天然色素應(yīng)用開發(fā)初步研究[畢業(yè)設(shè)計(jì)]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　?。ǘ?屆）</b></p><p>　　天然色素應(yīng)用開發(fā)初步研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物工程 </p&

2、gt;<p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要:靈菌紅素具有免疫抑制、抗細(xì)菌、抗真菌、和抗瘧疾等多種生物活性。其作為一種天然抑菌

3、劑，在紡織業(yè)，畜牧業(yè)也有較好的發(fā)展前景。本研究主要測(cè)試了靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌和黑曲霉的抑菌性，確定其最小抑菌濃度及殺菌濃度，并定性的測(cè)定靈菌紅素腈綸織物對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄菌的抑菌圈。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌具有抑菌效果，而對(duì)霉菌幾乎沒有抑菌效果，靈菌紅素腈綸織物對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄球菌具有較明顯的抑菌效果。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 靈菌紅素；最小抑菌濃度；最小殺菌濃度</p>

4、<p>　　Abstract: Prodigiosin has the advantages of immunosuppressive, anti-bacterial, anti-fungal and anti-malaria. As a natural antimicrobial agent, prodigiosin possesses good prospects for development in the text

5、ile industry, animal husbandry. The study tested the antimicrobial activity of prodigiosin on Pseudomonas aeruginosa and Aspergillus niger, to determined the minimum inhibitory concentrations and bactericidal concentrati

6、on, and analysed qualitatively the inhibitory zone of texture dyed by pro</p><p>　　Keywords: Prodigiosin; MIC；MBC</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　摘要錯(cuò)誤!未定義書簽。</p>

7、<p>　　Abstract錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1 緒論錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.1 靈菌紅素簡(jiǎn)介錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.2 靈菌紅素的生物活性錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.2.1 抗腫瘤作用錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p

8、>　　1.2.2 除藻活性錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　1.2.3 抗菌作用2</p><p>　　1.2.4 抗原生動(dòng)物活性2</p><p>　　1.3 靈菌紅素應(yīng)用最新進(jìn)展3</p><p>　　1.4 問題的提出及研究?jī)?nèi)容3</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)部分錯(cuò)誤!未定義書

9、簽。</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)器材錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　2.1.1 菌種錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和藥品錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　2.2 分析方法5</p><p>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容錯(cuò)誤!未定義書簽。</p>

10、<p>　　2.3.1 靈菌紅素提取錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　2.3.2 腈綸染色工藝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　2.3.2.1染料的制備7</p><p>　　2.3.2.2染色工藝7</p><p>　　2.3.3 抑菌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備7</p><p>　　2.3.4

11、 指示菌菌懸液的制備7</p><p>　　2.3.5 抑菌圈的測(cè)定7</p><p>　　2.3.6 最小抑菌濃度的測(cè)定8</p><p>　　2.3.7 最小殺菌濃度的測(cè)定8</p><p>　　3 結(jié)果與分析9</p><p>　　3.1 靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌試驗(yàn)

12、9</p><p>　　3.2 紅色素對(duì)黑曲霉抑菌圈測(cè)定錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　3.3 靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌最小抑菌濃度測(cè)定錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　3.3.1 銅綠假單胞菌最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定11</p><p>　　3.3.2 靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定錯(cuò)誤!未定義書

13、簽。</p><p>　　4 結(jié)論錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　參考文獻(xiàn)錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p>　　致 謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　1 緒論</b></p><p>　　1.1 靈菌紅素簡(jiǎn)介</p><p>　　靈菌

14、紅素(prodigiosins)又稱靈菌素、靈桿菌素，分子式為C20H25N30 (M=323.2)，具有三吡咯環(huán)骨架結(jié)構(gòu)[1-2]，根據(jù)其不同的側(cè)鏈基鏈基團(tuán)，靈菌紅素族還包括Prodigiosin25-C，metacycloProdigiosin Prodigiosen Cycleprodigiosin， desmethoxyprodigiosin和Uncedylprodigiosin等一系列結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似的物質(zhì)。 靈菌紅素是由沙雷氏

