異基因造血干細(xì)胞移植患者CMV特異性CTL的檢測(cè)研究.pdf

1、目的：巨細(xì)胞病毒(CMV)是皰疹病毒科β屬的DNA病毒，在自然界中廣泛存在，正常人群中自然感染普遍。在免疫功能正常的人群中，通常在產(chǎn)生輕的、無(wú)癥狀感染后，病毒處于潛伏狀態(tài)，稱(chēng)CMV潛伏感染。然而對(duì)異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)患者而言，由于預(yù)處理中的大劑量放/化療以及移植后移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生和免疫抑制劑的應(yīng)用，使機(jī)體的免疫功能受到嚴(yán)重破壞，包括對(duì)CMV特異性的細(xì)胞免疫，從而使機(jī)體無(wú)法清除體內(nèi)激活的CMV，導(dǎo)致C

2、MV活動(dòng)性感染和CMV疾病。雖然有抗病毒藥物如更昔洛韋、磷甲酸鈉等的應(yīng)用，allo-HSCT后CMV疾病的發(fā)病率仍高達(dá)5％-18％，病死率30％-50％，仍然是移植后的重要死亡原因之一。 既往對(duì)患者移植后細(xì)胞免疫重建的研究主要局限于T細(xì)胞及其亞群數(shù)量的重建，以及近年來(lái)利用定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)T細(xì)胞中的T細(xì)胞受體重組刪除環(huán)(TREC)出現(xiàn)的頻率，從而評(píng)估HSCT后胸腺功能，也是臨床一種較可靠的觀(guān)察細(xì)胞免疫功能重建情況的檢

3、測(cè)手段。但是T細(xì)胞及其亞群數(shù)量的重建只是細(xì)胞免疫重建的一部分，而T細(xì)胞功能的重建對(duì)評(píng)估移植后細(xì)胞免疫重建更為重要。既往多采用T細(xì)胞增殖試驗(yàn)和T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子等手段來(lái)測(cè)定T細(xì)胞功能，這些檢測(cè)結(jié)果僅能粗略評(píng)估T細(xì)胞在非特異性細(xì)胞免疫方面的功能。 機(jī)體對(duì)CMV的清除主要依賴(lài)細(xì)胞免疫，尤其是CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)對(duì)感染細(xì)胞的殺傷來(lái)完成，故CTL在抗CMV感染中起重要作用。如何更加精確的評(píng)估移植后患者對(duì)CMV特異性細(xì)胞免

4、疫狀態(tài)，對(duì)指導(dǎo)抗CMV治療有現(xiàn)實(shí)意義，有助于避免對(duì)所有移植后患者常規(guī)持續(xù)給予抗CMV藥物而影響CMV特異性細(xì)胞免疫重建，并可以指導(dǎo)合理撤減免疫抑制劑和應(yīng)用特異性免疫增強(qiáng)劑，對(duì)移植患者移植后CMV感染的防治策略的調(diào)整和預(yù)后監(jiān)測(cè)，具有重要的臨床意義。為了監(jiān)測(cè)CMV特異性CTL的活性及其介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，以便對(duì)移植患者移植后的CMV特異性細(xì)胞免疫狀態(tài)有直觀(guān)準(zhǔn)確的了解，這就需要直接對(duì)CMV特異性CTL的檢測(cè)(包括細(xì)胞的數(shù)量、功能及

5、活性狀態(tài))，而不能僅僅依靠檢測(cè)T細(xì)胞及其亞群數(shù)量重建和評(píng)價(jià)非特異性細(xì)胞免疫功能的這些一般性的方法和技術(shù)。 本課題擬通過(guò)MHCⅠ類(lèi)分子-抗原肽復(fù)合物多聚體法和ELISPOT兩種方法，檢測(cè)CMV特異性CTL數(shù)量和功能，了解allo-HSCT患者移植后CMV特異性T細(xì)胞重建的變化規(guī)律，以求輔助預(yù)測(cè)allo-HSCT患者移植后CMV易感的可能性，指導(dǎo)臨床醫(yī)師對(duì)CMV易感的高?；颊呓o予及時(shí)的、適當(dāng)?shù)念A(yù)防性治療，避免對(duì)所有移植后患者常規(guī)持續(xù)

6、給予抗CMV藥物，為臨床制定合理的CMV感染防治方案提供依據(jù)。 結(jié)論： (一)本研究采用的五聚體法檢測(cè)健康供者HLA-A2限制性CMVpp65495-503特異性CTL的絕對(duì)值和比例略高于國(guó)外類(lèi)似報(bào)道，供者CMV-Ag(+)對(duì)受者移植后的CMV特異性CTL重建有可能是一個(gè)正面因素。 (二)本組患者HLA-A2限制性CMVpp65495-503特異性CTL在移植后12月內(nèi)呈持續(xù)增長(zhǎng)的趨勢(shì)，其中3～6月期內(nèi)增長(zhǎng)較快，