接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù)

1、第四章 接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù),第一節(jié) 培養(yǎng)基制備技術(shù)第二節(jié) 接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù)第三節(jié) 常用的微生物培養(yǎng)基——原理、制作和現(xiàn)象（自學(xué)）,第一節(jié) 培養(yǎng)基制備技術(shù),一、玻璃器皿的清洗,在制備培養(yǎng)基的過(guò)程中，首先要使用一些玻璃器皿，如試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、燒杯和吸管等。這些器皿在使用前都要根據(jù)不同的情況，經(jīng)過(guò)一定的處理，洗刷干凈。有的還要進(jìn)行包裝，經(jīng)過(guò)滅菌等準(zhǔn)備就緒后，才能使用。,二、培養(yǎng)基的類型,

2、在實(shí)驗(yàn)室中配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，都叫做培養(yǎng)基（Media）。由于各類微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn)，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。,1、根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否完全了解來(lái)區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基。,天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉

3、膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等。用這些物質(zhì)配成的培養(yǎng)基雖然不能確切知道它的化學(xué)成分，但一般來(lái)講，營(yíng)養(yǎng)是比較豐富的，微生物生長(zhǎng)旺盛，而且來(lái)源廣泛，配制方便，所以較為常用，尤其適合于配制實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的穩(wěn)定性常受生產(chǎn)廠或批號(hào)等因素的影響。,1）天然培養(yǎng)基,2）合成培養(yǎng)基,合成培養(yǎng)基是一類化學(xué)成分和數(shù)量完全知道的培養(yǎng)基，它是用已知化學(xué)成分的化學(xué)藥品配制而成。這類培養(yǎng)基化學(xué)成分精確、重復(fù)

4、性強(qiáng)，但價(jià)格昂貴，而微生物又生長(zhǎng)緩慢，所以它只適用于做一些科學(xué)研究，例如營(yíng)養(yǎng)、代謝的研究。,3）半合成培養(yǎng)基,在合成培養(yǎng)基中，加入某種或幾種天然成分；或者在天然培養(yǎng)基中，加入一種或幾種已知成分的化學(xué)藥品即成半合成培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等。這種培養(yǎng)基在生產(chǎn)實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)室中使用最多。,2、根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來(lái)區(qū)分，可以分為：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基。,3、根據(jù)培養(yǎng)基的用途來(lái)區(qū)分，可分為：選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒

5、別培養(yǎng)基等。,三、培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng),1、培養(yǎng)基配方的選定,同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來(lái)源。,2、培養(yǎng)基的制備記錄,每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄，包括培養(yǎng)基名稱，配方及其來(lái)源，和各種成份的牌號(hào)，最終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等，記錄應(yīng)復(fù)制一份，原記錄保存?zhèn)洳?，?fù)制記

6、錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。,3、培養(yǎng)基成分的稱取,培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，最好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?cè)，每稱完一種成分即在配方上做出記號(hào)，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側(cè)，每種稱取完畢后，即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后，還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。,4、培養(yǎng)基各成份的混合和溶化,培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。最好使用不

7、銹鋼加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。,5、培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正,因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正。例如，牛肉浸液約可降低 pH 0.2，而腸浸液pH卻會(huì)有顯著的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的最終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)整后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。,6、培養(yǎng)基的過(guò)濾澄清,液

8、體培養(yǎng)基必須絕對(duì)澄清，瓊脂培養(yǎng)基也應(yīng)透明無(wú)顯著沉淀，因此，須要采用過(guò)濾或其它澄清方法以達(dá)到此項(xiàng)要求。一般液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾法，濾紙應(yīng)折疊成折扇或漏斗形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。,瓊脂培養(yǎng)基可用清潔的白色薄絨布趁熱過(guò)濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過(guò)濾。新制肉、肝、血和土豆等浸液時(shí)、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反復(fù)過(guò)濾。如過(guò)濾法不能達(dá)到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55~60℃的培養(yǎng)基放入大的三角燒瓶?jī)?nèi)，裝

9、入量不得超過(guò)燒瓶容量的1/2，每1000ml培養(yǎng)基加入1~2個(gè)雞蛋的蛋白，強(qiáng)力振搖3~5分鐘，置高壓蒸汽滅菌器中、121℃加熱20分鐘、取出趁熱以絨布過(guò)濾即可。,7、培養(yǎng)基的分裝,培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過(guò)容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎（現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形