15、菌、放線菌等細(xì)菌產(chǎn)的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有免疫抑制、抗細(xì)菌、抗真菌、和抗瘧疾等多種生物活性。</p><p>　　靈菌紅素呈暗紅色，具有綠色反光，熔點(diǎn)為151．152℃。在堿性或中性溶液中呈橙黃色，酸性溶液中呈紅色。在甲醇溶液中，酸性條件下在540 am處有特征吸收，堿性條件下在466 nm處有特征吸收， 靈菌紅素屬于脂溶性色素，易溶于甲醇，丙酮，氯仿和苯，不溶于水，在極性較強(qiáng)的酸性和堿性水溶液中微溶，在極性較弱的有

16、機(jī)溶劑如乙醚或石油醚中微溶或不溶，靈菌紅素對(duì)溫度穩(wěn)定，但受pH的影響較大，酸性環(huán)境中能保持較長(zhǎng)的時(shí)間，堿性條件下則損失較大；A13+，Ca2+，K+，Ba2+等金屬離子對(duì)PG的穩(wěn)定性影響不大，Zn2+有使靈菌紅素增色的作用，Mg2+和Mn2+對(duì)PG有一定的破壞作用，Pb2+可以絡(luò)合靈菌紅素，使之成為沉淀，白光和藍(lán)光使靈菌紅素發(fā)生光解，在紅光和遠(yuǎn)紅光下靈菌紅素則不會(huì)降解。</p><p>　　1.2 靈菌紅素的生

17、物活性</p><p>　　1.2.1 抗腫瘤作用</p><p>　　Montaner 等[3]的研究成果表明，靈菌紅素具有誘使人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株DLD-1和SW-620以及人胃癌細(xì)胞株HGT-1凋亡的功能，特別是對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株SW-620更具明顯效果，其誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡呈現(xiàn)劑量依賴性，主要表現(xiàn)為細(xì)胞收縮、肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)構(gòu)重組等。</p><p>　　有人對(duì)

18、于海洋羽毛山海綿Mycaleplumose的放線菌糖多孢菌Saccharopolyspora sp．(SP2．10)產(chǎn)生的十一烷基靈菌紅素十一烷基靈菌紅素Metacycloprodigiosin（MP）抗腫瘤活性及其作用機(jī)制進(jìn)行了研究。他們先采用MTT法觀察檢測(cè)了MP對(duì)小鼠白血病細(xì)胞株P(guān)388、人肝癌細(xì)胞株BEL．7402細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)，測(cè)試了MP對(duì)P388、BEL 細(xì)胞周期變化的影響；采用Westem Blot法分析了

19、PARP的裂解情況，從而判斷MP誘導(dǎo)了兩個(gè)細(xì)胞系凋亡活性。研究表明，MP具有明顯抑制P388、BEL 7402腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的功能，其將細(xì)胞阻斷于G2／M期，從而誘導(dǎo)凋亡；MP導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的重要機(jī)制是其誘導(dǎo)活性氧，并與其誘導(dǎo)的P38、JNK活化密切相關(guān)，而與ERKl／2活化無關(guān)；并且初步發(fā)現(xiàn)MP還能夠抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié)，可能對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移具有抑制作用[4]。</p><p>　　也有人通過MTT 法研究了靈菌紅

20、素對(duì)人胰腺癌細(xì)胞8898的增殖抑制作用和部分作用機(jī)理, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,加入靈菌紅素后的細(xì)胞表現(xiàn)出了明顯的凋亡細(xì)胞特異性，對(duì)于惡性腫瘤細(xì)胞,靈菌紅素在24h 培養(yǎng), IC50值約為20～25μg·ml - 1時(shí)即表現(xiàn)出相當(dāng)強(qiáng)的殺傷力。靈菌紅素同時(shí)也影響了腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果暗示靈菌紅素可能能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及增殖靶向性抗腫瘤細(xì)胞的作用。因此靈菌紅素作為一種汲取潛力的抗癌新藥,在這方面具有很大的研究?jī)r(jià)值[5,6]。</

