芳香族氨基酸發(fā)酵

1、芳香族氨基酸發(fā)酵的生物合成途徑及代謝調(diào)節(jié)機(jī)制，以及生產(chǎn),目錄,一、芳香族氨基酸性質(zhì)簡介,二、芳香族氨基酸的生物合成途徑,三、芳香族氨基酸的代謝調(diào)控機(jī)制,四、色氨酸發(fā)酵機(jī)制,五、色氨酸的生產(chǎn),六、苯丙氨酸和酪氨酸發(fā)酵機(jī)制,七、苯丙氨酸的工業(yè)生產(chǎn),八、酪氨酸代謝調(diào)控機(jī)制,九、酪氨酸的生產(chǎn),,一、芳香族氨基酸性質(zhì)簡介芳香族氨基酸---------分子中都含有苯環(huán)1、色氨酸 Trp

2、結(jié)構(gòu)式：性質(zhì)：白色至黃白色晶體或結(jié)晶性粉末。 無臭或微臭，稍有苦味。熔點289℃，長時間光照則著色。與水共熱產(chǎn)生少量吲哚。如在氫氧化鈉、硫酸銅存在下加熱，則產(chǎn)生多量吲哚。色氨酸與酸在暗處加熱，較穩(wěn)定。與其他氨基酸、糖類、醛類共存時極易分解。如無烴類共存，與5mol/L氫氧化鈉共熱至125℃仍穩(wěn)定 。用酸分解蛋白質(zhì)時，色氨酸完全分解，生成腐黑物。略溶于水（1.1g/100ml，25℃）。,,2、苯丙氨酸 Phe結(jié)構(gòu)式：

3、性質(zhì)： 苯丙氨酸系統(tǒng)命名為“2-氨基苯丙酸”，是α-氨基酸的一種，具有生物活性的光學(xué)異構(gòu)體為L-苯丙氨酸（L-Phenylalanine）比旋光度為-35.1°。苯丙氨酸是人體必需氨基酸之一，常溫下為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末固體，減壓升華，溶于水，難溶于甲醇、乙醇、乙醚。苯丙氨酸廣泛用于醫(yī)藥和阿斯巴甜的主要原料。L-苯丙氨酸在生物體內(nèi)可被輔酶四氫生物喋呤不可逆地轉(zhuǎn)化為L-酪氨酸（L-Tyrosine），后繼續(xù)分解

4、，經(jīng)轉(zhuǎn)氨基生成少量苯丙酮酸，但先天性苯丙氨酸羥化酶缺陷患者，苯丙氨酸不能羥化生成酪氨酸，苯丙酮酸生成就增多，在血和尿中出現(xiàn)苯丙酮酸，導(dǎo)致智力發(fā)育障礙，稱為苯丙酮尿癥（PKU），故此類患者應(yīng)忌食含苯丙氨酸的食品。,,3、酪氨酸 Tyr結(jié)構(gòu)式：性質(zhì)： 學(xué)名：2-氨基-3-對羥苯基丙酸。一種含有酚羥基的芳香族極性α氨基酸。L-酪氨酸是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸中的一種，是哺乳動物的必需氨基酸，又是生酮和生糖氨基酸。

5、符號：Y。酪氨酸是酪氨酸酶單酚酶功能的催化底物，是最終形成優(yōu)黑素和褐黑素的主要原料。在美白化妝品研發(fā)中，可以通過研究合成與酪氨酸競爭的酪氨酸酶結(jié)構(gòu)類似物也可有效地抑制黑素的生成。白癜風(fēng)患者吃含有酪氨酸的食物可以促進(jìn)黑色素的形成，減輕白癜風(fēng)癥狀。,,二、芳香族氨基酸的生物合成途徑,,生物合成途徑特點：,從4-磷酸赤蘚糖與磷酸烯醇丙酮酸合成3-脫氧-D-阿拉伯糖型庚酮糖-7-磷酸（DAHP）到分支酸，是Phe、Tyr和Trp的共同途徑；