10、成2/3底層和1/3斜面的量為洽當(dāng)。,分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH之用。,8、培養(yǎng)基的滅菌,一般培養(yǎng)基可采用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養(yǎng)基制備方法中，如無(wú)特殊規(guī)定，即可用此法滅菌。,某些畏熱成分，如糖類，應(yīng)另行配成20%或更高的濃液，以過(guò)濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無(wú)菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)

11、基。明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應(yīng)以無(wú)菌操作技術(shù)抽取和加入于經(jīng)冷卻約50℃左右的培養(yǎng)基中。瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55℃-60℃時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。,9、培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試,每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其最終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1℃恒溫箱培養(yǎng)過(guò)夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，即棄去。,用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)

12、菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí)，如無(wú)菌生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。,10、培養(yǎng)基的保存,培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，最好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過(guò)一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過(guò)3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽。,第二節(jié) 接種、分離純化和培養(yǎng)技術(shù),一、接種,將微生物接到適于它生長(zhǎng)繁殖的人工培養(yǎng)基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。,1

13、、接種工具和方法,在實(shí)驗(yàn)室或工廠實(shí)踐中，用得最多的接種工具是接種環(huán)、接種針。由于接種要求或方法的不同，接種針的針尖部常做成不同的形狀，有刀形、耙形等之分。有時(shí)滴管、吸管也可作為接種工具進(jìn)行液體接種。在固體培養(yǎng)基表面要將菌液均勻涂布時(shí)，需要用到涂布棒。,接種和分離工具1.接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀,常用的接種方法有以下幾種：,1）劃線接種,這是最常用的接種方法。即在

14、固體培養(yǎng)基表面作來(lái)回直線形的移動(dòng)，就可達(dá)到接種的作用。常用的接種工具有接種環(huán)，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。,2）三點(diǎn)接種,在研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨(dú)立形成菌落后，來(lái)觀察、研究它們的形態(tài)。除三點(diǎn)外，也有一點(diǎn)或多點(diǎn)進(jìn)行接種的。,3）穿刺接種,在保藏厭氧菌種或研究微生物的動(dòng)力時(shí)常采用此法。做穿刺接種時(shí)，用的接種工具是接種針。用的培養(yǎng)基一般是半固體培養(yǎng)基。它的做

15、法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養(yǎng)基中心向管底作直線穿刺，如某細(xì)菌具有鞭毛而能運(yùn)動(dòng)，則在穿刺線周圍能夠生長(zhǎng)。,4）澆混接種,該法是將待接的微生物先放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的。待平板凝固之后，置合適溫度下培養(yǎng)，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落。,5）涂布接種,與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來(lái)回左右的涂布，讓菌液均

16、勻分布，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物的菌落。,6）液體接種,從固體培養(yǎng)基中將菌洗下，倒入液體培養(yǎng)基中，或者從液體培養(yǎng)物中，用移液管將菌液接至液體培養(yǎng)基中，或從液體培養(yǎng)物中將菌液移至固體培養(yǎng)基中，都可稱為液體接種。,7）注射接種,該法是用注射的方法將待接的微生物轉(zhuǎn)接至活的生物體內(nèi)，如人或其它動(dòng)物中，常見(jiàn)的疫苗預(yù)防接種，就是用注射接種，接入人體，來(lái)預(yù)防某些疾病。,8）活體接種,活體接種是專門(mén)用于培養(yǎng)病毒或其它病原微生物的一種方法，因?yàn)椴《颈仨毥臃N于

17、活的生物體內(nèi)才能生長(zhǎng)繁殖。所用的活體可以是整個(gè)動(dòng)物；也可以是某個(gè)離體活組織，例如猴腎等；也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養(yǎng)。,2、無(wú)菌操作,培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。,實(shí)驗(yàn)臺(tái)面不論是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒劑擦洗；水平是倒瓊脂培養(yǎng)基時(shí)利于培

18、養(yǎng)皿內(nèi)平板的厚度保持一致。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上方，空氣流動(dòng)應(yīng)緩慢，雜菌應(yīng)盡量減少，其周圍雜菌也應(yīng)越少越好。為此，必須清掃室內(nèi)，關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的門(mén)窗，并用消毒劑進(jìn)行空氣消毒處理，盡可能地減少雜菌的數(shù)量。,斜面接種時(shí)的無(wú)菌操作(1)接種滅菌 (2)開(kāi)啟棉塞 (3)管口滅菌 (4)挑起菌苔 (5)接種 (6)塞好棉塞,二、分離純化,含有一種以上的微生物培養(yǎng)物稱為混和培養(yǎng)物（Mixed culture）。如果在一個(gè)菌落中所有細(xì)胞均來(lái)自