21、p><p>　　1.2.2 除藻活性</p><p>　　靈菌紅素(prodigiosin)是由多種放線菌(Streptomyces)和細(xì)菌(Serratia, Pseudomonas)產(chǎn)生的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物。最近日本科學(xué)家也在海邊篩選到一株能生產(chǎn)靈菌紅素類似物PG-L-1 的海洋細(xì)菌MS-02-063,通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),該靈菌紅素類似物對(duì)H. akashiwo 、H.circularisqua

22、ma、C. polykrikoides、Gyrodiniumimpudicum 和Alexandrium tamarense 具有一定的除藻活性。同時(shí)韓國(guó)科學(xué)家在海邊土壤里篩選到一株能夠產(chǎn)生靈菌紅素的海洋細(xì)菌,并將其命名為Hahella chejuensis KCTC2396,研究發(fā)現(xiàn)，該細(xì)菌產(chǎn)生的擁有抗生素活性的靈菌紅素具有強(qiáng)烈的細(xì)胞溶解酶活性,對(duì)海洋赤潮藻C. polykrikoides 具有較好的除藻活性[7].</p>

23、;<p>　　1.2.3 抗菌作用</p><p>　　沙雷氏菌株B2是一種能產(chǎn)生紅色素的對(duì)抗性細(xì)菌，在植物中注入該細(xì)菌一小時(shí)后在接入病原體，能有效阻止由Rhizoctonia solani AG-1 IA.引起的大米外層覆蓋物凋零（Rice sheath blight）的疾病發(fā)生，大量實(shí)驗(yàn)表明從稻米植物和根圍中分離得到的細(xì)菌在野外條件下可以調(diào)停生物控制作用劑產(chǎn)生的抗生素產(chǎn)品[8]。</p&

24、gt;<p>　　實(shí)驗(yàn)條件下，由沙雷氏菌產(chǎn)生的天然紅色素在植物疾病的生物控制方面具有一定影響。但他在農(nóng)業(yè)條件下不穩(wěn)定，另外，多種環(huán)境因素都會(huì)削弱它的作用。Nobutaka Someya等[9]研究了附生植物的微生物所產(chǎn)靈菌紅素在生物控制過程中的作用的穩(wěn)定性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，固有附生植物微生物可能可以通過削弱藥物抗生素的能力從而妨礙植物病原體與生物控制藥物的相互作用。</p><p>　　通過微生物進(jìn)行

25、生物控制從而防止植物生病是相比于化學(xué)殺蟲劑更有前景的選擇，沙雷氏菌能夠有效控制櫻草屬植物和稻米中真菌類疾病，通過產(chǎn)生多種殼多糖和抗生素靈菌紅素從而誘導(dǎo)植物系統(tǒng)產(chǎn)生抵抗力。Tsukuba等[10]將從沙雷氏菌中提取疾病抑制基因?qū)雴?dòng)子控制的稻米細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)這些基因修飾過的微生物能不受生物及非生物因素影響而有效抑制由Pyricularia oryzae引起的稻米爆發(fā)性疾病。</p><p>　　1.2.4 抗原生動(dòng)

26、物活性</p><p>　　經(jīng)研究表明，靈菌紅素也具有抗原聲動(dòng)物活性。它能保護(hù)海洋細(xì)菌免遭太陽輻射損害或</p><p>　　原生動(dòng)物侵蝕，具有抗Dinoflagellates的活性[11]。</p><p>　　1.3 靈菌紅素應(yīng)用最新進(jìn)展</p><p>　　隨著畜牧業(yè)規(guī)模化、商業(yè)化的發(fā)展，開發(fā)高效、無殘留、無公害的安全飼料添加劑是社會(huì)