6、 從分支酸到預(yù)苯酸（PPA）， 是Phe和Tyr的共同途徑； 在分枝酸處，傾向于優(yōu)先合成氨茴酸；在預(yù)苯酸處，傾向于優(yōu)先合成對羥苯丙酮酸。即優(yōu)先合成順序是： Trp- Tyr- Phe。,三、芳香族氨基酸的代謝調(diào)控機(jī)制,大腸桿菌中有三種DAHP合成酶谷氨酸棒桿菌中，在芳香族氨基酸生物合成途徑中受調(diào)節(jié)控制的關(guān)鍵酶：DAHP合成酶（DS）、分枝酸變位酶（CM）、預(yù)苯酸脫氫酶（PD）、預(yù)苯酸脫水酶（PT）和氨茴酸合成

7、酶（AS） 黃色短桿菌中有一種DAHP合成酶，代謝調(diào)節(jié)較易控制,,,1、大腸桿菌中芳香族氨基酸生物合成途徑與代謝控制,①DAHP合成酶②分支酸變位酶③PPA脫氫酶④PPA脫水酶⑤氨茴酸合成酶,2、在黃色短桿菌中芳香族氨基酸生物合成的調(diào)節(jié)機(jī)制,,,DS－DAHP合成酶CM－分支酸變位酶PD－預(yù)苯酸脫氫酶PT－預(yù)苯酸脫水酶AS－氨茴酸合成酶,四、色氨酸發(fā)酵機(jī)制,,色氨酸生產(chǎn)菌的遺傳標(biāo)記位置色氨酸代謝調(diào)控機(jī)制（大量生成和積

8、累色氨酸）切斷支路代謝，選育苯丙氨酸和酪氨酸雙重缺陷型（phe-+tyr-）的突變株； 然后遺傳性的解除色氨酸自身的反饋抑制和阻遏及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸對DAHP合成酶的反饋調(diào)節(jié)；選育色氨酸多重結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株；在發(fā)酵過程中限量添加苯丙氨酸和酪氨酸。,五、色氨酸的生產(chǎn),L-色氨酸的生產(chǎn)最早主要是依靠化學(xué)合成法和蛋白質(zhì)水解法制造。隨對微生物法生產(chǎn)色氨酸的研究的不斷發(fā)展，人們開始利用微生物法發(fā)酵生產(chǎn)色氨酸?，F(xiàn)已走向?qū)嵱貌⑶姨幱?/p>

9、主導(dǎo)地位。微生物法大體可分為微生物發(fā)酵法和酶促轉(zhuǎn)化法。近年來還出現(xiàn)了直接發(fā)酵法和化學(xué)合成法，直接發(fā)酵法和轉(zhuǎn)化法相結(jié)合生產(chǎn)色氨酸的研究。另外，基因工程、酶的固定化和高密度培養(yǎng)等技術(shù)在微生物育種和酶工業(yè)上的應(yīng)用極大地推動了直接發(fā)酵法和酶法生產(chǎn)色氨酸的工業(yè)化進(jìn)程。1、蛋白質(zhì)水解法　　L-色氨酸的生產(chǎn)最早主要是依靠蛋白質(zhì)水解法和化學(xué)合成法制造。蛋白質(zhì)水解法是以毛發(fā)、血粉及廢蠶絲等蛋白質(zhì)為原科，通過堿水解法和酶水解法生產(chǎn)L-色氨酸。隨著氨基酸

10、生產(chǎn)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在已很少使用該法生產(chǎn)L-色氨酸。,2、化學(xué)合成法　　化學(xué)合成法就是利用有機(jī)合成和化學(xué)工程相結(jié)合的技術(shù)生產(chǎn)或制備氨基酸的方法。DL-色氨酸的化學(xué)法合成，大致可分為以吲哚為原料的合成法和以苯肼為原料的合成法兩種。Snydcr和MacDonald研究出了一種簡單的合成DL-色氨酸的方法，即在乙酸和乙酸酐的存在下利用吲哚和α-乙酰氨基丙烯酸直接縮合，得到N-乙酞-DL-色氨酸，此物質(zhì)在氫氧化鈉溶液中水解即可得到DL-色氨酸，

