儀器分析新

1、尿微量清蛋白（MAU） ——P205 Β2—微球蛋白（ Β2— MG） ——P209α1—微球蛋白（ α1— MG） ——P212 BJP ——P202 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG) 溶菌酶 尿淀粉酶(AMY) HCG,,,,,目前常見的臨床檢查模式,參考值,尿流式沉渣檢查 [/μL] 尿紅細(xì)胞數(shù) U-RBC 0-25尿白細(xì)胞數(shù) U-WBC 0-30 尿上皮細(xì)胞數(shù) U-

2、EC 0-15尿管型數(shù) U-CAST 0-0.7尿細(xì)菌數(shù) U-BACT 0-6000 病理管型 U-Path.CAST 0.0小圓上皮細(xì)胞 U-SRC 0.0 類酵母樣菌 U-YLC 0.0 結(jié)晶U-X`TAL 0.0紅細(xì)胞信息 U-RBC info 非溶血紅細(xì)胞數(shù)量 U-Nlysed# 非溶血紅細(xì)胞百分比 U-Nlysed%,尿干化學(xué)檢查pH

3、 4.6～8.0蛋白質(zhì) PRO －葡萄糖GLU －酮體KET －尿膽原UBG +－膽紅素BIL －亞硝酸鹽NIT －紅細(xì)胞ERY － 白細(xì)胞LEU －比密SG 1.015～1.025VitC <0.6mmol,鏡檢結(jié)果紅細(xì)胞RBC:0～3/HP 白細(xì)胞WBC:0～5/HP 上皮細(xì)胞EC: 少 結(jié)晶CRYSTAL:

4、 少管型CAST: 0～偶見/LP,?尿比重 ?尿酸堿度 ?尿白細(xì)胞 ?尿蛋白質(zhì) ?尿亞硝酸鹽,?尿葡萄糖?尿酮體?尿膽原?尿膽紅素?尿紅細(xì)胞,尿液干化學(xué)分析,尿液的酸度(PH)比密(SG)蛋白質(zhì)(PRO)葡萄糖(GLU)酮體(KET)膽紅素(BIL)尿膽原(UBG)亞硝酸鹽(NIT)白細(xì)胞(LEU)紅細(xì)胞/隱血(Hb)維生素C(Vitc),,,反應(yīng)模塊,尼龍膜：防止大分子物質(zhì)對反應(yīng)的污染；

5、絨制層：包括碘酸鹽層和試劑層： 碘酸鹽層可以破壞維生素C等干擾物質(zhì)， 試劑層含有試劑成分，主要與尿液中測定物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化；吸水層：可使尿液均勻快速的浸入，并能抑制尿液流到相鄰的反應(yīng)區(qū)；塑料底層：作支持體。,,,,,尼龍膜 碘酸鹽層 試劑層 吸水層 塑料底層,,空白塊：用于消除尿自身顏色在

6、試劑塊上產(chǎn)生顏色的干擾。,尿液分析試紙,項目 縮寫符號 反應(yīng)原理酸堿度 pH pH指示劑蛋白質(zhì) PRO pH指示劑的蛋白質(zhì)誤差法葡萄糖 GLU 葡萄糖氧化酶法隱血 BLD Hb類過氧化物酶法膽紅素 BIL 偶氮反應(yīng)法尿膽原 URO 醛反應(yīng)

7、法酮體 KET 硝基鐵氰化鈉法亞硝酸 NIT 亞硝酸鹽還原法白細(xì)胞 LEU 酯酶法比密 d（SG） 多聚電解質(zhì)離子解離法抗壞血酸 ASG 吲哚酚法,,,,尿干化學(xué)試紙按功能分組,模塊組合1：比密、蛋白質(zhì)、紅細(xì)胞、 白細(xì)胞：與腎臟疾病相關(guān)模塊組合2：白細(xì)胞、紅細(xì)胞、亞硝酸鹽：

8、 與泌尿系感染性疾病有關(guān)模塊組合3：比密、葡萄糖、酮體： 與內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病有關(guān)模塊組合4：膽紅素、尿膽原： 與肝膽系統(tǒng)疾病有關(guān)模塊組合5：pH、比密、維生素C： 對干化學(xué)實驗的影響監(jiān)測。,按檢測項目分 8項：pH、PRO、GLU、KET、 BIL、URO、BLD、NIT9項： 8項 + LEU10項：9項 + SG11項：10項