27、發(fā)展的要求和必然結(jié)果。靈菌紅素作為無公害天然抗生素，抗病原（微生物或寄生蟲）活性強(qiáng)，不干擾腸道正常菌群的微生態(tài)平衡，促進(jìn)畜禽增重以及提高飼料轉(zhuǎn)化率效果顯著； 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不殘留或極少殘留于畜產(chǎn)品中；細(xì)菌或寄生蟲不易對(duì)其產(chǎn)生耐藥性，與其他抗生素不產(chǎn)生交叉耐藥性；毒性低，安全范圍大，對(duì)人畜無害，且有抗癌、抗突變突變等作用[12,13]，作為一種新型的飼料添加劑，具有廣闊的發(fā)展前景。</p><p>　　隨

28、著人們生活水平的提高，人們對(duì)安全，健康，綠色的產(chǎn)品需求日益擴(kuò)大，為了滿足社會(huì)需求，特別是內(nèi)衣，汗衫，襪子等生產(chǎn)能夠抗菌的紡織物是將來發(fā)展的一大趨勢(shì)[14]，靈菌紅素是一種天然色素，可以作為紡織工業(yè)中的染料，具無毒無公害，具抗菌性能，符合社會(huì)需求的紡織品用天然抗菌劑的要求。具有穩(wěn)定性好，安全性高，抑菌能力強(qiáng)，生產(chǎn)方便等優(yōu)點(diǎn)，目前正在開發(fā)應(yīng)用當(dāng)中[15]。</p><p>　　靈菌紅素兼有營(yíng)養(yǎng)保健，抗癌抗菌和天然紅色

29、素等多重功能，應(yīng)用于醫(yī)療食品紡織工業(yè)都具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。綜之，作為天然紅色素，PG具多種獨(dú)特的藥理生理活性，其必將在醫(yī)藥、食品、環(huán)保等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。</p><p>　　1.4 問題的提出及研究?jī)?nèi)容</p><p>　　靈菌紅素作為一種由微生物產(chǎn)生的天然色素，兼具有多種優(yōu)越的生物活性作用，目前已受到人們的關(guān)注。但主要研究還是集中在抗腫瘤和其生產(chǎn)制備工藝改進(jìn)方面。在全球綠色環(huán)保浪潮的影響下

30、，天然植物染色又重新回到人們的視野。天然染料具有生態(tài)平衡特點(diǎn)：色澤自然鮮艷、安全性高、無毒且有一定的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥理保健作用、作為生物可再生資源，生產(chǎn)過程對(duì)環(huán)境友好，無三廢處理問題，所以重新引起染料界關(guān)注。目前印度、意大利和德國(guó)等國(guó)家的一些染料公司都在開發(fā)生產(chǎn)天然植物染料，但植物染料的獲取存在突出問題，由于染料植物中色素含量較少，想要獲得足夠的染料，就必須大量地采摘和砍伐植物，造成對(duì)生態(tài)環(huán)境的破壞，違背了利用植物染料從而達(dá)到環(huán)保的初衷。而

31、靈菌紅素作為一種天然色素，又具有良好的抑菌性能，因而在天然染料的研究，特別是具有抗菌能力的天然染料的研究方面具有特別意義。另一方面，靈菌紅素作為一種微生物產(chǎn)的無公害天然抗生素，有利于大規(guī)模生產(chǎn)，抗病原（微生物或寄生蟲）活性強(qiáng)，且有抗癌、抗突變等作用，與傳統(tǒng)的抗生素比較具有一定的優(yōu)勢(shì)，因此，其作為抗生素應(yīng)用于飼料添加劑方面具有很大的研究?jī)r(jià)值。雖然靈菌紅素在作為天然染料及飼料添加劑等方面的研</p><p><

32、b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)器材</b></p><p><b>　　2.1.1 菌種</b></p><p>　　金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，銅綠假單胞菌，黑曲霉，均由實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和藥品&l