19、于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培養(yǎng)（Pure culture）。在進(jìn)行菌種鑒定時(shí)，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過(guò)程稱為分離純化，方法有許多種。,1、傾注平板法,首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便

20、可得到純培養(yǎng)物。,2、涂布平板法,首先把微生物懸液通過(guò)適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無(wú)菌的已經(jīng)凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無(wú)菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個(gè)菌落。,1、傾注平板法,2、涂布平板法,操作較麻煩，對(duì)好氧菌、熱敏感菌效果不好！,使用較多的常規(guī)方法，但有時(shí)涂布不均勻！,3、平板劃線法,最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見(jiàn)

21、的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，最后在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落。,平板劃線分離法1.斜線法 2.曲線法 3.方格法 4.放射法 5.四格法,三、培養(yǎng),微生物的生長(zhǎng)，除了受本身的遺傳特性決定外，還受到許多外界因素的影響，如營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。微生物的種類不同，培養(yǎng)的方式和條件也不盡

22、相同。,2、培養(yǎng)方法,1）根據(jù)培養(yǎng)時(shí)是否需要氧氣，可分為好氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)兩大類。,好氧培養(yǎng)：也稱“好氣培養(yǎng)”。就是說(shuō)這種微生物在培養(yǎng)時(shí)，需要有氧氣加入，否則就不能生長(zhǎng)良好。在實(shí)驗(yàn)室中，斜面培養(yǎng)是通過(guò)棉花塞從外界獲得無(wú)菌的空氣。三角燒瓶液體培養(yǎng)多數(shù)是通過(guò)搖床振蕩，使外界的空氣源源不斷地進(jìn)入瓶中。,厭氧培養(yǎng)：也稱“厭氣培養(yǎng)”。這類微生物在培養(yǎng)時(shí)，不需要氧氣參加。在厭氧微生物的培養(yǎng)過(guò)程中，最重要的一點(diǎn)就是要除去培養(yǎng)基中的氧氣。一般可采用下列

23、幾種方法：,a. 降低培養(yǎng)基中的氧化還原電位：常將還原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等，加入到培養(yǎng)基中，便可達(dá)到目的。有的將一些動(dòng)物的死的或活的組織如牛心、羊腦加入到培養(yǎng)基中，也可適合厭氧菌的生長(zhǎng)。,b. 化合去氧：這也有很多方法，主要有：用焦性沒(méi)食子酸吸收氧氣；用磷吸收氧氣；用好氧菌與厭氧混合培養(yǎng)吸收氧氣；用植物組織如發(fā)芽的種子吸收氧氣；用產(chǎn)生氫氣與氧化合的方法除氧。,c. 隔絕阻氧：深層液體培養(yǎng)；用石蠟油封存；半固體穿刺培養(yǎng)。d. 替

24、代驅(qū)氧：用二氧氣碳驅(qū)代氧氣；用氮?dú)怛?qū)代氧氣；用真空驅(qū)代氧氣；用氫氣驅(qū)代氧氣；用混和氣體驅(qū)代氧氣。,第三節(jié) 常用的微生物培養(yǎng)基——原理、制作和現(xiàn)象,牛肉膏　　　　　　 5g蛋白胨　　　　　　 10g氯化鈉　　　　　　 3g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)　　 2g

25、0.2%滇麝香草酚藍(lán)溶液　 12mL蒸餾水　　　　　　 1000mLpH7.4,1、糖發(fā)酵管,1）成分,2）制法,① 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi)，121℃高壓滅菌15min。 ② 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15 min。另將各種糖類分別配好

26、10%溶液，同時(shí)高壓滅菌。將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi)，以無(wú)菌操作分裝小試管。 　　注：蔗糖不純，加熱后會(huì)自行水解者，應(yīng)采用過(guò)濾法除菌。,3）試驗(yàn)方法,從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36±1℃培養(yǎng)，一般觀察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀察14～30d。,2、ONPG培養(yǎng)基,1）成分,鄰硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG)　　 60mg (O-Nitrophenyl-β-D-galactopyrano

27、side)0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5)　　　　10mL1%蛋白胨水(PH7.5)　　　　　　　　　30mL,2）制法,將ONPG溶于緩沖液內(nèi)，加入蛋白胨水，以過(guò)濾法除菌，分裝于10mm×75mm試管，每管0.5mL，用橡皮塞塞緊。,自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種，于36±1℃培養(yǎng)1～3h和24h觀察結(jié)果。如果β-半乳糖苷酶產(chǎn)生，則于1～3h變黃色，如無(wú)此酶則24h不變色。,3）試驗(yàn)方法,3、緩沖