11、收率為57.7%。Moe和MacDonald報道以苯肼為原料合成色氨酸，即在乙酸鈉存在下，將丙烯醛和乙酰氨基丙二酸二乙酯縮合，縮合體再與苯肼反應(yīng)而生成苯腙，苯腙在H2S04或BF3水溶液中回流水解，環(huán)化得到化合物3-吲哚基-甲基-乙酰氨基-丙二酸二乙酯，將此化合物水解脫羧可得DL-色氨酸?！　』瘜W(xué)合成法的最大優(yōu)點是在氨基酸品種上不受限制，既可制備天然氨基酸，又可制備各種特殊結(jié)構(gòu)的非天然氨基酸。但這并不意味著具有工業(yè)生產(chǎn)價值，由于合成得

12、到的氨基酸都是DL-型外消旋體，必須經(jīng)過拆分才能得到人體能夠利用的L-氨基酸。故用化學(xué)合成法生產(chǎn)DL-色氨酸時，除需考慮合成工藝條件外，還要考慮異構(gòu)體的拆分與D-色氨酸異構(gòu)體的消旋利用，三者缺一不可。因此，化學(xué)法合成L-色氨酸在工業(yè)上的應(yīng)用也受到一定的限制。,3、酶促轉(zhuǎn)化法　　酶法是利用微生物中L-色氨酸生物合成酶系的催化功能生產(chǎn)L-色氨酸的，能夠利用化工合成的前體物為原料，既充分發(fā)揮了有機(jī)合成技術(shù)的優(yōu)勢，又具有產(chǎn)物濃度高、收率高、純

13、度高、副產(chǎn)物少、精制操作容易等優(yōu)點，是一種成本較低的生產(chǎn)色氨酸的工業(yè)化生產(chǎn)方法。目前在L-色氨酸的生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛。這些酶包括色氨酸酶、色氨酸合成酶、絲氨酸消旋酶等。根據(jù)提供這些酶的微生物種類數(shù)，可以分為雙菌酶法和單菌酶法兩種類型?！　∶复俎D(zhuǎn)化法既可以直接利用高活性色氨酸合成酶、色氨酸酶，或者具有高活性色氨酸合成酶或色氨酸酶的菌體催化L色氨酸的合成，也可以將酶或菌體固定化后進(jìn)行L-色氨酸的合成。菌體和酶固定化后具有提高酶的穩(wěn)定性便于

14、反復(fù)使用，便于實現(xiàn)生產(chǎn)連續(xù)化和自動化等優(yōu)點。,4、微生物發(fā)酵法：微生物發(fā)酵法包括直接發(fā)酵法和添加前體發(fā)酵法。4.1直接發(fā)酵法　　直接發(fā)酵法是以葡萄糖、甘蔗糖蜜等廉價原料為碳源，利用優(yōu)良的色氨酸生產(chǎn)菌株，在合適的發(fā)酵條件下，直接發(fā)酵生產(chǎn)色氨酸。選育高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的色氨酸優(yōu)良菌株是直接發(fā)酵法研究的中心問題．在育種技術(shù)方面，傳統(tǒng)的誘變育種國內(nèi)外進(jìn)行了大量的研究。Shiio等以黃色短桿菌酪氨酸缺陷型、對氟苯丙氨酸(4FP)抗性變異株為出發(fā)菌株，選

15、育5-氟色氨酸(5-FT)抗性變異株No．187，該菌株可產(chǎn)L-色氨酸8．0 g/L。繼續(xù)以No．187為親株選育具有鄰氨基苯甲酸結(jié)構(gòu)類似的重氯絲氨酸(AsaSer)抗性變異株A100，其產(chǎn)酸率提高到lO．3 g/L，再從A-100選育磺胺胍(SG)抗性變異株S-225，其產(chǎn)酸率進(jìn)一步提高到19g/L。國內(nèi)的張素珍等人以亞硝基胍處理北京棒桿菌AS1.299，得到CG45突變株。該菌株具有5MT，6FT，4MP抗性標(biāo)記，且以精氨酸和尿嘧啶