33、t;/p><p><b>　　表2-1 實(shí)驗(yàn)儀器</b></p><p><b>　　表2-2 實(shí)驗(yàn)藥品</b></p><p><b>　　2.2 分析方法</b></p><p>　　利用銅綠假單胞菌，黑曲霉作為指示菌，采取倍數(shù)稀釋法確定其最小抑菌濃度MIC，轉(zhuǎn)接高于未長(zhǎng)菌濃

34、度培養(yǎng)基中的液體于新培養(yǎng)基中以確定其最小殺菌濃度MBC，實(shí)驗(yàn)結(jié)果長(zhǎng)菌表示為+，+越多表示菌越濃，-表示未長(zhǎng)菌。利用大腸桿菌，金黃色葡萄球菌作為指示菌，采用平板涂布法得到染有靈菌紅素的腈綸織物對(duì)大腸桿菌及金黃色葡萄菌的抑菌圈，記錄抑菌圈大小，從而定性確認(rèn)靈菌紅素織物的抑菌能力。</p><p><b>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容</b></p><p>　　2.3.1 靈

35、菌紅素提取</p><p>　　實(shí)驗(yàn)室小量制備靈菌紅素：采用普通的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，再加甘油，具體配方見表2-3,過程見圖2-1。如制備量稍大時(shí)，采用小型發(fā)酵罐發(fā)酵制備，見圖2-2。</p><p>　　表2-3 液體培養(yǎng)基配方</p><p>　　圖2-1 靈菌紅素實(shí)驗(yàn)室小量制備過程</p><p>　　2.3.2腈綸染色工藝</p

36、><p>　　2.3.2.1染料的制備</p><p>　　取干燥研磨后的靈菌紅素0.1g溶于25ml乙醇中，溶解后用蒸餾水定容至50ml.將50ml初染料加入錐形瓶中，同時(shí)加入50ml水以及1ml冰醋，搖勻即制得染料。 </p><p>　　圖2-2 靈菌紅素腈綸織物</p><p>　　、 2.3.2.2染色方法</p>&l

37、t;p>　　腈綸（PAN）： 染料用量為1％(o.w.f)，浴比1∶30，pH值為4.0～6.0，染色溫度為100℃，染色時(shí)間為1h。</p><p>　　2.3.3 抑菌實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備</p><p>　　1）細(xì)菌（銅綠假單胞菌）、真菌培養(yǎng)基制備</p><p>　　細(xì)菌（LB培養(yǎng)基：蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCl 10g，水1000ml pH 7.0）<

38、;/p><p>　　酵母（PDA培養(yǎng)基：土豆 200g，去皮切成小塊，煮沸30min，過濾，補(bǔ)充水至1000ml瓊脂10g,加入葡萄糖20g,若是培養(yǎng)霉菌則用蔗糖）</p><p>　　2）靈菌紅素溶液配制 稱取一定量的靈菌紅素，溶解于二甲亞砜，制成一定濃度的藥液，過濾器過濾除菌，備用。</p><p>　　3）滅菌 實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基，槍頭，培養(yǎng)皿，試管，針筒，過濾器，

39、離心管，鑷子等均進(jìn)行高壓滅菌</p><p>　　2.3.4 指示菌菌懸液的制備</p><p>　　LB培養(yǎng)基用于銅綠假單胞菌的培養(yǎng)，PDA培養(yǎng)基用于真菌培養(yǎng)，將銅綠假單胞菌菌種平板劃線接種于LB培養(yǎng)基上，37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h；將霉菌菌種平板劃線接種于PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫箱中培養(yǎng)48h。用接種環(huán)挑取單菌落于轉(zhuǎn)接于裝有LB培養(yǎng)基（真菌用PDA培養(yǎng)基）的錐形瓶?jī)?nèi)。恒溫震蕩培養(yǎng)12

