電針促進(jìn)胃黏膜損傷修復(fù)的代謝組學(xué)研究

1、電針促進(jìn)胃黏膜損傷修復(fù)的代謝組學(xué)研究,目錄 CONTENT,傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療,成分較多，靶點(diǎn)較多,經(jīng)驗(yàn)用藥，配方靈活,資源豐富，價(jià)格便宜,不良反應(yīng)相對(duì)少而輕,整理調(diào)節(jié)，安全有效,一、研究背景,,,胃粘膜損傷是多種難治性胃病的始動(dòng)病理環(huán)節(jié)，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康，因此有效地防治胃黏膜損傷已經(jīng)成為防治胃部難治疾病的重要途徑。,胃癌,世界性第二大致死原因,,電針治療胃黏膜損傷的作用機(jī)制并不明確,,代謝組學(xué)自從90年代出現(xiàn)以來(lái)，引起了各國(guó)科學(xué)家

2、的極大興趣，相關(guān)科研論文發(fā)表數(shù)量從1999年的1篇到現(xiàn)在每年1200多篇的數(shù)量增長(zhǎng)，主要發(fā)表在JPR,、JCB,、JPBA等雜志上，權(quán)威科學(xué)雜志Nature迄今已有3篇代謝組學(xué)相關(guān)文章發(fā)表。國(guó)內(nèi)CNKI也從2003年的幾篇綜述開(kāi)始到現(xiàn)在已有上千篇出版，并已有相關(guān)書(shū)籍出版。,NMR,GC-MS,LC-MS,,檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍寬快速、無(wú)損靈敏度低,檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍寬靈敏度高費(fèi)用較高,靈敏度高用于揮發(fā)性物質(zhì)檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍窄,代謝組學(xué)檢測(cè)方法

3、,代謝組學(xué)數(shù)據(jù)分析與處理,代謝組學(xué)的應(yīng)用,,2024/2/23,針灸作用的整體調(diào)節(jié)特點(diǎn)與代謝組學(xué)相契合，用代謝組學(xué)方法來(lái)研究針灸理論及其作用機(jī)制，有可能成為中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)走向國(guó)際化的通用語(yǔ)言。 磁共振波譜成像探測(cè)大腦多種代謝物濃度空間分布。,2024/2/23,二、研究方法及結(jié)果,1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性Wistar大鼠32只，體重150±20g，在廈門(mén)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心分組飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境一周后，隨機(jī)

4、分為4組，每組8只。,（一）電針治療胃潰瘍的代謝組學(xué)研究,2.干預(yù)方法（1）造模方法,SD大鼠,造模前禁食不禁水24h,鼠板束縛，浸入水槽(20℃)水面齊劍突水平,持續(xù)10小時(shí),,,,水浸束縛應(yīng)激法造胃黏膜損傷大鼠模型,（2） 電針?lè)椒?G6805-2型電針治療儀,,9,3.動(dòng)物分組及處理,32只大鼠,正常組,模型組,胃經(jīng)穴組,非經(jīng)非穴組,,,,,提取血清和尿液,分離胃黏膜和大腦皮質(zhì),,,指標(biāo)檢測(cè),2024/2/23,（1）

5、大鼠胃黏膜形態(tài)損傷及病理學(xué)觀察,? 采用Guth標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定胃黏膜潰瘍指數(shù)和潰瘍面積； ? 光鏡下觀察胃黏膜組織的病理形態(tài)學(xué)。,4.檢測(cè)指標(biāo)與方法,,2024/2/23,（2）各組大鼠核磁共振檢測(cè)圖為帶有微成像功能的Varian 500MHz超導(dǎo)核磁共振譜儀,,2024/2/23,5.數(shù)據(jù)分析方法 (1)譜圖數(shù)據(jù)預(yù)處理：數(shù)據(jù)預(yù)處理均由MestReNova軟件處理完成?！?2)模式識(shí)別分析：模式識(shí)別分析均

6、在SIMCA-P軟件上完成。,2024/2/23,（1）胃粘膜潰瘍指數(shù),各組大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)的比較,6.結(jié)果與分析,2024/2/23,正常組,（2）胃黏膜組織病理形態(tài)學(xué),模型組,胃經(jīng)穴組,非經(jīng)非穴組,各組大鼠胃黏膜組織的病理形態(tài)學(xué),,2024/2/23,(a),血清代謝譜PLS-DA得分圖?！?正常組；●模型組； ■ 胃經(jīng)穴組; ◆ 非經(jīng)非穴組,各組樣本均相對(duì)集中，且有一定的距離，電針胃經(jīng)穴或非經(jīng)非穴后，代謝模式有往正常方向回

7、復(fù)的趨勢(shì)，胃經(jīng)穴組更靠近空白組樣本，說(shuō)明電針胃經(jīng)穴對(duì)胃潰瘍大鼠的恢復(fù)作用比非經(jīng)非穴更明顯。,（3）大鼠血清代謝物表達(dá),,2024/2/23,尿液代謝譜PLSDA得分圖?！?正常組；●模型組； ■ 胃經(jīng)穴組; ◆ 非經(jīng)非穴組,空白組與其它三組的代謝模式可以明顯區(qū)分，模型組、胃經(jīng)穴組和非經(jīng)非穴組交疊不可區(qū)分，說(shuō)明電針對(duì)胃潰瘍大鼠尿液代謝模式影響較小。,（4）大鼠尿液的代謝物表達(dá),,2024/2/23,與模型組相比，胃經(jīng)穴組尿液肌酐，乳酸，