16、為必需生長因子，在含12%葡萄糖的培養(yǎng)基中，30℃振蕩培養(yǎng)5天?？煞e累色氨酸8g/L。該方法研究比較早，但在相當(dāng)長的時間內(nèi)無法達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。主要原因是從葡萄糖到色氨酸的生物合成途徑比較長，其代謝流也比較弱，而且色氨酸的合成需要多種前體物質(zhì)(PRPP、谷氨酰胺、L-絲氨酸等)。,要想進(jìn)一步提高L-色氨酸的產(chǎn)量還必須提高這些前體物的產(chǎn)量。另一方面色氨酸生物合成途徑中的調(diào)節(jié)機(jī)制比較復(fù)雜，除了存在多重反饋調(diào)節(jié)外，還存在著弱化子系統(tǒng)。這使

17、得色氨酸成為氨基酸發(fā)酵工業(yè)中最難發(fā)酵的氨基酸之一．隨著DNA重組技術(shù)的在微生物育種中的應(yīng)用，為優(yōu)良色氨酸菌種的篩選提供了可靠的技術(shù)保證。使得產(chǎn)酸水平逐漸達(dá)到工業(yè)化生產(chǎn)的要求。Katsumata．R等將帶有DAHP合成酶(DS)和色氨酸合成酶(TS) 基因的重組質(zhì)粒引入產(chǎn)L-色氨酸43g/L的谷氨酸棒桿菌KY10-894中，使該工程菌株的L-色氨酸產(chǎn)量達(dá)到了66g/L產(chǎn)酸水平提高了54%。4. 2 添加前體發(fā)酵法　　該法又稱為微生物轉(zhuǎn)

18、化法，它是使用葡萄糖作為碳源，同時添加合成色氨酸所需的前體物(如鄰氨基苯甲酸、吲哚、L-絲氨酸等)，利用微生物的色氨酸合成酶系轉(zhuǎn)化前體來合成L-色氨酸。這種方法很早就投入了工業(yè)化生產(chǎn)，目前世界上最大的色氨酸生產(chǎn)廠家日本的昭和電工公司就是采用以鄰氨基苯甲酸為前體物，利用Hansenula(漢遜氏酵母)或Bacillus(芽孢桿菌)菌種將其轉(zhuǎn)化為色氨酸的生產(chǎn)方法，Yokozcnki等以DL-5-吲哚-甲基海因為原料，利用黃桿菌T-523分解

19、其為色氨酸，可產(chǎn)L-色氨酸7．1 g/L。Fukui等由枯草桿菌選育5-氟色氨酸(5-FT)抗性突變株，在含l%葡萄糖和5%可溶性淀粉培養(yǎng)基中，連續(xù)流加鄰氨基苯甲酸，可積累L-色氨酸9．6g/L。,Nakayarna等進(jìn)一步改造該突變株，使其具有5-FT和8-氮鳥嘌呤(8-AG)雙重抗性，在含10%葡萄糖培養(yǎng)基中，連續(xù)流加鄰氨基苯甲酸，可積累L-色氨酸15．6g/L?！　∥⑸镛D(zhuǎn)化法的不足之處在于當(dāng)轉(zhuǎn)化液中前體物濃度較高時，轉(zhuǎn)化率有所

20、下降，但可以通過分批次少量流加前體減少其抑制作用。另外，前體物價格比較昂貴，不利于降低成本。因此，有人研究利用發(fā)酵法廉價提供一種前體物，再結(jié)合其它方法的優(yōu)勢進(jìn)行色氨酸的生產(chǎn)。Hajimu MOrikota等利用黃色短桿菌P390直接發(fā)酵L-谷氨酸-β-半醛(GSA)達(dá)13．2g/L，然后將發(fā)酵液適當(dāng)稀釋后加入苯肼的1mol/LH2S04溶液中加熱回流1小時之后，48%的GSA可轉(zhuǎn)化為L-色氨酸。SMgeru oita等利用硫辛酸和硫胺素

