流式細胞術在臨床中的應用描述

1、流式細胞術在臨床中的應用,馬雷,流式細胞術,20世紀60年代末發(fā)展起來的細胞定性和定量的技術。通過收集激光照射到細胞后的散射光信號和熒光信號反映細胞的物理化學特征，并且根據(jù)細胞的物理化學特征分選得到感興趣的細胞。,流式細胞儀構造模式圖,液流系統(tǒng)光學系統(tǒng)電子系統(tǒng)分選系統(tǒng),細胞與分子生物學、流體力學、電磁理論和生物技術、激光技術、熒光技術、光電子技術、單克隆抗體技術、計算機技術、納米技術等。流式細胞術是現(xiàn)代科學技術發(fā)展的綜合交叉的

2、產物，是集多種技術發(fā)展于一體的“大成者”。,涉及多種學科及技術,,,,,,流式在腫瘤學中的應用,1、JY細胞周期與DNA倍體分析,標本類型： 胸水和腹水 血液標本 組織塊標本,原理,臨床意義：腫瘤的早期診斷與鑒別良惡性胸腔積液和腹水的鑒別診斷用于臨床腫瘤治療效果監(jiān)測用于臨床抗腫瘤治療時藥物的選擇用于早期淋巴瘤的診斷用于良性腫瘤與中

3、低度惡性腫瘤的鑒別用于腫瘤患者的預后判斷,流式在腫瘤學中的應用,2、JY細胞凋亡分析標本類型： 胸水和腹水 血液標本 組織塊標本,原理,,,,臨床意義： 用于臨床抗腫瘤療效監(jiān)測 早期凋亡細胞百分數(shù)是臨床抗腫瘤治療有效的較早期評價指標,流式在腫瘤學中的應用,3、JY腫瘤多藥耐藥基因CD243檢測標本類型：胸腔積液腹水組

4、織標本貼壁培養(yǎng)細胞,,原理： 化療藥物對腫瘤細胞的殺傷作用，依賴于進入細胞內部的藥物濃度的高低。多藥耐藥基因-1是一種糖蛋白，編號為CD243。這種糖蛋白可以大量捕獲進入細胞內部的化療藥物，并將其“搬出”細胞。使細胞內部化療藥物濃度降低，造成藥物對瘤細胞的殺傷作用降低或消失，最終出現(xiàn)耐藥性現(xiàn)象。,,臨床意義：了解瘤細胞CD243表達水平，如果是高表達，提示化療療效可能很差，宜采取放療。如果瘤細胞CD243表達水平很低或不能檢

5、出，化療過程中建議定期監(jiān)測瘤細胞CD243水平。輔助判斷預后。,流式在免疫學中的應用,4、JY淋巴細胞亞群標本類型： 靜脈血臨床意義可將淋巴細胞分類為,,臨床意義B細胞減少見于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下、嚴重的病毒感染等情況。 B細胞增高，提示機體體液免疫功能被增強，見于臨床各種細菌性感染。及B細胞白血病。NK細胞數(shù)量是腫瘤臨床病情判斷、療效監(jiān)測的指標。NK細胞減少見于腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、柯薩奇病

6、毒等。,流式在免疫學中的應用,5、JY總T、T4、T8淋巴細胞標本類型： 靜脈血,臨床意義T4增高，主要見于臨床各種細菌性感染性疾病。T4降低，主要見于臨床各種病毒感染性疾病。有助于艾滋病的診斷、疾病分期判斷和療效監(jiān)測。,正常人,HIV感染者,AIDS病人,T8增高，多見于HBV、巨細胞病毒（CMV）、人類皰疹病毒 （EB）及結核桿菌感染。CD8+CD38+ 亞群是疾病進展和病毒復制的預測指標。T8減低，多見于r免疫球

7、蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良和糖尿病等。,AIDS病人,HIV感染者,正常人,流式在免疫學中的應用,6、JY輔助性T細胞 （ Th ）和誘導性T細胞（Ti）檢測臨床意義：Th細胞（CD4+CD29+）減少見于免疫缺陷、嚴重感染、腫瘤患者，可作為腫瘤診斷及療效監(jiān)測的指標。增多見于各種感染。Ti細胞（CD4+CD29-）具有誘發(fā)免疫應答的功能。,流式在免疫學中的應用,7、JY效應T細胞（Th1、Th2）檢測8、JY調節(jié)性T細胞檢測9、