28、葡萄糖蛋白胨水 （MR和VP試驗(yàn)用）,1）成分,磷酸氫二鉀　　 5g蛋白胨　　　　　7g葡萄糖　　　　　5g蒸餾水　　　　　1000mLpH7.0,2）制法,3）甲基紅(MR)試驗(yàn),溶化后校正pH，分裝試管，每管1mL，121℃高壓滅菌15min。,自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2～5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑

29、一滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽(yáng)性，黃色為陰性。甲基紅試劑配法：10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸餾水。,4）V-P試驗(yàn),用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)2～4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng)。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL，充分振搖試管，觀察結(jié)果。陽(yáng)性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。,4、西蒙氏檸

30、檬酸鹽培養(yǎng)基,1）成分,氯化鈉　　　　　　　　　　5g　硫酸鎂(MgSO4·7H2O)　　　 0.2g磷酸二氫銨　　　　　　　　1g磷酸氫二鉀　　　　　　　　1g檸檬酸鈉　　　　　　　　　5g瓊脂　　　　　　　　　　　20g蒸餾水　　　　　　　　　　1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液　　 40mLpH6.8,2）制法,3）試驗(yàn)方法,先將鹽類溶解于水內(nèi)，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化。然后加入指示劑，混合均勻

31、后分裝試管，121℃高壓滅菌15min。放成斜面。,挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種，于36±1℃培養(yǎng)4d，每天觀察結(jié)果。陽(yáng)性者斜面上有菌落生長(zhǎng)，培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色。,5、克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基,1）成分,檸檬酸鈉　　　　　　　　　　　 3g葡萄糖　　　　　　　　　　　　 0.2g酵母浸膏　　　　　　　　　　　 0.5g單鹽酸半胱氨酸　　　　　　　　 0.1g磷酸二氫鉀　　　　　　　　　　 1g氯化鈉　　　　　　　　　　　　 5

32、g0.2%酚紅溶液　　　　　　　　　6mL瓊脂　　　　　　　　　　　　　 15g蒸餾水　　　　　　　　　　　　 1000mL,2）制法,3）試驗(yàn)方法,加熱溶解，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。放成斜面。,用瓊脂培養(yǎng)物接種整個(gè)斜面，在36±1℃培養(yǎng)7d，每天觀察結(jié)果。陽(yáng)性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。,6、丙二酸鈉培養(yǎng)基,1）成分,酵母浸膏　　　　　　　　　 1g硫酸銨　　　　　　　　　　 2g磷酸氫二鉀　　　　　　　　 0

33、.6g磷酸二氫鉀　　　　　　　　 0.4g氯化鈉　　　　　　　　　　 2g丙二酸鈉　　　　　　　　　 3g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液　　　12mL蒸餾水　　　　　　　　　　 1000mLpH6.8,2）制法,3）試驗(yàn)方法,先將酵母浸膏和鹽類溶解于水，校正pH后再加入指示劑，分裝試管，121℃高壓滅菌15min。,用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種，于36±1℃培養(yǎng)48h，觀察結(jié)果。陽(yáng)性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色。,7、葡葡糖銨培養(yǎng)基,1）

34、成分,氯化鈉　　　　　　　　　　　5g硫酸鎂(MgSO4·7H2O)　　　 　 0.2g磷酸二氫銨　　　　　　　　　1g磷酸氫二鉀　　　　　　　　　1g葡萄糖　　　　　　　　　　　2g瓊脂　　　　　　　　　　　　20g蒸餾水　　　　　　　　　　　1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液　　　 40mLpH6.8,2）制法,先將鹽類和糖溶解于水內(nèi)，校正pH，再加瓊脂，加熱溶化，然后加入指示劑，混合均勻后分裝試管，

35、121℃高壓滅菌15min，放成斜面。,注：容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡。再用清水、蒸餾水沖洗干凈，并用新棉花做成棉塞，干熱滅菌后使用。如果操作時(shí)不注意，有雜質(zhì)污染時(shí)，易造成假陽(yáng)性的結(jié)果。,3）試驗(yàn)方法,用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面，在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液，肉眼觀察不見(jiàn)混濁，以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜。將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種，同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對(duì)照。于36±1℃培養(yǎng)24h。陽(yáng)性者葡萄糖銨斜面上有

36、正常大小的菌落生長(zhǎng)；陰性者不生長(zhǎng)，但在對(duì)照培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。如在葡萄糖銨斜面生長(zhǎng)極微小的菌落可視為陰性結(jié)果。,8、Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用),1）成分,蛋白胨　　　　　　　　　　　　2g氯化鈉　　　　　　　　　　　　5g磷酸氫二鉀　　　　　　　　　 0.3g瓊脂　　　　　　　　　　　　　4g葡萄糖　　　　　　　　　　　　10g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液　　　　 12mL蒸餾水　　　　　　　　　　　