40、-18h。作為指示菌待用。</p><p>　　2.3.5 抑菌圈的測(cè)定</p><p>　　1）靈菌紅素染色腈綸的抑菌圈測(cè)定</p><p>　　采用瓊脂平皿法。在超凈工作臺(tái)上用移液搶吸取菌懸液（大腸桿菌和金黃色葡萄球菌）0.2ml于相應(yīng)的牛肉膏蛋白胨平板上，用涂布棒將菌液涂布均勻，每種菌做兩個(gè)平行樣。將染有靈菌紅素的腈綸織物剪成直徑約2cm的圓片貼于該平板中央

41、，每種菌用未染色的腈綸做一空白對(duì)照。37℃±1℃倒置培養(yǎng)18h～24h，分別記錄抑菌圈大小。</p><p>　　靈菌紅素對(duì)真菌的抑菌圈測(cè)定</p><p>　　采用瓊脂平皿擴(kuò)散濾紙片法。在超凈工作臺(tái)上用移液搶吸取菌懸液（黑曲霉）0.2ml于相應(yīng)的PDA平板上，用涂布棒將菌液涂布均勻。將用二甲亞砜溶解的靈菌紅素配置成一濃度梯度，分別吸取20μl濃度為5mg/ml，4mg/ml，2

42、.5mg/ml，2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml，0.1mg/ml，0mg/ml（加20μl二甲亞砜作為空白對(duì)照）的靈菌紅素于干燥藥敏濾紙片（直徑5mm）貼在含菌培養(yǎng)皿上，每種菌重復(fù)做兩個(gè)平行。將培養(yǎng)皿置于真菌28℃，恒溫箱中培養(yǎng)48 h，采用十字交叉法測(cè)定含藥濾紙片的抑菌圈直徑大小，取平均值，比較抑菌效果。</p><p>　　2.3.6 最小抑菌濃度的測(cè)定</p>

43、<p>　　用液體倍數(shù)稀釋法測(cè)定最小抑菌濃度（Mininum Inhibitory Concentration MIC）即液體培養(yǎng)基按每管3ml分裝試管，再加入不同量的藥液，配成系列濃度梯度的培養(yǎng)基。接種相同量（150μl）的菌液，于37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h,另取加入與靈菌紅素最大加入量等量的二甲亞砜的試管作為對(duì)照。采用微生物比濁法比較各種抗生素抑菌活性，可在600nm下測(cè)定OD值定性比較其渾濁程度，以肉眼觀察培養(yǎng)

44、基澄清，無細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)的最低濃度為MIC。</p><p>　　2.3.7 最小殺菌濃度的測(cè)定</p><p>　　從各段藥物的MIC和高于MIC的試管中吸取0.15ml培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接于相應(yīng)的液體培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，觀察菌體的生長(zhǎng)情況，無菌落生長(zhǎng)（澄清試管）的最小濃度即為該藥液對(duì)該菌的最小殺菌濃度（MBC）。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析&

45、lt;/b></p><p>　　3.1 靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌試驗(yàn)</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)采用瓊脂平皿擴(kuò)散法定性測(cè)定及評(píng)價(jià)靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄球菌的抗菌性能，結(jié)論見表3-1.</p><p>　　表3-1 靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌圈大小</p><p>　　圖3-1靈菌紅素腈綸織物對(duì)金

46、黃色葡萄球菌抑菌圈大小</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)采用瓊脂平皿擴(kuò)散法定性測(cè)定及評(píng)價(jià)靈菌紅素腈綸織物對(duì)大腸桿菌的抗菌性能，結(jié)論見表3-2.</p><p>　　表3-2 靈菌紅素腈綸織物大腸桿菌抑菌圈大小</p><p>　　圖3-2 靈菌紅素腈綸織物大腸桿菌抑菌圈大小</p><p>　　實(shí)驗(yàn)表明，靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均

47、具有較明顯的抑菌作用，根據(jù)GB/T20944中的瓊脂平皿擴(kuò)散法的抗菌效果評(píng)價(jià)，可以看出抑菌帶寬度在0~1mm之間，式樣下無細(xì)菌繁殖，評(píng)價(jià)結(jié)果為效果好。當(dāng)評(píng)價(jià)為效果好，則認(rèn)為該樣品具有抗菌效果。</p><p>　　3.2 靈菌紅素對(duì)黑曲霉抑菌圈測(cè)定</p><p>　　靈菌紅素濃度分別為5mg/ml，4mg/ml，2.5mg/ml，2mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml，0.25m