21、雙重缺陷性菌株Enterobacter aetogene LT-94，在含5%的葡萄糖培養(yǎng)中產(chǎn)丙酮酸30g/L，然后再通過添加吲哚和氯化銨，利用該菌的色氨酸酶酶促轉(zhuǎn)化L-色氨酸16．7%。,生產(chǎn)流程圖：,,六、苯丙氨酸和酪氨酸發(fā)酵機(jī)制,苯丙氨酸代謝調(diào)控機(jī)制首先切斷芳香族氨基酸生物合成向酪氨酸和色氨酸的代謝支路，選育色氨酸和酪氨酸雙重缺陷型（tyr-+trp-）突變株； 然后遺傳性的解除苯丙氨酸自身對預(yù)苯酸脫水酶和分支酸變位酶的反饋抑

22、制和阻遏，及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸對DAHP合成酶的反饋調(diào)節(jié)； 選育苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸多重結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株； 發(fā)酵中限量添加酪氨酸和色氨酸，使苯丙氨酸大量積累。,七、苯丙氨酸的工業(yè)生產(chǎn),1、制備：苯丙氨酸的工業(yè)生產(chǎn)主要有蛋白質(zhì)水解提取法，直接發(fā)酵法，化學(xué)合成等?；瘜W(xué)合成法有苯甲醛法和苯乙醛法。 （1） 苯甲醛法： 以苯甲醛和乙酰甘氨酸作用生成乙酰氨基桂皮酸，然后催化加氫還原，得乙酰-DL-苯丙氨酸，最后經(jīng)氨基

23、?；杆?，可拆分生成本品。 利用氨基?；傅膶Ｒ恍裕凰釧c-L-phe的酰氨鍵，生成本品，而不能水解Ac-D-phe的酰胺。然后根據(jù)本品和Ac-D-phe在水中的溶解度不同進(jìn)行分離。而分離出的Ac-D-phe又可經(jīng)消旋化生成Ac-DL-phe。再一次重復(fù)水解、分離。依次類推，可將Ac-DL-phe全部轉(zhuǎn)化為本品。 固定化氨基?；傅闹苽洌簩EAE-sephadexa-50放入去離子水中充分浸泡后，再依次用1

24、0倍量的0.5mol/LHCl和0.5mol/LNaOH溶液充分?jǐn)嚢杼幚?0min。然后用去離子水洗至中性，最后分別用0.1mol/L及0.01mol/L的pH=7.0的磷酸緩沖液處理1-2h，濾干，備用。取經(jīng)培養(yǎng)40-50h的米麯擴(kuò)大麯，用其6倍量的支離子水分2次提取，提取液用2mol/L的NaOH溶液調(diào)pH至6.7-7.0。然后按100L酶液和1kg濕DEAE-sephadex A-50的比例混合，于0-4℃攪拌吸附4-5h后，過濾

25、取DEAE-sephadexA-50，并分別用去離子水0.1mol/LNaAc溶液、0.01mol/L的pH=7.0的磷酸緩沖液洗滌3-4次。過濾得固定化氨基?；?，加1%甲苯放入冷庫中貯存?zhèn)溆谩?酶水解：在1000L水解罐中，加入700L0.1mol/L的Ac-DL-phe鈉鹽溶液，再逐步加入6mol/L的HCl調(diào)溶液pH至6.7-7.0，再加入15-20kg固定化氨基?；福S持50℃約4h進(jìn)行酶選擇性水解反應(yīng)后，過濾取濾液，得酶水

26、解液(含本品和Ac-D-phe混合液)。 分離：將酶水解液用6mol/L的HCl調(diào)pH至4.8-5.1，減壓濃縮至35L左右，并將其放置于0℃結(jié)晶過夜，過濾取結(jié)晶，用10L冷乙醇洗滌，于80℃烘干3-4h，得本品的粗品，濾液和洗滌液合并，減壓濃縮至20L左右，得Ac-D-phe溶液，待外消旋化后再重復(fù)進(jìn)行酶水解、分離。  Ac-D-phe的外消旋化：將Ac-D-phe溶液60L，加入100L反應(yīng)罐中，加入

