基于轉錄組學方法研究微囊藻毒素致白鰱肝損傷的作用機制.pdf

1、IIIIIIIHILIHI]IIIL[IIIIIHH!Y3262120河南衙紅大哮碩士學位論文基于轉錄組學方法研究微囊藻毒素致白鰱肝損傷的作用機制學科、專業(yè)：研究方向：申請學位類別：申請人：指導教師：水生蘭物學分子毒理學理學碩士謝文婕李效字教授二。一七年五月摘要IIlrllllIF]ill[rillIIIIrFuIIY3262120藍藻毒素MCLR可對人和動物產(chǎn)生生物毒性，近年來為毒理學研究者所關注。但MCLR的肝毒性機制尚不完全清楚，

2、特別是對白鰱肝損傷機制鮮有報道。本實驗采用第二代轉錄組測序方法，較為全面系統(tǒng)地解析MCLR暴露導致白鰱肝毒性的分子機制，為全面和深入理解MCLR對魚類肝毒性的機制提供理論支撐。本實驗以白鰱為實驗動物，通過改良寇氏法獲得MCLR對白鰱急性毒性的24h半致死劑量LDso(544Itg／kg)。依據(jù)所獲得的LDso，選定高濃度組(200Ltg／kg)、低濃度組(50肛g／kg)及對照組(86％生理鹽水)對白鰱進行腹腔注射急性染毒實驗。通過提取

3、處理組和對照組的白鰱肝臟總RNA，應用IlluminaHiseq4000平臺進行轉錄組測序，采用無參考序列的Denovo組裝，處理組和對照組共產(chǎn)生了超過20Gb的數(shù)據(jù)。本實驗分別對轉錄組數(shù)據(jù)進行差異表達基因的篩選、GO功能分析、KEGGpathway分析，并對差異表達基因進行了qPCR驗證，獲得以下幾個方面的實驗結果。1Der101：o測序結果腹腔注射50肛g／kg和200Itg／kgMCLR處理組和對照組分別獲得轉錄本的總長度為542

4、17023bp、66980128bp、53611308bp：平均長度分別為779bp、830bp、790bp；長度多集中在200400bp，以300bp長度為主，說明樣品片段斷裂隨機性強，符合組裝要求。轉錄本組裝后共得到Unigene數(shù)目分別為50116個、58987個、49383個。將這些轉錄本使用Trinity組裝后得到的Unigene，采用了RPKM方法計算各個基因表達量。根據(jù)統(tǒng)計學差異標準，結果發(fā)現(xiàn)，50pg／kgMCLR處理組

5、與對照組相比共有上調(diào)基因2565個、下調(diào)1831個；200Itg／kgMCLR處理組與對照組相比共有上調(diào)基因7256個、下調(diào)4751個。2差異表達基因的G0功能分析將差異表達基因逐一在GO數(shù)據(jù)庫進行比對分析，注釋比對基因的功能以及參與的生物過程。分析結果發(fā)現(xiàn)，GO重疊群分布在斑馬魚和草魚之間。在GO數(shù)據(jù)庫共注釋了14268個差異表達基因，覆蓋率分別為2067％。MCLR暴露后在白鰱肝臟中差異表達基因主要富集在細胞器、核質(zhì)、細胞膜、大分子