8、乙酸，甘氨酸，膽堿，甜菜堿等代謝物的濃度有顯著變化(P<0.05)；非經(jīng)非穴組尿液乳酸、琥珀酸、甜菜堿、肌酸等代謝物的表達(dá)有顯著變化(P<0.05)。,,2024/2/23,胃組織1H NMR代謝輪廓的PLSDA得分圖，▲ 正常組；●模型組； ■ 胃經(jīng)穴組; ◆非經(jīng)非穴組,（5）大鼠胃黏膜組織代謝物表達(dá),各組大鼠胃粘膜組織代謝模式有明顯的區(qū)分，胃經(jīng)穴和非經(jīng)非穴組代謝模式比較接近正常組，而胃經(jīng)組與正常組更接近。,與模型組比較

9、，胃經(jīng)穴組大鼠胃黏膜組織蛋氨酸、天冬氨酸等含量有顯著變化(P<0.05)；膽經(jīng)穴組乙酸、肌醇、谷氨酸脂、甘氨酸等物質(zhì)含量有顯著變化(P<0.05)。,,2024/2/23,（6）大鼠大腦皮質(zhì)代謝物表達(dá),各組大鼠大腦皮質(zhì)代謝模式有明顯的區(qū)分，胃經(jīng)穴大鼠大腦皮質(zhì)代謝模式比較接近正常組。,大腦皮質(zhì)1H NMR代謝輪廓的PLSDA得分圖，●正常組；■模型組；▲胃經(jīng)穴組；▼非經(jīng)非穴組）,與模型組比較，胃經(jīng)穴組大鼠大腦皮質(zhì)乳酸、萘乙酸、

10、甘露醇、?；撬帷⒓〈嫉群坑酗@著變化(P<0.05)；非經(jīng)非穴組乳酸、萘乙酸、谷氨酸脂、腺苷等含量有顯著變化(P<0.05)。,15,健康Sprague-Dawley雄鼠40只，購(gòu)自吳氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，體重210±20g?？刂剖覝?0～22℃，相對(duì)濕度65～70%，自然光暗周期，在廈門(mén)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心（SPF）分組飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境一周后，隨機(jī)分為4組，每組10只。,（二）電針治療慢性萎縮性胃炎的代謝組學(xué)研究,1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)

11、物,正常組,模型組,電針穴位組,電針?lè)茄ㄎ唤M,,,NMR,生物標(biāo)志物代謝通路分析,電針2周,延髓,PCR,ELISA,細(xì)胞增殖因子,灌胃水楊酸鈉和酒精混合液12周,灌胃潔凈清水,12周,2.動(dòng)物分組及處理,G6805-2型電針治療儀,胃經(jīng),,四白,3.電針干預(yù),（1）胃黏膜病理檢測(cè),正常組(a,b)：胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)保存完整且細(xì)胞排列整齊。模型組(c,d)：胃粘膜層變薄，腺細(xì)胞減少，核不規(guī)則，有絲分裂現(xiàn)象電針穴位組(e,f)

12、：胃黏膜皺襞增厚，細(xì)胞界限明顯，細(xì)胞核均勻。電針?lè)茄ㄎ唤M(g,h)：粘膜層變厚，腺體不完整，細(xì)胞核不規(guī)則。,4.研究結(jié)果,圖2 胃粘膜細(xì)胞增殖相關(guān)因子表達(dá),（2）胃黏膜細(xì)胞增殖相關(guān)蛋白的ELISA檢測(cè),與正常組相比，模型組大鼠胃黏膜細(xì)胞PCNA， Ag-NORs, EGF和VEGF表達(dá)水平均發(fā)生上調(diào)（P＜0.05），表明細(xì)胞增殖相關(guān)因子表達(dá)增強(qiáng)。而電針穴位組表達(dá)水平明顯降低，且抑制效應(yīng)明顯強(qiáng)于電針?lè)茄ㄎ弧?（3）胃粘膜細(xì)胞增殖相關(guān)基因

13、檢測(cè),圖3 胃粘膜細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá),與正常組相比，模型組和電針?lè)茄ㄎ唤M中NF-κB， c-myc基因的表達(dá)水平明顯升高，而電針穴位組兩種基因的表達(dá)水平明顯降低。電針刺激胃經(jīng)穴位有助于抑制大鼠胃黏膜細(xì)胞的增殖，且電針穴位比非穴位組效果更好。,（4） 大鼠體液及組織樣本的 1H NMR 檢測(cè),大鼠血清、尿和大腦皮質(zhì)、延髓和胃粘膜提取物的1H NMR譜,從圖中PLS-DA圖可以看出，模型組與正常組明顯分開(kāi)，電針穴位組居于模型組和正常組中

14、間并靠近正常組，說(shuō)明電針胃經(jīng)穴位有助于調(diào)回這種代謝輪廓的變化，也說(shuō)明了電針胃經(jīng)穴位對(duì)慢性萎縮性胃炎的治療作用。,① 大鼠體液及組織樣本的代謝標(biāo)記物,② 電針治療慢性萎縮性胃炎的相關(guān)代謝通路圖,慢性萎縮性胃炎可以引起機(jī)體TCA循環(huán)、糖酵解、脂質(zhì)代謝、膜代謝、腸道菌群代謝、氨基酸代謝以及神經(jīng)遞質(zhì)的變化。電針治療有效緩解了慢性萎縮性胃炎引起的脂代謝，并對(duì)腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的功能有一定的恢復(fù)作用。同時(shí)，電針治療也一定程度上改善了CAG所引起腸道菌群