37、　1000mLpH7.2,2）制法,將蛋白胨和鹽類加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、瓊脂煮沸，溶化瓊脂，然后加入指示劑?；靹蚝螅盅b試管，121℃高壓滅菌15min，直立凝固備用。,3）試驗(yàn)方法,從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種，同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基，其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面，高度約1cm，于36±1℃培養(yǎng)。,9、馬尿酸鈉培養(yǎng)基,1）成分,馬尿酸鈉　　1g肉浸液　　　100mL,2）制法,將馬尿酸鈉

38、溶解于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)，并于管壁畫(huà)一橫線。以標(biāo)志管內(nèi)液面高度，高壓滅菌121℃20min。,3）試劑,三氯化鐵(FeCl3·6H2O)12g，溶于2%鹽酸溶液100mL中即成。,4）試驗(yàn)方法,用純培養(yǎng)物接種，于42℃培養(yǎng)48h，觀察培養(yǎng)液是否到達(dá)試管壁上記號(hào)處，如不足時(shí)，用蒸餾水補(bǔ)足至原量。經(jīng)離心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化鐵試劑0.2mL，立即混合均勻，經(jīng)10～15min，觀察結(jié)果。,出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽(yáng)性

39、。,5）結(jié)果,10、營(yíng)養(yǎng)明膠,1）成分,蛋白胨　　　　　5g牛肉膏　　　　　3g明膠　　　　　　120g蒸餾水　　　　　1000mLpH6.8～7.0,2）制法,加熱溶解、校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121℃高壓滅菌10min，取出后迅速冷卻，使其凝固。復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0。,3）試驗(yàn)方法,用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種，放在22～25℃培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果，記錄液化時(shí)間?；蚍旁?6±1℃培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)

40、30min后再觀察結(jié)果。,11、苯丙氨酸培養(yǎng)基,1）成分,酵母浸膏　　　　　　　　　　　 3gDI-苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g)　 2g磷酸氫二鈉　　　　　　　　　　 1g氯化鈉　　　　　　　　　　　　 5g瓊脂　　　　　　　　　　　　　 12g蒸餾水　　　　　　　　　　　　 1000mL,2）制法,3）試驗(yàn)方法,加熱溶解后分裝試管，121℃高壓滅菌15min，使成斜面。,自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙

41、氨酸瓊脂，在36±1℃培養(yǎng)4h或18～24h。滴加10%三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性者呈深綠色。,12、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基,1）成分,蛋白胨　　　　　　　　　　5g酵母浸膏　　　　　　　　　3g葡萄糖　　　　　　　　　　1g蒸餾水　　　　　　　　　　1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液　　 1mLL-氨基酸或DL-氨基酸　　 0.5或1g/100mLpH6.8,2）制

42、法,除氨基酸以外的成分加熱溶解后，分裝每瓶100mL，分別加入各種氨基酸：賴氨酸、精氨酸和鳥(niǎo)氨酸。L-氨基酸按0.5%加入，DL-氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。對(duì)照培養(yǎng)基不加氨基酸。分裝于滅菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，115℃高壓滅菌10min。,3）試驗(yàn)方法,從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于36±1℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因

43、葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。對(duì)照管應(yīng)為黃色。,13、蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用),1）成分,蛋白胨(或胰蛋白胨)　 20g氯化鈉　　　　　　　 5g蒸餾水　　　　　　　 1000mLpH7.4,2）制法,按上述成分配制，分裝小試管，121℃高壓滅菌15min。,3）靛基質(zhì)試劑,柯凡克試劑：將5g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后緩慢加入濃鹽酸25mL。 歐-波試劑：將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL9

44、5%乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。,4）試驗(yàn)方法,挑取小量培養(yǎng)物接種，在36±1℃培養(yǎng)1～2d，必要時(shí)可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5mL，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。　　注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。,14、硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用),1）成分,牛肉膏　　　　　　

45、3g酵母浸膏　　　　　 3g蛋白胨　　　　　　 10g硫酸亞鐵　　　　　 0.2g硫代硫酸鈉　　　　 0.3g氯化鈉　　　　　　 5g瓊脂　　　　　　　 12g蒸餾水　　　　　　 1000mLpH7.4,2）制法,3）試驗(yàn)方法,加熱溶解，校正pH，分裝試管，115℃高壓滅菌15min，取出直立候其凝固。,挑取瓊脂培養(yǎng)物，沿管壁穿刺，于36±1℃培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏??！　∽ⅲ耗c桿菌

