豬后腸產(chǎn)甲烷菌群多樣性及其與乙酸生成關(guān)系的研究.pdf

1、產(chǎn)甲烷菌在單胃動物后腸的微生物發(fā)酵中起著重要的作用,其能利用微生物發(fā)酵產(chǎn)生的氫和二氧化碳生成甲烷,從而使后腸維持較低的氫氣壓,并促進有機物質(zhì)的降解。迄今為止,國內(nèi)外對豬后腸產(chǎn)甲烷菌的研究很少,為豐富人們對豬后腸產(chǎn)甲烷菌的理論認(rèn)識,了解甲烷菌與乙酸還原菌在氫競爭中的關(guān)系；本研究以豬為試驗動物,應(yīng)用16SrRNA基因的克隆分析技術(shù)和RFLP分析技術(shù)相結(jié)合,研究了育肥豬糞便中產(chǎn)甲烷菌的多樣性；利用DGGE技術(shù)研究了仔豬后腸中的產(chǎn)甲烷菌隨時空變

2、化的演變規(guī)律；利用體外發(fā)酵技術(shù)初步探究了仔豬后腸的產(chǎn)甲烷菌與乙酸還原菌的競爭關(guān)系。試驗分為以下三個部分進行。
　　 1豬后腸中產(chǎn)甲烷菌的多樣性研究
　　 采用產(chǎn)甲烷菌特異性引物Met86F/Met1340R,建立了豬糞便中的產(chǎn)甲烷古菌的克隆庫。共挑取73個克隆,對所挑克隆進行限制性內(nèi)切酶酶切分類,從分類單元中挑取兩個克隆進行測序,所得序列與Genebank上相似序列比對結(jié)果顯示,與Methanobrevibacter s

3、p.WBY1相似的克隆占總克隆數(shù)的43.8％,與Methanosphaerastadtmanae相似的克隆占總克隆數(shù)的24.7％,余下克隆屬于一類未知的產(chǎn)甲烷古菌,所占比例31.5％。結(jié)果說明,豬糞便中的優(yōu)勢菌為甲烷短桿菌屬的Methanobrevibactersp.WBY1,其次為一類未知的產(chǎn)甲烷古菌。
　　 2豬結(jié)腸中甲烷菌群多樣性的時空變化規(guī)律研究
　　 利用基于16S rRNA基因的PCR-DGGE技術(shù)研究了仔豬

4、從哺乳至斷奶后結(jié)腸中產(chǎn)甲烷菌菌群的變化,對其圖譜進行分析,并對其中優(yōu)勢條帶進行了測序。DGGE圖譜分析顯示,斷奶前后產(chǎn)甲烷菌群保持穩(wěn)定；斷奶后兩周產(chǎn)甲烷菌條帶明顯增多。16S rRNA基因序列分析表明,這些條帶主要屬于甲烷桿菌綱和一類未知產(chǎn)甲烷菌。結(jié)果說明,日糧可能是影響產(chǎn)甲烷菌種群的主要因素。
　　 3體外發(fā)酵法研究豬腸糞樣中甲烷與乙酸生成的關(guān)系
　　 采用體外批次培養(yǎng)技術(shù),以豬糞便為接種物,研究了甲烷生成與乙酸產(chǎn)量間