9、 + VitC12項：11項 + 顏色或透明度,組合型試帶,腎病型四聯(lián)試帶：pH、蛋白、隱血、比密糖尿病型五聯(lián)試帶：pH、蛋白、葡萄糖、 酮體、比密肝臟病型二聯(lián)試帶：膽紅素、尿膽原,浸漬試帶條 將多聯(lián)試帶完全浸入尿液1～2s，然后立即取出。瀝去多余尿液 沿試管壁將試帶上多于尿液去盡。檢測標(biāo)本 將試帶置于儀器檢測槽內(nèi)，直至儀器自動打印出報告。,尿干化學(xué)分析試帶及結(jié)果判斷,各種尿干化

10、學(xué)分析儀,一、尿液分析儀儀器檢測原理 儀器采用球面積分儀接受雙波長反射光，測定試劑帶上的顏色變化進(jìn)行半定量測定。 試劑帶上有數(shù)個含各種試劑的試劑墊，各自與尿中相應(yīng)成分進(jìn)行獨(dú)立反應(yīng)，而顯示不同顏色，顏色的深淺與尿液中某種成分的含量成比例關(guān)系。 試劑帶中還有另一個“補(bǔ)償墊”，作為尿液本底顏色，對有色尿液所產(chǎn)生的誤差進(jìn)行補(bǔ)償。,測定波長：是被測試劑塊的敏感特征波長；參考波長：是被測試劑塊的不敏感的波長，用以消除背景

11、光和其它雜散光的影響。 照射光波長的選擇由檢測項目決定。 亞硝酸鹽、酮體、膽紅素、尿膽原的測定波長為550nm；PH、葡萄糖、蛋白質(zhì)、維生素C、潛血的測定波長為620nm； 參考波長為720nm。,計 算 原 理 R(%):反射率Tm:試劑墊對測定波長的反射強(qiáng)度Ts:試劑墊對參考波長的反射強(qiáng)度Cs:標(biāo)準(zhǔn)墊對參考波長的反射強(qiáng)度 Cm:標(biāo)準(zhǔn)墊對測定波長的反射強(qiáng)度,尿液自動分析儀結(jié)構(gòu)圖,,,,,,,

12、,,,CPU,,,,,,,,尿液分析儀由：機(jī)械系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電路系統(tǒng)三部分組成。,,（二） 光電系統(tǒng)結(jié)構(gòu)圖,四、尿液分析儀結(jié)構(gòu),返回本節(jié)目錄,尿液試紙條urinary reagent strip,,,,,,光源,接收器,(二)試帶使用注意事項,1. 嚴(yán)格按操作說明書要求進(jìn)行操作；2. 試帶要在有效期內(nèi)使用；3. 試帶從冷藏變成室溫前不要打開瓶蓋，用后蓋緊瓶蓋；開過蓋的試帶瓶不建議放在冷藏溫度，可放陰涼

13、、干燥、避光處。4.禁止用手觸摸試劑區(qū)， 5. 不同廠家的同類試紙，其原理、方法、結(jié)果不相同，不可混用。,尿干化學(xué)方法學(xué)評價,優(yōu)點(diǎn)：操作簡便、快速、同時獲得多項結(jié)果。缺點(diǎn)：影響因素多，必須結(jié)合尿理學(xué)檢查、顯微鏡 檢查，互相驗證、綜合分析目前國內(nèi)采用方法： 干化學(xué)法LEU、BLD、PRO、NIT四項皆（-），可不鏡檢。其中任一項出現(xiàn)異常時，則必須鏡檢。注意事項： ①以尿沉渣作為診斷依據(jù)

14、或觀察療效時，不宜用干化學(xué)過篩（腎臟病、內(nèi)分泌病、免疫病等） ②臨床醫(yī)生要求的；,(三) 試紙分析的假陽性和假陰性,1.尿中含高濃度VC,可使試紙法葡萄糖和隱血結(jié)果呈假(一);2.尿蛋白試紙是利用PH指示劑的蛋白質(zhì)誤差原理,白蛋白的反應(yīng)性最強(qiáng),球蛋白的反應(yīng)性弱。3.某些藥物（如氯丙嗪、酚噻嗪、吩嗪類藥物）可使尿BIL、URO等呈假（+）；4.尿PH超過8.0以上，PRO呈假(+)；,三、    干化