46、科細(xì)菌測(cè)定硫化氫的產(chǎn)生，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。,15、尿素瓊脂,1）成分,蛋白胨　　　　　　1g氯化鈉　　　　　　5g葡萄糖　　　　　　1g磷酸二氫鉀　　　　2g0.4%酚紅溶液　　 3mL瓊脂　　　　　　　20g蒸餾水　　　　　　1000mL20%尿素溶液　　　 100mLpH7.2±0.1,2）制法,將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121℃高壓滅菌15min

47、。冷至50～55℃，加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為2%，最終pH應(yīng)為7.2±0.1。分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩?3）試驗(yàn)方法,挑取瓊脂培養(yǎng)物接種，在36±1℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。,16、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基,1）成分,蛋白胨　　　　　 10g氯化鈉　　　　　 5g磷酸二氫鉀　　　 0.225g磷酸氫二鈉　　　 5.64g蒸餾水　　　

48、　　 1000mL0.5%氰化鉀溶液　 20mLpH7.6,2）制法,將除氰化鉀以外的成分配好后分裝燒瓶，121℃高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100mL培養(yǎng)基加入0.5%氰化鉀溶液2.0mL(最后濃度為1∶10000)，分裝于12mm×100mm滅菌試管，每管約4mL，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4℃冰箱內(nèi)，至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基，分裝試管備用。,3）試驗(yàn)方法,將瓊

49、脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取1環(huán)接種于氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基。并另挑取1環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基。在36±1℃培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長(zhǎng)即為陽(yáng)性(不抑制)，經(jīng)2d細(xì)菌不生長(zhǎng)為陰性(抑制)。,注：氰化鉀是劇毒藥物，使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)，氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長(zhǎng)，因而造成假陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán)節(jié)都要特

50、別注意。,17、硝酸鹽培養(yǎng)基,1）成分,硝酸鉀　　　　　　　　 0.2g蛋白胨　　　　　　　　 5g蒸餾水　　　　　　　　 1000mLpH7.4,2）制法,溶解，校正pH，分裝試管，每管約5mL，121℃高壓滅菌15min?！　∠跛猁}還原試劑　　甲液：將對(duì)氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。　　乙液：將甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。,接種后在36±1℃培養(yǎng)1～

51、4d，加入甲液和乙液各一滴，觀察結(jié)果。硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時(shí)于立刻或數(shù)分鐘內(nèi)顯紅色。 　　注：本試驗(yàn)陰性的原因有三：細(xì)菌不能還原硝酸鹽；亞硝酸鹽繼續(xù)分解，生成氨和氮；培養(yǎng)基不適于細(xì)菌的生長(zhǎng)。如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否未被分解，可再加入鋅粉少許，可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現(xiàn)紅色。,3）試驗(yàn)方法,18、氧化酶試驗(yàn),1）試劑,1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液：少量新鮮配制，干冰箱內(nèi)避光保存。 1%α-萘酚－乙醇溶液。,2）試驗(yàn)方法

52、,取白色潔凈濾紙沾取菌落。加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽(yáng)性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深；再加α-萘酚溶液一滴，陽(yáng)性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性于兩分鐘內(nèi)不變色?！?以毛細(xì)吸管吸取試劑，直接滴加于菌落上，其顯色反應(yīng)與以上相同。,19、細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn),1）試劑,1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液：少量新鮮配制，干冰箱內(nèi)避光保存。 1%α-萘酚－乙醇溶液。,2）試驗(yàn)方法,取37℃(或低于37℃)培養(yǎng)20h的斜面培養(yǎng)物一支，將兩種

53、試劑各2～3滴，從斜面上端滴下，并將斜面略加傾斜，使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養(yǎng)物。如系平板培養(yǎng)物，則可用試劑混合液滴在菌落上。,3）結(jié)果,于2min內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色者為陽(yáng)性。陽(yáng)性培養(yǎng)物大多數(shù)于半分鐘內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)，2min以后出現(xiàn)微弱或可疑反應(yīng)均作為陰性結(jié)果。,20、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn),1）試劑,3%過(guò)氧化氫溶液：臨用時(shí)配制。,2）試驗(yàn)方法,挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內(nèi)，滴加3%過(guò)氧化氫溶液2mL，觀察結(jié)果。,3）結(jié)果,于半分鐘

