動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)

1、◆ 動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng),◆ 動(dòng)物細(xì)胞融合,◆ 單克隆抗體制備,◆ 細(xì)胞核移植技術(shù)和動(dòng)物體克隆動(dòng)物,動(dòng)物細(xì)胞工程,(1) 動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng),1、定義:,2、選材：,動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)指在體外模擬動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境，將動(dòng)物細(xì)胞或組織在無菌，溫度適宜和營養(yǎng)充分的條件下，使其繼續(xù)生長，增殖并維持原有結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。,,原因:細(xì)胞生命旺盛，分裂能力強(qiáng).,腫瘤組織或細(xì)胞 ＞ 正常組織或細(xì)胞,動(dòng)物組織或細(xì)胞培養(yǎng)的難

2、易程度,分化程度低的組織或細(xì)胞 ＞ 分化程度高的組織或細(xì)胞,幼體組織或細(xì)胞 ＞ 老齡組織或細(xì)胞,3、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件：,(1)、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素 定期更換培養(yǎng)液 ）,防止培養(yǎng)過程中污染 防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害,(2)、培養(yǎng)基成分：種類：,葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等,?,?,(3)、溫度和PH 37 ℃左右, 7.2-7.4

3、(4)、氣體環(huán)境 O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）,和植物組織培養(yǎng)基相比有何獨(dú)特之處？,液體培養(yǎng)基 、成分中有動(dòng)物血清（補(bǔ)充合成培養(yǎng)基所缺乏的物質(zhì)）等,4.動(dòng)物細(xì)胞生長特性：,細(xì)胞貼壁： 懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。細(xì)胞的接觸抑制： 當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞的接觸抑制。,5.過程：,原代培養(yǎng)：一般細(xì)胞繁殖1-

4、10代，就發(fā)生接觸抑制不在分裂，這種培養(yǎng)就要原代培養(yǎng)。,傳代培養(yǎng)：貼滿瓶壁的細(xì)胞由于接觸抑制不再分裂，需重新用胰蛋白酶處理，再分瓶培養(yǎng)讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。,細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右生長停止，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)存活到40~50代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株，,細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。,動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官,,細(xì)胞懸

5、浮液,胰蛋白酶,,10代細(xì)胞,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),,無限傳代,,單個(gè)細(xì)胞,,加培養(yǎng)液,5.過程：,動(dòng)物組織塊,細(xì)胞懸液,原代培養(yǎng),傳代培養(yǎng),胰蛋白酶處理,幼齡動(dòng)物的器官組織；動(dòng)物胚胎,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),1.胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細(xì)胞間的物質(zhì)是什么成份？2.細(xì)胞膜的主要成份是什么？胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉嗎？3.既然胰蛋白酶能將細(xì)胞消化掉，那將動(dòng)物組織分散成單個(gè)細(xì)胞要注意什么問題呢？能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？,胰

6、蛋白酶水解蛋白質(zhì),蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)和磷脂,能,注意時(shí)間的控制,不能，因?yàn)閮烧叩淖钸mPH不同，而正常組織細(xì)胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近,問題與思考,5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個(gè)體？,成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)，使每個(gè)細(xì)胞與培養(yǎng)液接觸,不能，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞的全能性會(huì)隨著動(dòng)物細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到抑制,4、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞？,6、

7、培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)到什么時(shí)候就不再分裂、增殖？,7、如此時(shí)細(xì)胞數(shù)量并未達(dá)到人們的需求，應(yīng)該怎樣辦？,當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞分裂就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫接觸抑制。,將貼滿細(xì)胞壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。,這樣的過程叫做傳代培養(yǎng),8、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？,9、傳代培養(yǎng)的細(xì)胞能一直傳代下去嗎？,10、有些為何能一直傳下去？,在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng),不能,遺

8、傳物質(zhì)發(fā)生改變，向癌細(xì)胞方向發(fā)展。,細(xì)胞的全能性,細(xì)胞株、細(xì)胞系,植物體,培養(yǎng)結(jié)果,獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物,快速繁殖、培育無病毒植株等,培養(yǎng)目的,葡萄糖、動(dòng)物血清,蔗糖、植物激素,培養(yǎng)基特有成分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基性質(zhì),細(xì)胞增殖,原理,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng),植物組織培養(yǎng),比較項(xiàng)目,植物組織和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,6、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用,大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞可以用于檢

9、測有毒物質(zhì)，判斷某種物質(zhì)的毒性為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù),1、下列屬于動(dòng)物細(xì)胞工程中的工具是（ ） A．限制性內(nèi)切酶 B．DNA連接酶 C．胰蛋白酶 D．果膠酶,C,2、在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的有關(guān)敘述中，正確的是（ ）A．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的就是為了獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶處理使細(xì)胞分散C．細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過程中D．培養(yǎng)至50

10、代后繼續(xù)傳代的細(xì)胞是細(xì)胞株,B,3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于（ ） A.培養(yǎng)基不同； B.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行； C.動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細(xì)胞不能； D.動(dòng)物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細(xì)胞只能培 養(yǎng)為胚狀體。,A,4、下圖是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請(qǐng)據(jù)此圖回答,(1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自___________。(2)容器A中的動(dòng)物器官或組織

11、首先要進(jìn)行的處理是__________，然后用 酶處理，這是為了使細(xì)胞分散開來。這樣做的目的是_______________. (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基成分有_______ ___等。在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，一般傳到第 代，有許多細(xì)胞衰老死亡，到這時(shí)的培養(yǎng)稱為___________.,幼齡動(dòng)物的器官、組織或動(dòng)物胚胎,,,,,,原代培養(yǎng),10,葡萄糖、氨基酸、無機(jī)

12、鹽、維生素和動(dòng)物血清,使每個(gè)細(xì)胞能與培養(yǎng)液接觸,胰蛋白,剪碎,,(4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中，用_____處理，然后配置成___________，再分裝。(5)在C瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞全部死亡。原因是________________。,細(xì)胞沒有發(fā)生癌變,胰蛋白酶,細(xì)胞懸浮液,,5．某研究小組進(jìn)行藥物試驗(yàn)時(shí)，以動(dòng)物肝細(xì)胞為材料，測定藥物對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒性。供培養(yǎng)的細(xì)胞有甲、乙兩種，甲細(xì)胞為肝腫瘤細(xì)胞，乙細(xì)胞為正

13、常肝細(xì)胞。請(qǐng)回答下列有關(guān)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：（1）將數(shù)量相等的甲細(xì)胞和乙細(xì)胞分別置于培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)液及其它培養(yǎng)條件均相同。一段時(shí)間后，觀察到甲細(xì)胞數(shù)量比乙細(xì)胞數(shù)量__________。（2）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常在合成培養(yǎng)基中加入適量血清，其原因是________ 。細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行，CO2的作用______________。,多,補(bǔ)充合成培養(yǎng)基缺乏的物質(zhì),維持溶液的PH,,（3）在兩種細(xì)胞生長過程中，當(dāng)

14、乙細(xì)胞鋪滿瓶壁時(shí)，其生長____________。藥物試驗(yàn)需要大量細(xì)胞，兩種細(xì)胞頻繁傳代，甲細(xì)胞比乙細(xì)胞可以傳代的次數(shù)更_______。若用動(dòng)物的肝臟組織塊制備肝細(xì)胞懸液，需用___________消化處理。（4）為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的_____________。,停止,多,胰蛋白酶,抗生素,,（5）已知癌細(xì)胞X過量表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，要試驗(yàn)一種抗腫瘤藥物Y對(duì)甲細(xì)胞生長的影響，可將甲細(xì)胞分為A