滸苔多糖提取技術(shù)和分離純化條件以及調(diào)節(jié)血脂作用研究.pdf

1、目的:
　　研究滸苔多糖(enteromorphapolysaccharideEP)的分離純化條件和結(jié)構(gòu)特點;比較不同提取方法對滸苔多糖得率及活性基團的影響;研究不同提取方法得到的滸苔多糖(EP)調(diào)節(jié)血脂及抗脂質(zhì)過氧化作用,并探討其可能機制。
　　方法:
　　1、以福建地區(qū)所產(chǎn)的滸苔為研究對象,用分光光度法,比較熱水提取、超聲波提取、微波提取、酶法提取以及聯(lián)合不同方法提取對滸苔多糖得率及多糖中糖醛酸和硫酸根含量。

2、>　　2、采用二乙氨基乙基纖維素(DEAE-cellulose)和Sephadex-100凝膠分離純化滸苔多糖,用紅外線光譜分析結(jié)構(gòu),用氣相色譜分析單糖組成。
　　3、高脂飼料喂養(yǎng),建立高血脂大鼠模型,分別采用酶法提取的EP和超聲波提取的EP干預(yù)40天,檢測血脂水平和抗氧化指標(biāo);HE染色觀察肝臟結(jié)構(gòu);逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測定肝臟組織中的卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(Lact)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(Hmg

3、cr)和三磷酸腺苷結(jié)合盒A1(AbcA1)mRNA的表達水平。
　　結(jié)果:
　　1、滸苔多糖提取方法比較
　　在單一的提取方法,以酶法的EP提取量較高。聯(lián)合兩種方法的提取量較單一方法高,聯(lián)合三種方法的提取量較兩種方法高。但是不能增加單位多糖中糖醛酸和硫酸根的提取量。
　　2、滸苔多糖的分離純化條件和結(jié)構(gòu)特點
　　提取的滸苔多糖,經(jīng)DEAE纖維素分離得到4個組分,分別為EP1、EP2、EP3、EP4,其中EP

4、2占所回收多糖的比例達81％,EP2經(jīng)Sephadex-100分離,時呈現(xiàn)單一對稱峰。紅外線光譜分析顯示,EP2為糖類化合物,且有硫酸酯結(jié)構(gòu);經(jīng)氣相色譜檢測顯示,EP2由鼠李糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、巖藻糖、甘露糖和半乳糖組成,各種單糖的比例為5.12:1.32:3.38:1.62:1:1.03。
　　3、調(diào)節(jié)血脂及抗脂質(zhì)過氧化作用結(jié)果。
　　3、1血脂指標(biāo)
　　與空白組(BCG)比較,模型組(MG)血清TC、TG、L

5、DL-C較低,HDL較高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與MG比較酶提取高劑量組(EHEP)、酶提取中劑量組(EMEP)、酶提取低劑量組(ELEP)、超聲波提取高劑量組(UMEP)、超聲波提取低劑量組(ULEP)的TC、TG較低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在TC指標(biāo)上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP低,EHEP比UHEP低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);在TG指標(biāo)上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP高,E

6、HEP比超聲波提取高劑量組(UHEP)低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);ULEP和ELEP的HDL同MG相比較高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);同陽性對照組比較,干預(yù)組的TG較陽性組(CG)更低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、2抗氧化指標(biāo)
　　與空白組(BCG)比較,MG的SOD、GSH-Px較低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);EHEP、EMEP、ELEP、UHEP、UMEP、ULEP和CG的SO

7、D較MG高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);EHEP、EMEP、ELEP、UHEP、UMEP、ULEP的GSH-Px較MG高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),在SOD指標(biāo)上上ELEP比ULEP高,EMEP比UMEP高,EHEP比UHEP高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在GSH-PX指標(biāo)上ELEP比ULEP低,EMEP比UMEP低,EHEP比UHEP低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、3病理指標(biāo)
　　大鼠肝臟切片顯示空白組肝細(xì)胞及結(jié)構(gòu)正

8、常;模型組脂肪肝癥狀明顯;陽性對照組及各個滸苔多糖的處理組脂肪肝病理癥狀較模型組有所減輕,其中CG和酶與超聲波提取的EP的中、低劑量組效果較好。兩種EP多糖在相同劑量時對高血脂減緩程度的效果相近。
　　3、4肝臟LactmRNA、Hmgar和AbcA1mRNA的表達
　　與模型組比較,EHEP組肝臟LactmRNA的表達量較高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;其他劑量組同模型組間無顯著性差異,但陽性對照組較模型組有明顯升高的趨勢,在相同劑

9、量組上,酶提取EP組的表達量要高于超聲波提取EP組。各個劑量組Hmgar的表達方面在統(tǒng)計學(xué)上無顯著性差異,但各個干預(yù)組Hmgar的表達較其他組有明顯升高的趨勢,高劑量和低劑量的酶處理組hmgcr基因表達趨勢上要高于超聲波處理組,中劑量的酶處理組基因表達趨勢上要低于超聲波EP組。AbcA1mRNA的表達在各個處理中之間無顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1.不同提取方法聯(lián)合采用能增加EP的提取量,不同的提取方法對EP的活性基團有影

10、響。
　　2.EP的主成分為EP2,EP2是一種含有硫酸酯的復(fù)合多糖。
　　3.EP具有調(diào)節(jié)血脂代謝作用
　　3.1兩種滸苔多糖均能夠調(diào)節(jié)高血脂大鼠體內(nèi)血脂的代謝,提高大鼠機體抗氧化應(yīng)激的能力,能修復(fù)受損肝細(xì)胞,起到減輕脂肪肝的作用。
　　3.2滸苔多糖能夠適當(dāng)調(diào)節(jié)肝臟中Lact、Hmgcr的表達,達到調(diào)節(jié)血脂、膽固醇代謝,從而達到降血脂的作用。
　　3.3酶提取的滸苔多糖降血脂略優(yōu)于超聲波提取的多糖,但差