15、學(xué)分析儀的局限性,1. 試劑條的因素 2. 尿本身的因素：如標(biāo)本采集不不合 格等 3. 操作原因：如儀器的校準(zhǔn)、維護(hù)、環(huán)境溫度。 4. 皆為定性分析，只能做過篩試驗。其次是不能檢測尿有形成分，因而不能代替尿沉渣檢查。,尿液結(jié)果分析：,尿沉渣分析儀,尿沉渣分析儀,,尿沉渣分析儀是用顯微鏡或?qū)Ｓ迷O(shè)備對尿液有形成分檢查的儀器，擺脫了繁瑣和費(fèi)時的操作程序，做到尿沉渣分析的標(biāo)準(zhǔn)化、自動化。目前使

16、用的尿沉渣分析儀，主要有：圖像識別法、流式細(xì)胞儀法，以及尿液分析工作站等幾種類型。,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)及特殊熒光染色的原理，將尿標(biāo)本染色后進(jìn)入鞘液流動池時，每個有形成分單個縱列通過流動池中心軸線，每個粒子均被氬激光光束照射，并各自發(fā)出不同的熒光強(qiáng)度(信號)。信號表達(dá)為3類：即前向散射光、熒光和電阻抗。,（一）流式細(xì)胞式尿沉渣分析儀,流式細(xì)胞式尿沉渣分析儀原理,,激光束 (?=488m),熒光強(qiáng)度fl：,,前向散射光強(qiáng)度：

17、細(xì)胞大小,RND、DNA強(qiáng)度,前向散射光脈沖寬度：細(xì)胞長度,熒光脈沖寬度(F1w)：細(xì)胞染色質(zhì)長度,電阻抗：反映細(xì)胞體積,流式細(xì)胞式尿沉渣分析儀原理,前向散射光強(qiáng)度(Fsc)：細(xì)胞大小 前向散射光脈沖寬度(Fscw)：細(xì)胞長度熒光信號 熒光強(qiáng)度(Fl)：細(xì)胞染色質(zhì)(DNA/RNA)的強(qiáng)度 熒光脈沖寬度(Flw)：

18、細(xì)胞大小電阻抗：反映細(xì)胞體積,前向散射光信號,,,儀器將這種熒光，散射光和電阻抗的信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺C合分析這些電信號，得出細(xì)胞大小、長度、染色強(qiáng)度和染色部分長度以及細(xì)胞的體積資料，并給出每類細(xì)胞的散射圖和直方圖，并計算出每微升尿中各種細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行報告。,UF-100尿沉渣分析系統(tǒng)散點(diǎn)圖,,細(xì)胞大小,細(xì)胞長度,熒光脈沖寬度,前向散射光脈沖寬度,UF-100尿沉渣分析系統(tǒng)散點(diǎn)圖,,細(xì)胞大小,染色質(zhì)強(qiáng)度,前向散射光強(qiáng)度,熒光強(qiáng)度,流式細(xì)

19、胞術(shù)尿沉渣分析儀檢測參數(shù),紅細(xì)胞(RBC) 均一性紅細(xì)胞（Isomorphic RBC）% 非均一性紅細(xì)胞（Dysmorphic RBC）% 非溶血性紅細(xì)胞數(shù)量（Non-Lysed RBC#） 非溶血性紅細(xì)胞百分比（Non-Lysed RBC%）白細(xì)胞（WBC）上皮細(xì)胞（EC）、小圓上皮（SRC）管型（CAST）,病理管型（Path.CAST）細(xì)菌（BACT）酵母細(xì)

20、胞（YLC）精子細(xì)胞（SPERM）結(jié)晶（X’TAL）尿液電導(dǎo)率（conductivity）,RBCP70 70%紅細(xì)胞位置 提示：以未溶解的RBC為100%時，70%紅細(xì)胞的平均體積。NLRBC% 未溶解RBC百分比 提示：完整RBC的百分比（不包含影形RBC，RBC碎片，皺縮紅細(xì)胞）。,RBC INF 紅細(xì)胞信息 提示：RBC來源。,Microcytic (不均一小紅細(xì)胞)? 提

