性和敏感性以及檢測(cè)結(jié)果的估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算，每個(gè)群體（即采樣層）需要采集樣本約30份左右為宜。采樣時(shí)，必須遵循隨機(jī)抽樣的原則。2、抗體檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析、抗體檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析在過去的曾經(jīng)一段時(shí)間內(nèi)，豬血液中的抗體檢測(cè)一直采用間接血凝試驗(yàn)（如豬瘟抗體的檢測(cè)），但該方法操作繁雜，誤差較大，已經(jīng)被大多

5、數(shù)實(shí)驗(yàn)室所棄用；而市面上的免疫金試驗(yàn)由于誤差較大，不能量化，結(jié)果不可信，推廣難度就顯得較大。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用的檢測(cè)抗體的方式是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱ELISA），該方法操作規(guī)范，結(jié)果可靠，數(shù)據(jù)可通過計(jì)算機(jī)存儲(chǔ)并便于分析。在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，要注意的幾個(gè)事項(xiàng)是：孵育溫度要準(zhǔn)確、洗板力度要適宜、陰陽性對(duì)照均需要分別設(shè)立至少兩份以上（很多實(shí)驗(yàn)室采用一孔進(jìn)行陰性或陽性對(duì)照來節(jié)省檢測(cè)成本的做法是不推薦的），采用保護(hù)液采集的血液樣本要換算稀

6、釋倍數(shù)。2.1通過ELISA方法檢測(cè)獲得的抗體結(jié)果分為三種：陽性、陰性和可疑（某些試劑盒未200885.4%50.2%65.5%200981.0%50.0%63.6%201085.2%54.0%67.8%201177.5%54.9%65.2%201279.9%51.6%64.2%下表是某商品豬瘟疫苗的臨床應(yīng)用結(jié)果及效果評(píng)價(jià)。樣品編號(hào)Block%結(jié)果相對(duì)抗體N15579795.0N15929795.0N15589591.6N1048959

7、1.6N15409693.3N13879795.0N1849693.3N15269795.0N10449795.0H30059591.6H30579693.3B3039795.0后L3939693.3后L2877761.6核L329388.3核L2299693.3核L2509286.6經(jīng)過計(jì)算得知，該疫苗接種豬群后，陽性率為100%，相對(duì)抗體的平均值為94.4%，疫苗的免疫效力為97.2%，該疫苗是豬用疫苗市場(chǎng)中比較理想的豬瘟疫苗之一。

8、3、抗原檢測(cè)、抗原檢測(cè)抗原的檢測(cè)方法與抗體檢測(cè)有所相似，但目前抗原檢測(cè)試劑盒大多數(shù)存在一定的不足之處，如可重復(fù)性差、存在較多的假陽性或假陰性結(jié)果、樣品處理難度高，等等。不過，用于檢測(cè)藥物殘留的試劑盒在質(zhì)量上已經(jīng)獲得了不小的進(jìn)展。通過ELISA的方法甚至可以測(cè)試疫苗中的抗原含量，從而評(píng)定疫苗效果的優(yōu)劣。下表是筆者所在的實(shí)驗(yàn)室所進(jìn)行的一項(xiàng)檢測(cè)。疫苗均來自于疫苗銷售的門店。代號(hào)原液1:21:41:81:161:321:641:1281:256