48、g/ml，0.1mg/ml，二甲亞砜為溶劑。</p><p>　　A B </p><p>　　C D</p><p>　　E

49、 F</p><p>　　G H </p><p>　　圖3-4 分別為黑曲霉菌液涂布后所測(cè)得的抑菌圈</p><p>　　注： 1、2、3，4，5，6，7，8分別代表紅色素濃度5mg/ml，4mg/ml，2.5mg/ml，2

50、mg/ml，1mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml，0.1mg/ml，無記號(hào)的為對(duì)照二甲亞砜。其中1'，2'，3'，4'，5'，6'，7'，8'為平行對(duì)照。</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，靈菌紅素對(duì)黑曲霉基本無抑菌能力。</p><p>　　3.3 靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌最小抑菌濃度測(cè)定</p>

51、<p>　　指示菌液：銅綠假單胞菌。配制靈菌紅素濃度為4mg/ml和0.4mg/ml，二甲亞砜為溶劑，每組做兩個(gè)平行。</p><p>　　3.3.1 銅綠假單胞菌最小抑菌濃度（MIC）的測(cè)定</p><p>　　表3-3銅綠假單胞菌渾濁程度</p><p>　　將上一實(shí)驗(yàn)中加紅色素試管中未長(zhǎng)菌的濃度中的培養(yǎng)物取150μl各轉(zhuǎn)接于另一試管中培養(yǎng)24h &

52、lt;/p><p>　　表3-4銅綠假單胞菌MIC的測(cè)定</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果為 ，靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌的MIC為0.043mg/ml培養(yǎng)基。進(jìn)一步擴(kuò)大濃度梯度求MBC。</p><p>　　3.3.2 靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌最小殺菌濃度(MBC)測(cè)定</p><p>　　表3-5銅綠假單胞菌渾濁程度</p><p&

53、gt;　　A A’ B B’</p><p>　　C C’ D D’</p><p>　　E F </p><p>　　

54、圖3-4分別為不同濃度梯度的靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌作用</p><p>　　注：A,B,C,D,E,F分別對(duì)應(yīng)序號(hào)1，2，3，4，5，6，其中A',B',C',D' 分別為A,B,C,D的平行試驗(yàn)。試管5用來做對(duì)照,試管6的目的是作為標(biāo)準(zhǔn)用來判斷靈菌紅素溶液是否長(zhǎng)菌.</p><p>　　將上一實(shí)驗(yàn)中加紅色素試管中未長(zhǎng)菌的濃度中的培養(yǎng)物取150μl各轉(zhuǎn)

55、接于另一試管中培養(yǎng)24h </p><p>　　表3-6銅綠假單胞菌MBC的測(cè)定</p><p>　　A A’ B B’</p><p>　　C C’ D

56、D’ </p><p>　　圖3-5分別為不同濃度梯度的靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌的殺菌作用</p><p>　　注：A,B,C,D分別為轉(zhuǎn)接了的靈菌紅素濃度為0.78mg/ml，0.64mg/ml，0.5mg/ml，0.43mg/ml的試管，其中A',B',C',D'為平行試驗(yàn).</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果為 ，靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞

57、菌的MBC為0.78mg/ml培養(yǎng)基。</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌的最小抑菌濃度MIC為0.043mg/ml培養(yǎng)基，但最小殺菌濃度MBC為0.78mg/ml培養(yǎng)基，說明靈菌紅素對(duì)銅綠假單胞菌具有較強(qiáng)的抑菌能力，但對(duì)其殺菌能力不明顯。靈菌紅素對(duì)霉菌的抑菌效果不明顯。靈菌紅素腈綸織物對(duì)金黃色葡萄

