2016梅毒實驗室檢測資料

1、梅毒的實驗室診斷,病原體,為梅毒螺旋體，屬于密螺旋體屬，蒼白密螺旋體蒼白亞種(Treponema pallidum subspecies pallidum) 蒼白亞種 梅毒 蒼白螺旋體 地方亞種 地方性梅毒

2、 極細(xì)亞種 雅司病密螺旋體屬 品他螺旋體 品他病,,,,梅毒螺旋體的生物學(xué)特性,1、直徑 0.10~0.15μm，有8~14個致密而規(guī)則的 小螺旋，兩端尖直。2、原生質(zhì)圓柱體上緊繞著3~4根周漿鞭毛，故運 動活躍，運動方式多樣。3、G-，但不易著

3、色。Fantana鍍銀染色呈棕褐色。4、在無活細(xì)胞的人工培養(yǎng)基中難培養(yǎng)，生長慢。5、抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感；對青霉 素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感。在干燥條件下不易生存。肥皂水和一般消毒劑以及加溫42℃以上均極易將其殺滅。,梅毒螺旋體,傳播途徑,性接觸是主要的傳染途徑 未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性 隨著病期的延長，傳染性越來越小 到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母嬰傳播 在妊娠7周時

4、，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒病期越長，傳染性越小;輸血傳染間接傳播：日常用品、接吻、哺乳、醫(yī)療器械等途徑（接觸部位附有梅毒螺旋體） 。,梅毒的分期,梅毒的診斷,梅毒的診斷早期梅毒（一期、二期和早期隱性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隱性梅毒）必須依靠病史、癥狀及實驗檢查進(jìn)行綜合分析 梅毒的實驗室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義,常用梅毒實驗室檢測方法,病原學(xué)檢測

5、血清學(xué)檢測,病原學(xué)檢查,取材方法一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液暗視野顯微鏡、鍍銀染色法和直接熒光法在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進(jìn)行檢測。白色發(fā)光，螺旋整齊，運動規(guī)律（旋轉(zhuǎn)、伸縮或蛇行運動）,病原學(xué)檢查的臨床意義,病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。 螺旋體

6、檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。 如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清學(xué)檢測方法,梅毒血清學(xué)檢測分類,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗 （特異性梅毒抗體）,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,原理（抗心磷脂抗體）：人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒

7、螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體?？贵w產(chǎn)生時間 感染3周-4周，硬下疳出現(xiàn)1周-2周一般在感染后5～7周（或硬下疳出現(xiàn)后2～3周）產(chǎn)生。 抗體作用無保護(hù)作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。,原理和方法,反應(yīng)原理抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和膽固醇方

8、法包括：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)不加熱血清反應(yīng)素(USR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。,四種非特異性試驗方法比較,RPR/TRUST檢測流程,試驗前期準(zhǔn)備RPR儀(水平旋轉(zhuǎn)儀器) 必須滴?。≡噭?50μl移液器、吸頭 記號筆、廢物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜,梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀,測速:100轉(zhuǎn)/MIN （±2轉(zhuǎn)）,檢測流程（定性）,

9、加樣：吸取50μl血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)。 加抗原：將抗原輕輕搖勻，用試劑盒提供的針頭加1滴抗原。 反應(yīng)：將卡片置梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀8分鐘立即在亮光下觀察結(jié)果。,檢測流程（定量）,稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50μl生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。 加樣：吸取50μl血清(漿)與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布滿整個圈內(nèi)。 重復(fù)定性試驗后兩步。,凝集反應(yīng)強(qiáng)度分級：,3+～4+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)中到大的

10、紅色絮狀物，液體清亮。2+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小到大的紅色絮狀物，液體較清亮。1+：圓圈內(nèi)出現(xiàn)小的紅色絮狀物，液體渾濁。—：圓圈內(nèi)僅見紅色集中于中央一點或均勻分散。,RPR定量試驗,中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性,,,臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個月，VDRL試驗抗體滴度下降2個稀釋度，6個月下降4個稀釋度。 一期

11、梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。 晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。,假陽性問題,假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性①技術(shù)性假陽性由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。②生物學(xué)假陽性是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生

12、變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性,急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病,風(fēng)疹水痘傳染性單核細(xì)胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹,慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病,系統(tǒng)性紅斑狼瘡 自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡 結(jié)節(jié)性多動脈炎 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 橋本氏甲狀腺炎,風(fēng)濕性心臟病干燥綜合征毒品癮者 慢性腎炎肝硬化老年

13、麻風(fēng) (是唯一產(chǎn)生慢性生物學(xué)假陽性的感染性 疾病),妊娠的假陽性反應(yīng),這是一種生理情況下的生物學(xué)假陽性 假陽性發(fā)生率較低有報告為0.4%，滴度低。,假陽性問題,梅毒假陽性反應(yīng)的處理 技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可除外。 對急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗進(jìn)行排除。,前帶現(xiàn)象,原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱

14、陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果。處理將血清稀釋后再進(jìn)行試驗。,血清固定,耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,試驗原理,檢測血中特異性抗梅毒螺旋體特異蛋白為抗原的抗體（ IgG 和IgM ）。特異性IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出。,實驗方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(

15、TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA） 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,TPPA/TPHA原理,TPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒TPHA試驗中梅毒螺旋體致敏羊紅細(xì)胞特點梅毒螺旋體(Nichols株)全抗原,操作步驟,

16、1. 試劑準(zhǔn)備：試驗前將試劑和待檢標(biāo)本恢復(fù)到室溫。   2. 加稀釋液：每份樣本做4孔，加標(biāo)本稀釋液加至微量反應(yīng)板孔內(nèi)，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。3. 樣本稀釋：取血清25微升加至第1孔，混勻后取25微升至第2孔，混勻后取25微升至第3孔，混勻后取25微升至第4孔，混勻后棄去25微升。4. 加對照液：第3孔加未致敏顆粒25微升，第4孔加致敏顆粒25微升。5. 混合：將反應(yīng)板置振蕩器振蕩

17、30秒。6.反應(yīng)：置有蓋濕盒，孵育2 h，或放4℃冰箱過夜觀察結(jié)果。,結(jié)果判斷,1.觀察加未致敏顆粒的第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗。 2. 觀察凝集反應(yīng)強(qiáng)度：分級如下。 4+：顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊。     3+： 顆粒光滑覆蓋大部分孔底。     2+：顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一顆粒環(huán)。 1+： 顆粒

18、光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)。   ±：顆粒沉集孔底，中央形成一小點。   一：顆粒緊密沉積孔底中央。,,熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）,原理將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入異硫氰酸熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物