54、內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽(yáng)性，不發(fā)生氣泡者為陰性。,21、過(guò)氧化物酶試驗(yàn),1）試劑,2）試驗(yàn)方法,2%兒茶酚溶液。3%過(guò)氧化氫溶液。,挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán)，置于潔凈試管內(nèi)，滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過(guò)氧化氫溶液1mL。靜置于室溫(20℃)中30～60min，觀察結(jié)果。,3）結(jié)果,陽(yáng)性反應(yīng)，細(xì)菌變?yōu)楹诤稚?；陰性反?yīng)，細(xì)菌不變色。　　注：過(guò)氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制。,22、磷酸鹽緩沖液,1）儲(chǔ)存液,磷酸二氫鉀　　　　　　　　34

55、g1mol/L氫氧化鈉溶液　　　 175mL蒸餾水　　　　　　　　　　825mLpH7.2,2）制法,先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中，用1mol/L氫氧化鈉溶液校正pH后，再用蒸餾水稀釋至1000mL。,3）稀釋液,取儲(chǔ)存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL。分裝每瓶100mL或每管10mL，121℃高壓滅菌15min。,23、明膠磷酸鹽緩沖液,1）成分,明膠　　　　　　　　　2g磷酸氫二鈉　　　　　　4g蒸餾水

56、　　　　　　　　1000mLpH6.2,2）制法,加熱溶解，校正pH，121℃高壓滅菌15min。,24、乳酸－苯酚溶液 （檢驗(yàn)真菌形態(tài)用）,1）成分,2）制法,苯酚　　　　　　　　 10g乳酸(比重1.21)　　　　10g甘油　　　　　　　　 20g蒸餾水　　　　　　　 10mL,將苯酚在水中加熱溶解，然后加入乳酸及甘油。,25、肉浸液肉湯,1）成分,絞碎牛肉　　　　　　　500

57、g氯化鈉　　　　　　　　5g蛋白胨　　　　　　　　10g磷酸氫二鉀　　　　　　2g蒸餾水　　　　　　　　1000mL,2）制法,將絞碎之去筋膜無(wú)油脂牛肉500g加蒸餾水1000mL，混合后放冰箱過(guò)夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小時(shí)，使肉渣完全凝結(jié)成塊，用絨布過(guò)濾，并擠壓收集全部濾液，加水補(bǔ)足原量。加入蛋白胨、氯化鈉和磷酸鹽，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌30min。,26、肉浸液瓊脂,1）成分

58、,2）制法,肉浸液肉湯(PH7.4)　　 1000mL瓊脂　　　　　　　　 17～20g,加熱溶化瓊脂，分裝燒瓶或試管，121℃高壓滅菌30min。根據(jù)需要，傾注平板或放成斜面。,27、牛肉(或牛心)消化湯,1）成分,絞碎牛肉(或牛心)　　　 1000g15%氫氧化鈉溶液　　　27mL胰蛋白酶　　　　　　　40mL三氯甲烷　　　　　　　1mL氯化鈉　　　　　　　　10g蒸餾水　　　　　　　　2000mL,2）制法,① 稱

59、取碎牛肉，加蒸餾水，隔水加熱到80℃，維持15min?！　、?加氫氧化鈉溶液，對(duì)pH試紙呈弱堿性，冷至40℃?！　、?加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小時(shí)搖動(dòng)一二次?！　、?4h后，吸取上層液5mL于試管中，加5%硫酸銅溶液0.1mL、4%氫氧化鈉溶液5mL，混合之。若呈紅色，則不須再消化，可由溫箱取出。,⑤ 加入15%乙酸溶液45mL，對(duì)pH試紙呈酸性?！　、?煮沸15min，使胰蛋白酶破壞，冷后，放冰

60、箱內(nèi)一夜?！　、?次日吸取上層清液，加氯化鈉10g，并加水補(bǔ)足原量，煮沸?！　、?校正pH7.4～7.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL)，加熱，用濾紙過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。,注：①此培養(yǎng)基可作為瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，不需加蛋白胨?！　、谝鹊鞍酌钢渲疲悍Q取去脂絞碎的豬胰500g，加入乙醇500mL、蒸餾水1500mL，混合之，裝人玻塞瓶?jī)?nèi)。每日搖勻三次。3d后，用絨布過(guò)濾擠出其汁，加鹽酸至0.05%，放冰箱內(nèi)

61、保存?zhèn)溆谩?28、血消化湯,1）成分,絞碎豬胃　　　　　100g絞碎豬血塊　　　　100g蒸餾水　　　　　　1000mL濃鹽酸　　　　　　10mL,2）制法,① 洗滌豬胃，除去油脂，保留胃粘膜，用絞肉機(jī)絞碎。② 用絞肉機(jī)將豬血塊絞碎。③ 將蒸餾水加熱至55℃，加入豬胃、豬血塊和鹽酸，置55℃水浴中24h，時(shí)常加以搖動(dòng)。④ 從水浴內(nèi)取出，加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱內(nèi)一夜。,⑤ 吸取上層清液，加磷