58、球菌和大腸桿菌都具有較明顯的抑菌能力，根據(jù)GB/T20944中的瓊脂平皿擴(kuò)散法的抗菌效果評(píng)價(jià)，可以看出抑菌帶寬度在0~1mm之間，織物下無細(xì)菌繁殖，評(píng)價(jià)結(jié)果為效果好。當(dāng)評(píng)價(jià)為效果好，則認(rèn)為該樣品具有抗菌效果。說明作為天然染料的靈菌紅素在紡織業(yè)內(nèi)具有較高應(yīng)用價(jià)值。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 劉同軍, 楊海龍, 唐華. 靈菌

59、紅素的研究進(jìn)展[J]. 食品與藥品. 2007, 9(8): 47-51.</p><p>　　[2] 王春玲. 靈菌紅素生物合成與分離純化研究[J]. 合肥工業(yè)大學(xué). 2007, 5.</p><p>　　[3] Montaner B, Perez T R. The cytotoxic prodigiosin inducesphosphorylation of p38-MAPK but

60、not of SAPK/JNK[J]. Toxicol Lett. 2002, 129: 93-98.</p><p>　　[4] 李雪萍, 顧謙群, 李靜. 十一烷基靈菌紅素(metacycloprodigiosom)的提取分離及抗腫瘤活性研究[D]. 中國(guó)海洋大學(xué). 2009, 6.</p><p>　　[5] Zhang J, Liu J W, Shen Y L, et al. In

61、hibitive effect of prodigiosinon the proliferation of human malignant pancreatic cancercells[J]. Med Chem Res. 2005, 14: 181-197.</p><p>　　[6] 田中云. 靈菌紅素對(duì)人胰腺癌腫瘤細(xì)胞增殖抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 奇魯藥事. 2004, 23(10): 40-42.</p

62、><p>　　[7] Jeong H, Yim J H. Genomic blueprint of Hahella chejuensis, a marine microbe producing an algicidal agent [J]. Nucleic Acids Research.. 2005, 33(22): 7066-7073.</p><p>　　[8] Nobutaka Some

63、ya, Masami Nakajima, Ken Watanabe, Tadaaki Hibi,Katsumi Akutsu. Influence of bacteria isolated from rice plants and rhizospheres on antibiotic production by the antagonistic bacterium Serratia marcescens strain B2[J]. Th

64、e Phytopathological Society of Japan. 2003, 69: 342–347. </p><p>　　[9] Nobutaka Someya, Katsumi Akutsu, Indigenous bacteria may interfere with the biocontrol of plant diseases. Naturwissenschaften[J]. 2009,

65、96: 743–747.</p><p>　　[10] Tsukuba, Ibaraki, Ami-machi, Ibaraki. biocontrol of plant diseases by genetically modified microorganisms:current status and future prospects1[J]. National Institute for Agro-Envir

66、onmental Sciences. 2006, 94: 297–312.</p><p>　　[11] Matz C, Deines P, Boenigk J, et al. Impact of violaceinproducing bacteria on survival and feeding of bacterivorous nanoflagellates[J]. Appl Environ Microbi

67、ol. 2004, 70: 1593-1599.</p><p>　　[12] 王瑩, 萬玲麗. 綠色飼料添加劑的研究進(jìn)展及其應(yīng)用現(xiàn)狀[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2009(9): 35-38.</p><p>　　[13] 王金合. 微生態(tài)飼料添加劑及其在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用研究現(xiàn)狀[J]. 畜牧與飼料科學(xué). 2009(2): 38-42.</p><p>　　[14]

68、周瑩, 王進(jìn)美. 植物源抗菌劑在紡織工業(yè)中的應(yīng)用及前景[J]. 現(xiàn)代紡織技術(shù). 2008(6): 72-74.</p><p>　　[15] Farzaneh Alihosseini, Jozsef Lango. Mutation of bacterium Vibrio gazogenes for selective preparation of colorants[J]. American Institute