第二章 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及一般技術(shù)(2學(xué)時(shí))

1、第二章第二章植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及一般技術(shù)植物細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置及一般技術(shù)一實(shí)驗(yàn)室設(shè)置細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室它必須滿足三個(gè)基本的需要，即：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備，包括培養(yǎng)基配制，洗滌與滅菌等；無菌操作；控制培養(yǎng)。1基本實(shí)驗(yàn)室（1）準(zhǔn)備室：準(zhǔn)備室的功能就是進(jìn)行一切與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的準(zhǔn)備工作。要求寬敞明亮，通風(fēng)條件好。（2）接種室：接種室的功能是進(jìn)行無菌操作。要求封閉性好，干燥清潔，能較長時(shí)間保持無菌。房間一般不宜過大，其規(guī)模根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要而定。接種室除了出入口和通氣

2、口外，應(yīng)行密閉。（3）培養(yǎng)室培養(yǎng)室的功能是對(duì)離體材料進(jìn)行控制培養(yǎng)。其首要要求是要能控制光照和溫度，其次為防止微生物感染，有的還需要有可調(diào)節(jié)的空氣濕度。培養(yǎng)室應(yīng)保持干燥和清潔。準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室寬敞明亮寬敞明亮通風(fēng)效果好通風(fēng)效果好.無菌室無菌室封性好封性好干燥清潔干燥清潔保持無菌保持無菌應(yīng)防空氣對(duì)流應(yīng)防空氣對(duì)流培養(yǎng)室培養(yǎng)室控溫控溫控光控光空氣干燥清潔空氣干燥清潔2輔助實(shí)驗(yàn)室（1）細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室：其功能是對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。要求清潔、明

3、亮、干燥，使各種光學(xué)儀器不受潮濕和灰塵污染。（2）攝影室及暗室：其功能是進(jìn)行培養(yǎng)材料的攝影記錄和膠片沖印。在有條件的情況下可建立此實(shí)驗(yàn)室。（3）生化分析室在以培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物為主要目的的實(shí)驗(yàn)室中，應(yīng)建立相應(yīng)的分析化驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，以便于對(duì)培養(yǎng)物的有效成分隨時(shí)進(jìn)行取樣檢查。細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室布局的其基本要求是：便于隔離、便于操作、便于滅菌、便于觀察。二實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具1基本設(shè)備：冰箱、天平、酸度計(jì)、純水器、電爐、培養(yǎng)基分裝器

4、、攪拌器。2滅菌設(shè)備：蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。3無菌操作設(shè)備：凈化工作臺(tái)、接種箱。4光溫控制設(shè)備：時(shí)間程序控制器、空調(diào)及溫度感應(yīng)器。5細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備：培養(yǎng)設(shè)備根據(jù)需要而定，包括培養(yǎng)架、培養(yǎng)箱、搖床、生物反應(yīng)器等。（1）使用過的玻璃器皿應(yīng)立即浸入清水，避免干涸難洗。（2）洗滌劑洗凈后，浸酸性洗液過夜。（3）從酸性洗液撈出后自來水洗凈，蒸餾水刷洗3次，涼干后高壓滅菌。2.3塑料用品洗滌塑料用品一般用合成洗

5、滌劑洗滌，因其附著力較強(qiáng)，因此沖洗時(shí)必須反復(fù)多次，最后用蒸餾水沖洗。2.4橡膠用品的清洗：浸泡，2%NaOH煮沸15分鐘，流水沖洗，1%HCl浸泡30min，流水沖洗，蒸餾水煮沸20min，三蒸水沖洗2~3次，晾干或烘干。2.5金屬用品洗滌金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌，需要清洗時(shí)，一般用酒精擦洗，并保持干燥。（二）滅菌、消毒技術(shù)我們所指的菌，包括細(xì)菌、真菌、放線菌、藻類及其它微生物，這些東西很小，肉眼是根本看不見的，在條件適宜時(shí)它們

6、大量孳生，這時(shí)能看到它們的集合體或形成的菌落，飄散的孢子等等。菌的特點(diǎn)是無孔不入，無處不有，在自然條件下忍耐力強(qiáng)，生活條件要求簡單，繁殖無孔不入，無處不有，在自然條件下忍耐力強(qiáng)，生活條件要求簡單，繁殖能力極強(qiáng)，不采用適當(dāng)?shù)姆椒ê茈y除滅它能力極強(qiáng)，不采用適當(dāng)?shù)姆椒ê茈y除滅它。但是它們也有自身的弱點(diǎn)，我們就采用適當(dāng)?shù)霓k法消滅它們，這些方法我們就叫做滅菌或消毒。物理方法：干熱、濕熱（最有效的一種滅菌方法，主要應(yīng)用范圍是布類、橡膠類、金屬器械、

7、玻璃器皿、某些塑料制品、加熱后不發(fā)生沉淀的無機(jī)溶液。濕熱滅菌時(shí)，滅菌鍋應(yīng)留有30%的空間，不可裝得太滿，否則因壓力與濕度不對(duì)應(yīng)，造成滅菌不徹底。如三角瓶等間隙較大，可以多放一點(diǎn)。）、射線處理（60Co、X射線）、紫外線消毒、過濾、離心沉淀等化學(xué)方法：消毒劑、抗菌素滅菌1培養(yǎng)基滅菌：植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基采用高壓滅菌和過濾滅菌兩種，高壓滅菌通常為121℃，30min。動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)由于用到小牛血清、胰酶和一些生物制劑是有機(jī)溶液，均

8、不能高壓滅菌（如TdR，秋水仙素、谷氨酰胺、異硫氰酸胍等）。只能用濾過除菌。培養(yǎng)基要求比較嚴(yán)格，既要保證滅菌徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，因此不能隨意延長時(shí)間和增加壓力。瓊脂在長時(shí)間滅菌后凝固力會(huì)下降，以致不凝固。2玻璃器皿滅菌：玻璃器皿可任選濕熱和干熱滅菌方法滅菌。濕熱滅菌條件與培養(yǎng)基滅菌條件一致，但要適當(dāng)延長滅菌時(shí)間，一般以25～30分鐘為宜。濕熱滅菌后器皿和包裝表面常常有水蒸氣覆蓋，如果不及時(shí)干燥常常容易微生物的再侵