尿酮體尿膽紅素尿膽原尿血紅蛋白尿肌紅蛋白乳糜尿定性檢查

1、,,邱群鳳,,尿液檢驗,,2016Mar.,龍巖市第一醫(yī)院,,,1.尿酮體檢查 2.尿膽紅素檢查 3.尿膽原檢查 4.尿血紅蛋白檢查5.尿肌紅蛋白檢查 6.乳糜尿檢查,,,當(dāng)機體能量代謝發(fā)生障礙，脂肪分解代謝增加，血中酮體升高，過多的酮體從尿中排出，稱為酮尿。,實驗一 尿酮體改良rothera法定性檢查,(羅瑟拉),,,實驗一 尿酮體改良rothera法定性檢查,【原理】本法對 乙酰乙酸

2、靈敏度為80mg/L 丙酮 靈敏度為 1000mg/L,,亞硝基鐵氰化鈉法(改良rothera法),,,【操作】（詳見實驗課本 P96 ） 1．加酮體粉 : 1小勺 2．滴加尿液 : 2~3滴,沒過酮體粉為宜 3．觀察結(jié)果 : 如下規(guī)則,,,【干擾因素】,,,【注意事項】1.試劑配制要準(zhǔn)確,易受潮,應(yīng)密閉、干燥保存；2.乙酰乙酸不穩(wěn)定,丙酮易揮發(fā),使用新鮮尿液；3.控制反應(yīng)溫度,實驗室溫度過低

3、時在30℃水浴箱中完成；4.存在大量非結(jié)晶尿酸鹽時，可能出現(xiàn)橙色反應(yīng)影響結(jié)果判斷，離心除去。,,,實驗二 尿膽紅素Harrison法定性檢查,膽紅素+氯化鋇→沉淀+三價鐵→膽青素/膽綠素/膽黃素 (藍綠色/綠色或黃綠色),酸性條件,↓,【原理】,(哈里森),,,【操作】（詳見實驗課本 P97 ） 1.加尿液: 加尿液5ml2.吸附膽紅素: 加2.5ml氯化鋇

4、溶液于尿中→混勻→離心3~5min→棄上清液3.加試劑: 向沉淀表面加Fouchet試劑2滴→放置片刻,觀察沉淀表面顏色變化4.判斷結(jié)果,,,,【結(jié)果判斷】,,,【干擾因素】,,,【注意事項】1. 使用新鮮尿液,避光收集,堿性尿液先酸化;2. 保證硫酸根離子充足,確保能產(chǎn)生沉淀;3. 嚴(yán)格控制加入Fouchet試劑量;4. 注意可能影響結(jié)果藥物的因素;5. 改實驗法優(yōu)點:靈敏度較高,0.9umpl/L,,,實

5、驗三 尿膽原改良Ehrlich法定性檢查,【原理】,尿膽原+對二甲氨基苯甲醛→櫻紅色化合物,①簡單快速，分析儀，定性或定量； ②不同試帶靈敏度不同（1-4mg/L）。③偶氮反應(yīng)試帶不受膽紅素影響，對尿膽原特異。,方法學(xué)評價,(埃利希),酸性條件,↓,,,【操作】（詳見實驗課本 P99 ） 1.加入氯化鋇除去膽紅素: 尿液與Bacl2比例為 4:12.加尿液:加尿液`shang qing ye 2ml3.加試劑:加Ehrl

6、ich試劑0.2ml,室溫下靜置10min4.觀察結(jié)果:在白色襯紙下,從管口向管底觀察顏色變化5.稀釋陽性標(biāo)本并重復(fù)操作 ( P99 ),,,,【結(jié)果判斷】,,,【干擾因素】 Ehrlich醛反應(yīng),,,【注意事項】1．尿液標(biāo)本避光收集2. 尿膽原與飲水量,排尿時間,pH的關(guān)系3. 控制試劑與標(biāo)本比例4. 注意實驗溫度5. 尿液標(biāo)本中含有影響結(jié)果的物質(zhì)6. 稀釋陽性標(biāo)本時不高于1:1607. Ehrlich試劑與尿液的比

7、例應(yīng)控制在10:1,,,實驗四 尿血紅蛋白鄰聯(lián)甲苯胺法定性檢查,尿液中Hb來源： ①血管內(nèi)溶血 ②尿路出血,正常人血漿中游離Hb微量(50mg/L),與結(jié)合珠蛋白形成Hb-Hp復(fù)合物，在單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)代謝，故尿中Hb極微。定性：陰性,驗證尿液潛在出血的試驗: 隱血試驗(occult blood test),,,【原理】,（色素原）,,,【操作】（詳見實驗課本 P101 ） 1.滴加尿液：先

8、滴1滴在濾紙上2.烘干濾紙：烘干后痕跡處繼續(xù)滴1滴尿液,反復(fù)3~4次3.加試劑:鄰聯(lián)甲苯胺冰醋酸溶液2~3滴,再滴3%過氧化氫 2~3滴4.觀察結(jié)果:立即觀察顏色變化,,,,【結(jié)果判斷】,,,【注意事項】1.器材合格: 濾紙質(zhì)量優(yōu)良,試驗用具無血跡或膿液2.標(biāo)本新鮮: 可先煮沸,以破壞白細(xì)胞中的過氧化氫酶及其他易熱性觸酶3. 烘干濾紙: 應(yīng)少量多次并保證標(biāo)本量足夠4.保證試劑有效5.控制試劑劑量,,,實驗五 尿肌紅蛋白鄰

9、聯(lián)甲苯胺法定性檢查,【原理】肌紅蛋白和血紅蛋白一樣，分子中含血紅素基因，具有類過氧化物酶活性能用聯(lián)苯胺和鄰聯(lián)甲苯胺與過氧化氫反應(yīng)檢出．肌紅蛋白能溶于80%飽和度的硫酸銨溶液中而血紅蛋白則不能，因而可鑒別．,,,【操作】（詳見實驗課本 P102 ） 1. 以磺基水楊酸定性尿蛋白2. 以鄰聯(lián)甲苯胺法定性血紅蛋白3. 加尿液,加入硫酸銨沉淀血紅蛋白4. 再次定性血紅蛋白5. 判斷結(jié)果,,,【注意事項】1. 標(biāo)本新鮮2.

10、 加入硫酸銨應(yīng)緩慢,防局部溫度過高,將肌紅蛋白一并沉淀3. 可用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5,,,實驗六 乳糜尿定性檢查,【原理】乳糜由脂肪微粒組成,可溶于乙醚,較大脂?？赏ㄟ^脂溶性染料蘇丹3著色識別,而脂肪被萃取而使尿液由乳濁變澄清.為乳糜定性試驗陽性,,,【操作】（詳見實驗課本 P104 ） 1. 溶解脂肪2. 靜置離心3. 隔水蒸干4. 制片染色5. 觀察結(jié)果,,,【注意事項】1. 加熱加酸可除去非晶