27、醋酐18.5L，在25-45℃，攪拌30min，冷卻放置6h。再用濃HCl調(diào)pH值至1.5-2.0，5℃結(jié)晶過夜，過濾取結(jié)晶，水洗，濾干40℃真空干燥，得Ac-DL-phe。  精制：在100L反應(yīng)罐中，加入5kg本品的粗品，加50L去離子水，加熱至100℃，攪拌使其全溶，再加入藥用活性炭0.25kg，攪拌脫色半小時后，趁熱過濾，濾液移入200L結(jié)晶罐中，冷卻至40℃，加入50L，40℃的95%乙醇，用6mol/L的

28、HCl調(diào)pH至5.48，于0℃結(jié)晶過夜，過濾取結(jié)晶，用95%乙醇洗滌，抽干，80℃干燥3-4h，得本品的成品。母液再回收。,（2）、苯乙醛法： 適用Bucherer反應(yīng)，生成苯甲基乙內(nèi)酰脲，然后堿性解得DL-苯丙氨酸(DL-phe)。將DL-phe與醋酐作用生成Ac-DL-phe后，按上述方法進(jìn)行拆分，可得本品。,2.L-苯丙氨酸(63-91-2)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)： 中國藥典2000年版 指標(biāo)名稱

29、 指標(biāo) C9H11O2含量/% ≥98.5 比旋度(20mg/mLH2O) －33.0°～－35.0° 溶液顏色、澄清度

30、 無色澄清 溶液的透光率(0.50g/25mLH2O,430nm)/% ≥98 PH值 5.4～6.0 氯化物/% ≤0.02 硫酸鹽/%

31、 ≤0.02 銨鹽/% ≤0.02 其他氨基酸/% ≤0.02 干燥失重/%

32、 ≤0.2 熾灼殘渣/% ≤0.1 重金屬 ≤0.0002 鐵鹽/% ≤0.001 砷鹽/%

33、 ≤0.0002 熱原 符合規(guī)定,3.貯藏： 密閉保存。 4.注意事項： 可影響甲狀腺激素和毛發(fā)、皮膚的黑色素。最低需求量(mg/kg·d)：成年男子31，幼兒169。 5.L-苯丙氨酸(63-91-2)的推薦用

34、量：　　(1)占食品中總蛋白量的5.8%?！　?2)FEMA(mg/kg)：焙烤食品110；冷凍乳品60.0；肉制品10.0；軟糖268；明膠、布丁60.0；乳制品66.0；調(diào)味品10.0；糖果和糖霜268；甜沙司220。,6.鑒定試驗：　　(1)取本品的水溶液(1→1000)5mL，加重鉻酸鉀溶液(1→1000)1mL煮沸，產(chǎn)生特有的臭氣②。 　　(2)取本品水溶液(1→1000)5mL，加茚三酮試液1mL，加熱3min，呈現(xiàn)

35、紅紫～藍(lán)紫色?！　?3)取本品10mg，加硝酸鉀0.5g及硫酸2mL，水浴加熱20min后，加鹽酸羥胺溶液(1→10)5mL，在冰水中放置10min冷卻后，立即加40%氫氧化鈉溶液8mL，放置，呈現(xiàn)紅紫色③。熔點 270-275 °C7.L-苯丙氨酸(63-91-2)的純度試驗： (1)溶解性：將本品0.2g溶于20mL水中，無色，其濁度應(yīng)在透明以下。 (2)酸堿性：本品水溶液(1→100)的pH值用

36、玻璃電極法測定必須是5.4～6.0④。 酸度 取本品0.20g，加水20ml溶解后，依法測定（附錄Ⅵ H），pH值應(yīng)為5.4-6.0。 (3)比旋光度：本品在105℃干燥3h后，精確稱量約1g，溶在水中至50mL，測定此液旋光度必須是-33～-35℃。 (4)氯化物：取本品0.5g，進(jìn)行氯化物的常規(guī)試驗，其量在0.01mol/L鹽酸0.3mL對應(yīng)量以下⑤。,(5)銨鹽：按"L-天門冬氨酸鈉"的純度試