21、示紅細(xì)胞源于腎小球Normocytic (正常均一紅細(xì)胞)? 提示紅細(xì)胞非來源于腎小球Non classified (未分類型)? 提示混合型紅細(xì)胞細(xì)胞 Negative 提示紅細(xì)胞計數(shù)正常,病例1：男，29歲，,尿干化學(xué)檢查pH 5.0蛋白質(zhì) PRO －葡萄糖GLU －酮體KET －尿膽原UBG －膽紅素BIL －亞硝酸鹽NIT －紅細(xì)胞E

22、RY +++白細(xì)胞LEU －比密SG 1.015VitC <0.6mmol,尿流式沉渣檢查U-RBC 1440.2 U-WBC 5.9U-EC 1.5 U-CAST 0.13U-BACT 132.6U-Path.CAST 0.0U-SRC 0.0 U-YLC 0.0U-X`TAL 171.6 U-RBC info Is

23、omorphic?U-Nlysed# 1431.3 [/μL] U-Nlysed% 99.3[%],鏡檢結(jié)果WBC:0～3/HP RBC:滿視野/HP,腎結(jié)石,病例2：男，81歲，,鏡檢結(jié)果WBC:滿視野/HP RBC:10～20/HP EC:2～8/HP,急性膀胱炎,尿干化學(xué)檢查pH 7.0蛋白質(zhì) PRO +－葡萄糖GLU －酮體KET －尿膽原UBG +－

24、膽紅素BIL －亞硝酸鹽NIT +紅細(xì)胞ERY +白細(xì)胞LEU +++比密SG 1.010VitC <0.6mmol,尿流式沉渣檢查U-RBC 195.9 U-WBC 1509.8U-EC 74.3 U-CAST 1.15U-BACT 1025.0U-Path.CAST 0.2U-SRC 2.0 U-YLC 0.0U-X`

25、TAL 7.6 U-RBC info Isomorphic?U-Nlysed# 177.9 [/μL] U-Nlysed% 90.8[%],病例3.男，25歲，,鏡檢結(jié)果WBC:5～10/HP RBC:10～20/HP EC:滿視野/HP 透明管型:滿視野/LP 顆粒管型:滿視野/LP,腎小球腎炎,尿干化學(xué)檢查pH 6.5蛋白質(zhì) PRO ++葡萄糖GLU －酮體KET

26、 －尿膽原UBG +－膽紅素BIL －亞硝酸鹽NIT －紅細(xì)胞ERY +白細(xì)胞LEU +比密SG 1.010VitC <0.6mmol,尿流式沉渣檢查U-RBC 141.5 U-WBC 97.0U-EC 602.3 U-CAST 118.39U-BACT 2090.7U-Path.CAST 38.9U-SRC 18.2 U-

27、YLC 0.0U-X`TAL 0.0 U-RBC info Isomorphic?U-Nlysed# 14.8 [/μL] U-Nlysed% 10.4[%],治療前后散點(diǎn)圖對比,,病 例,張某，男，39歲，急性腎小球腎炎。圖示該患者尿液標(biāo)本UF-100分析儀測試結(jié)果。尿干化學(xué)分析結(jié)果：SG： 1.025 KET： neg NIT： negLEU：25/μl

28、 BIL： neg GLU： norm PRO：5.0g/L pH： 7.0 UBG： norm ERY：250 /μl 鏡檢結(jié)果： WBC：5-10/HP RBC：滿視野/HP EC：0-2/HP尿

29、蛋白定量：2.20g/24h尿沉渣分析儀結(jié)果： 紅細(xì)胞位于散射圖的左下方,非均一 性紅細(xì)胞占99.7%;經(jīng)相差顯微鏡檢查證實為多形性紅細(xì)胞,急性腎小球腎炎,,,Dysmorphic RBC % 99.7%,方法學(xué)評價,1.優(yōu)點(diǎn)：①不需離心尿液，可自動進(jìn)樣； ②所需標(biāo)本量少； ③檢測速度快，效率高，可報告多項參數(shù)； ④檢測過程計數(shù)的粒子數(shù)0～40000，提高了準(zhǔn)確性； ⑤操作程序同一，易