8、JY輔助性T 細胞17(Th17)檢測,CD4+T細胞亞群的分化與細胞因子的關系,TH1/TH2,自身免疫病,,,參與,拮抗,天然TREG細胞在免疫系統(tǒng)中的作用,平衡狀態(tài)：既可有效清除外來病原體，又可避免過度的炎癥反應。,,缺乏調節(jié)性T細胞：免疫反應過度，造成自身免疫病、哮喘、過敏反應、移植排斥、流產等。,過多的調節(jié)性T細胞：免疫反應低下，無法有效清除病原體及腫瘤，造成感染及癌癥。,,,,,,Th17 細胞參與炎性反應和宿主

9、抗胞外病原體反應。作為可分泌IL-17A的Th的一個亞群，Th17 在自身免疫病發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。臨床意義Th17細胞釋放的I L - 1 7 可引發(fā)自身免疫性腦炎(EAE)、哮喘、類風濕性關節(jié)炎(RA)等自身免疫性疾病。,流式在細菌感染疾病中的應用,10、JY中性粒細胞膜表面CD64檢測標本類型： 靜脈血原理： 無論胞內或胞外細菌感染，都會引起CD64特異性增高。臨床意義： 查閱中、外文

10、獻，發(fā)現(xiàn)中性粒細胞膜表面CD64檢測與CRP、PCT、中性粒細胞計數(shù)相比，可以提高對感染和膿毒血癥的檢出率，且具有早期診斷價值，靈敏度和特異性均較高。,,CD64分析可以更好區(qū)分感染性與非感染性炎癥反應，診斷急性感染和全身感染的靈敏度和特異性較高門、急診患者細菌感染的篩查和預后判斷細菌性感染與非細菌性感染的鑒別診斷術后感染與應激反應的鑒別診斷感染患者的抗生素治療監(jiān)測，指導抗生素用藥,流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,11、JY紅細

11、胞表面相關免疫球蛋白（EAIg）檢測臨床意義：陽性見于臨床免疫性溶血性貧血（IHA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病。用于IHA的鑒別診斷與亞型分類用于新生兒溶血性疾病的監(jiān)測,流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,12、JY粒細胞表面相關免疫球蛋白（GAIg）檢測臨床意義：用于自身免疫性白細胞減少癥的鑒別診斷與亞型分類,流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,13、JY血小板表面相關免疫球蛋白（PAIg）檢測臨床意義：用于臨床特發(fā)性血小板減少性

12、紫癜（ITP）的篩查與診斷,流式在強直性脊柱炎鑒別診斷中的應用,14、JY強直性脊柱炎相關抗原HLA-B27檢測標本類型：靜脈血（2~3ml）原理：HLA-B27是脊柱關節(jié)病病因及發(fā)病機制的關鍵已經被廣泛認同，各種假說均支持患者由于存在HLA-B27的高表達引起了體內異常的免疫應答，從而導致了脊柱關節(jié)病的發(fā)生。臨床意義：用于強直性脊柱炎的輔助診斷與鑒別診斷用于臨床強制性脊柱炎高危人群的篩查,流式在造血干細胞移植中的應用,15、

13、JY靜脈血造血干細胞計數(shù)標本類型：靜脈血2ml原理：造血干細胞表達CD34而不表達CD38，造血祖細胞既表達CD34也表達CD38。利用單克隆抗體，臨床流式技術可以很輕松對造血干細胞計數(shù)。臨床意義：用于臨床進行干細胞采集前，對捐獻者動員后外周血干細胞的動員效果進行監(jiān)測和是否實施單采的時機判斷。用于貧血的鑒別。再障屬于干細胞受累，其靜脈血中的干細胞數(shù)量明顯減少。而缺鐵性等貧血干細胞數(shù)量正常。,流式在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥中的應

14、用,16、JY陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥單克隆檢測標本類型：靜脈血（2~3ml）原理：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）是一種補體介導的以血管內溶血為主要特征的獲得性造血干細胞克隆性疾病。主要特征是血細胞膜上的錨蛋白減少甚至消失。通過測定紅細胞表面標志物CD235a、錨蛋白CD59和能與中性粒細胞膜表面錨蛋白結合的FLAER，發(fā)現(xiàn)百分之一的PNH細胞克隆，是一種非常靈敏、特異的方法。臨床意義：用于PNH的診斷與鑒別診斷用于貧血的鑒