37、驗(5)進(jìn)行，但氨標(biāo)準(zhǔn)溶液用2mL⑥。 (6)砷：取本品0.5g，加2mol/L鹽酸10mL，作為檢液進(jìn)行砷的常規(guī)試驗，應(yīng)符合要求⑦。 (7)重金屬：取本品1g，加稀醋酸2mL及水40mL溶解，作為檢液進(jìn)行重金屬的常規(guī)試驗，其量必須在0.002%以下⑧。 (8)其它氨基酸：按"L-天門冬氨酸鈉"的純度試驗(8)進(jìn)行⑨。 (9)干燥失重：本品在105℃干燥3h，失重應(yīng)在0.3%以

38、下。 (10)強(qiáng)熱殘留物：本品的強(qiáng)熱殘留物應(yīng)在0.1%以下。 非水滴定 (11)定量法：本品在105℃干燥3h后，精確稱量約0.3g，以下按"DL-丙氨酸"的定量法進(jìn)行。0.1mol/L高氯酸溶液1mL=16.52mg的C9H11NO2 溫度 0℃ 20℃ 40℃ 60℃ 80℃ 100℃ 溶解度 1.98 2.74 3

39、.77 5.20 7.18 9.90 含量測定: 取本品約0.13g，精密稱定，加無水甲酸3ml溶解后，加冰醋酸50ml，照電位滴定法（附錄Ⅶ A），用高氨酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于16.52mg的C9H11NO2。,L苯丙氨酸紅外測定羧基吸收峰：1600 ㎝-1 羧酸負(fù)離子吸收峰：1720

40、㎝-1 溶液的透光率 取本品0.50g，加水25ml溶解后，照紫外-可見分光光度法（附錄Ⅳ A），在430nm的波長處測定透光率，不得低于98.0%。,注 解 　?、俦酒穼λ娜芙舛?g/dL)如上： 　?、诒奖彼嵊弥乩宜徕浹趸鹈摪?、脫碳酸生成苯乙醛。此物有風(fēng)信子樣的香氣，故可用于鑒別苯丙氨酸。 　?、蹖⒈奖彼嵯趸趬A性條件下與羥胺作用使其發(fā)色。可用作定量法(→定量)。 　?、鼙酒返慕怆x常數(shù)pKCOOH=

41、1.83 pKNH3+=9.13，pI=5.48。 　　⑤Cl的限量是0.021%。 　?、轓H4的限量是0.02%。 　?、逜s2O3的限量是2ppm。 　?、郟b的限量是20ppm。 　?、嵩诒緱l件下苯丙氨酸的Rf值約0.61。其它的氨基酸的檢測界限，在酸性、中性氨基酸中大約是0.05～0.1μg。 8.其他： ①疏水參數(shù)計算參考值(XlogP)：-1.5； ②氫鍵供體數(shù)量：2； ③氫

42、鍵受體數(shù)量：3； ④可旋轉(zhuǎn)化學(xué)鍵數(shù)量：3； ⑤拓?fù)浞肿訕O性表面積(TPSA)：63.3; ⑥重原子數(shù)量：12。,八、酪氨酸代謝調(diào)控機(jī)制 1、首先切斷芳香族氨基酸生物合成向色氨酸和苯丙氨酸的代謝支路，選育；色氨酸和苯丙氨酸雙重缺陷型（ Phe -+trp-）突變株； 2、 然后遺傳性的解除酪氨酸自身的反饋抑制和阻遏， 及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸對DAHP合成酶的反饋調(diào)節(jié)； 3、選育苯丙氨酸、酪氨酸和色氨

43、酸多重結(jié)構(gòu)類似物抗性突變株； 4、發(fā)酵中限量添加苯丙氨酸和色氨酸，使酪氨酸大量積累。,九、酪氨酸的生產(chǎn)1、由含蛋白質(zhì)的物質(zhì)（廢絲、酪蛋白和玉米等）水解液中提??；2、以葡萄糖為原料，經(jīng)短桿菌出發(fā)誘導(dǎo)的l-酪氨酸生產(chǎn)菌發(fā)酵而得；3、以苯酚、丙酮酸、氨為原料，利用β-酪氨酸酶催化制取。,參考文獻(xiàn)：1、芳香族氨基酸和其他氨基酸發(fā)酵機(jī)制（百度文庫）2、氨基酸（百度文庫）3、張克旭，氨基酸發(fā)酵工藝學(xué). 中國輕工業(yè)出版社，20024