62、酸氫二鉀1g，加熱至75℃，加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。⑥ 用濾紙過(guò)濾，分裝燒瓶，121℃高壓滅菌20min。,注：①本培養(yǎng)基不含糖可供作鑒別培養(yǎng)基之基礎(chǔ)，不需加蛋白胨和氯化鈉?！　、?mol/L碳酸鈉溶液之配法：無(wú)水碳酸鈉10.6g，溶于1000mL蒸餾水中。,29、豆粉瓊脂,1）成分,牛心消化湯(PH7.4～7.6)　　　　　1000mL瓊脂　　　　　　　　　　　　　 20g黃豆粉

63、浸液　　　　　　　　　　 50mL,將瓊脂加在牛心消化湯內(nèi)，加熱溶解，過(guò)濾。加入豌豆粉浸液，分裝每瓶100mL，121℃高壓滅菌15min。豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化鈉10g，加入蒸餾水100mL。置100℃水浴內(nèi)加熱1h，放于冰箱中過(guò)夜。吸取上清液即為豌豆浸液。,2）制法,30、血瓊脂,1）成分,2）制法,pH7.4～7.6豆粉瓊脂　　　　　　100mL脫纖維羊血(或兔血)　　　　　　 5～10mL,加熱溶化瓊脂，冷

64、至50℃，以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血，搖勻，傾注平板。亦可分裝滅菌試管，置成斜面。亦可用其他營(yíng)養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂。,31、營(yíng)養(yǎng)瓊脂,1）成分,蛋白胨　　　 10g牛肉膏　　　　3g 氯化鈉　　　　5g瓊脂　　　　　15～20g蒸餾水　　 1000mL,2）制法,將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2mL，校正pH至7.2～7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化。分裝燒瓶，121℃高

65、壓滅菌15min?！　∽ⅲ捍伺囵B(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計(jì)數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。,32、營(yíng)養(yǎng)肉湯,1）成分,2）制法,蛋白陳　　　　10g牛肉膏　　　　3g氯化鈉　　　　5g蒸餾水　　　　1000mLpH7.4,按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225mL，121℃高壓滅菌15min。,33、乳糖膽鹽發(fā)酵管,1）成分,蛋白胨　　　　　　　　　　20g

66、豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)　　　 5g乳糖　　　　　　　　　　　10g0.04%滇甲酚紫水溶液　　　 25mL蒸餾水　　　　　　　　　　1000mLpH7.4,2）制法,將蛋白胨、膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10mL，并放入一個(gè)小倒管，115℃高壓滅菌15min。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。,34、乳糖發(fā)酵管,1）成分,蛋白胨　　　　　　　　　　20g乳糖　　　　　　　　　　　10g0

67、.04%溴甲酚紫水溶液　　　 25mL蒸餾水　　　　　　　　　　1000mLpH7.4,2）制法,將蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗(yàn)要求分裝30mL、10mL或3mL，并放入一個(gè)小倒管，115℃高壓滅菌15min。注：①雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。　?、?0mL和10mL乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用，3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗(yàn)用。,35、EC肉湯,1）成分,胰蛋白胨　　　　　　　　20g

68、3號(hào)膽鹽(或混合膽鹽)　　 1.5g乳糖　　　　　　　　　　5g磷酸氫二鉀　　　　　　　4g磷酸二氫鉀　　　　　　　1.5g氯化鈉　　　　　　　　　5g蒸餾水　　　　　　　　　1000mL,2）制法,將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121℃高壓滅菌15min，最終pH為6.9±0.2。,36、緩沖蛋白胨水(BP),1）成分,蛋白胨　　　　　　　　　　　　10g氯化鈉　　　　　　　　　　　　5g

69、磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)　　9g磷酸二氫鉀　　　　　　　　　 1.5g蒸餾水　　　　　　　　　　　　1000mLpH7.2,2）制法,按上述成分配好后以大燒瓶裝，121℃高壓滅菌15min。臨用時(shí)無(wú)菌分裝每瓶225mL。注：本培養(yǎng)基供沙門(mén)氏菌前增菌用。,37、氯化鎂孔雀綠增菌液(MM),1）成分,甲液　　胰蛋白胨　　　　　　5g　　氯化鈉　　　　　　　8g　　磷酸二氫鉀　　　　　1.6g