30、于標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制。2.局限性: ①對尿液中的某些成分不能準(zhǔn)確辨認(rèn)，仍需顯微鏡進(jìn)行 分類和確認(rèn)。 ②應(yīng)用時間短，普及面窄，臨床實際應(yīng)用經(jīng)驗欠缺； ③尚未建立公認(rèn)的參考范圍；,儀器采用流式細(xì)胞術(shù)、高速頻閃光源和電視攝相的光學(xué)系統(tǒng)，計算機(jī)對圖像進(jìn)行分析等技術(shù)。,圖像識別尿沉渣分析儀,圖像識別尿沉渣分析儀,AVE-763尿沉渣智能分析儀,尿沉渣定量計數(shù)池,圖像識別尿沉渣分析儀—方法學(xué)評價,國內(nèi)進(jìn)入較晚

31、，尚未普及，應(yīng)用經(jīng)驗少，試劑應(yīng)用效果尚待進(jìn)一步探討。①使用光學(xué)流動計數(shù)池，體積準(zhǔn)確恒定，視野清晰，由于是密閉的管道，標(biāo)本不污染工作環(huán)境，安全性好。②由于尿液有形成分復(fù)雜，且易發(fā)生變形，有時圖像識別軟件難以識別。③不能識別的成分如何處理，是否刪除處理。 如細(xì)胞管型、細(xì)胞重疊、模糊的圖像和碎片等④其誤差如何評估，如何去除干擾⑤如何合理的組合尿干化學(xué)與影像學(xué)的結(jié)果,尿干化學(xué)分析儀 + UF-100尿沉渣分析儀 + 顯

32、微鏡檢查 尿干化學(xué)分析儀 + 圖像識別尿沉渣分析儀,（三）尿液自動化分析工作站,急性膀胱炎（治療前）RBC：195.9 [μL]WBC：1509.5 [μL]EC：74.3 [μL]BACT:1025.0 [μL],急性膀胱炎（治療中）RBC：33.3 [μL]WBC：284.8 [μL]EC：76.4 [μL]BACT:544 [μL],,,,腎結(jié)石病人RBC：1440.2 [μL]WBC：5.9 [

33、μL]BACT:132.6 [μL]Dysmorphic RBC %： 8.8%,透明度顏色SG 1.010PH 5.5NIT + LEU ++ 150/uLPRO ++ 1.0g/LGLU ++ 5.5mmol/LKET negBIL neg

34、UBG normERY ++150/uL,CONDCT 21.1 mS/cmPCASTF 0.3 /uLN-WBC 50/ uLBACT 8000/ uLCAST 0.5 /uLSRC 0.8 /uLEC 82 /uL

35、N-RBC 50/ uLRBC70 88.6NLRBC% 58.4RBCINF MicroyticYLC 0.0 /uLXTAC,結(jié)果分析,NIT + BACT >8000 /uL WBC >10/uL尿細(xì)菌感染可能性大，尿培養(yǎng)陽性率高。ERY ++ 150/uL N-RBC 50/uL ， ER

36、Y檢測的是Hb，而UF-100檢測的是完整的細(xì)胞，可能溶血，RBCINF 為Microytic，提示紅細(xì)胞源于腎小球。LEU ++ 250/uL N-WBC 50/uL ，LEＵ尿白細(xì)胞檢測的是粒細(xì)胞酯酶，而N-WBC檢測的是完整的細(xì)胞，影響因素細(xì)菌、滲透壓等。,顏色透明度SG 1.015PH 6.0LEU + 25/uLNIT

37、 neg PRO ++ 1.0g/LGLU normKET negBIL negUBG normERY + 10/uL,CONDCT 21.1 mS/cmPCASTF 0.3 /uLN-WBC 100/ uLBACT 6500

38、/uLCAST 0.5 /uLSRC 0.38/uLEC 0.3 /uLN-RBC 200/uLRBC70 78.6NLRBC% 58.4RBCINF MicroyticYLC 450 /uLXTAC,結(jié)果分析,ERY + 25/uL N-