天然紅色素抗菌性能的初步研究[畢業(yè)設(shè)計(jì)]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　　（二零 屆）</b></p><p>　　天然紅色素抗菌性能的初步研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 生物工程 </

2、p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要: 靈菌紅素是具有多種生物活性的天然色素，在具有抗菌活性的天然功能染料的研究方

3、面有重要意義。本研究定性和定量的考察了靈菌紅素對常見細(xì)菌的抑菌性能，再進(jìn)一步探討了靈菌紅素在不同的PH、溫度、接觸時(shí)間條件下的抑菌穩(wěn)定性。結(jié)果表明，靈菌紅素對枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌具有良好的抑菌效果，對大腸桿茵抑制效果較弱，最小抑菌率分別為： 0.01g/L、0.002 g/L、0.005 g/L；抑菌穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，靈菌紅素在PH為5-7范圍內(nèi)具有較好的抑菌穩(wěn)定性，溫度為20-100℃內(nèi)表現(xiàn)出良好的抑菌穩(wěn)定性。&l

4、t;/p><p>　　關(guān)鍵詞: 靈菌紅素；抑菌穩(wěn)定性；MIC</p><p>　　Abstract: Prodigiosin is a secondary metabolites which produced by some microorgan-</p><p>　　ism. As a natural pigment, it has some important b

5、iological characteristics such as bacterostatic activity, and played an important role in medicine, environmental management, food, textiles, etc. We studied the antimicrobial activity of prodigiosin by qualitative and q

6、uantitative method in this research. The result showed the prodigiosins had good inhibition to B.subtilis, S.aureus and P.aeruginosa，the MIC was 0.01g/L,0.002 g/L and 0.005 g/L respectively. The experiment of antibacteri

7、al stabili</p><p>　　Keywords: prodigiosins; Antibacterial stability ; MIC</p><p><b>　　目錄</b></p><p>　　摘要----------------------------------------------------------1</

8、p><p>　　Abstract------------------------------------------------------2</p><p>　　1 緒論--------------------------------------------------------1</p><p>　　1.1 靈菌紅素的基本性質(zhì)------------------

9、---------------------------------------1</p><p>　　1.2 選題的背景及意義------------------------------------------------------------1</p><p>　　2 相關(guān)研究的最新成果動(dòng)態(tài)--------------------------------------2</p>

10、;<p>　　2.1PG 的生物活性---------------------------------------------------------------2</p><p>　　2.2 PG 的生產(chǎn)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢---------------------------------------------------3</p><p>　　2.3 本課題的研究目的----

11、------------------------------------------------------5</p><p>　　3 方法與材料--------------------------------------------------4</p><p>　　3.1 實(shí)驗(yàn)材料----------------------------------------------------

12、--------------4</p><p>　　3.2 實(shí)驗(yàn)方法------------------------------------------------------------------5</p><p>　　4 結(jié)果與分析-------------------------------------------------7</p><p>　　4.1

13、 靈菌紅素對不同微生物抑菌性能的研究---------------------------------------7</p><p>　　4.2最小抑菌濃度MIC------------------------------------------------------------8</p><p>　　4.3靈菌紅素抑菌的穩(wěn)定性研究---------------------------

14、------------------------9</p><p>　　5 結(jié)論-------------------------------------------------------13</p><p>　　致謝---------------------------------------------------------14文獻(xiàn)摘要-----------------------

15、------------------------------15</p><p><b>　　1 緒論</b></p><p>　　1.1 靈菌紅素的基本性質(zhì)</p><p>　　靈菌紅素(prodigiosins,PG)是一類天然紅色素的總稱，通常都有3個(gè)吡咯環(huán)組成的甲氧基吡咯骨架結(jié)構(gòu)，1929年由Amak等研究Serratia生長時(shí)發(fā)現(xiàn)

16、，包括prodigioSin，prodigio Sin 25-C，metacyc1oprodigiosin (MP)desmethoxyprodigiosi和uncedy1prodigiosin(UP)等。PG屬于脂溶性色素，易溶于甲醇和丙酮，不溶于水，在極性較強(qiáng)的酸性和堿性水溶液中微溶，在極性較弱的有機(jī)溶劑如乙醚或石油醚中微溶或不溶；PG對溫度穩(wěn)定，但受pH的影響較大，酸性環(huán)境中能保持較長的時(shí)間，堿性條件下則損失較大[1]；A13+，

17、Ca2+，K+，Ba2+等金屬離子對PG的穩(wěn)定性影響不大，Zn2+有使PG增色的作用，Mg2+和Mn2+對PG有一定的破壞作用，Pb2+可以絡(luò)PG，使之成為沉淀[2]；白光和藍(lán)光使PG發(fā)生光解，在紅光和遠(yuǎn)紅光下PG則不會降解[3]。</p><p>　　1.2 選題的背景及意義</p><p>　　天然色素是由天然資源獲得的色素，主要從動(dòng)物和植物組織及微生物（培養(yǎng)）中提取，其中植物性著色

18、劑占多數(shù)。天然色素不僅顏色鮮艷，而且大部分天然色素具有重要生理活性，具有增強(qiáng)人體生理機(jī)能的作用，且使用時(shí)無毒副作用，安全性高，在食品、紡織、化妝品等行業(yè)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。</p><p>　　靈菌紅素(prodigiosin，PGs)又名靈菌素、靈桿菌素，是一類由微生物產(chǎn)生的天然紅色素。自1929年P(guān)G首次從黏質(zhì)沙雷氏菌中分離出來以后，人們對其的研究就一直在不斷地進(jìn)行當(dāng)中。早期研究表明此類結(jié)構(gòu)的物質(zhì)具有抗細(xì)菌、

19、抗瘧疾，抗真菌和抗原生動(dòng)物的活性。隨著研究地不斷深入，近年來研究者們驚奇地發(fā)現(xiàn)其還具有很強(qiáng)的免疫抑制活性和抗癌抗腫瘤活性，這引起了研究人員們極大地興趣和關(guān)注。大多數(shù)抗癌藥物由于靶向問題，對腫瘤細(xì)胞和人體正常細(xì)胞都具有殺傷作用。在治療腫瘤的同時(shí)對人的肝腎帶來巨大損傷。不同于這些藥物的是，PG對57種不同的人癌細(xì)胞有抗性作用，而在相同的作用劑量下對正常細(xì)胞無任何毒害作用【4]。鑒于此，PG的研究具有了獨(dú)特的優(yōu)勢并有著誘人的市場前景，正逐漸成

20、為醫(yī)學(xué)界抗腫瘤領(lǐng)域的新寵。</p><p>　　PG最初是作為一種抗菌的物質(zhì)來研究的，它具有抗細(xì)菌、抗瘧疾，抗真菌和抗原生動(dòng)物的活性。PG的體外抑菌試驗(yàn)表明，其對金葡球菌(耐青、紅霉素菌株)和福氏志賀氏菌有很好的抑制效果[3I。Cang 等[4]以沙雷菌發(fā)酵生產(chǎn)的PG 做抗菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，對芽孢桿菌具有顯著地殺滅作用。PG 結(jié)構(gòu)類似物具有顯著的抗Trichophytonspp.等真菌的活性，在臨床測試中表現(xiàn)出對

21、Coccidmycosis引起的一種地方性真菌傳染病有良好的治愈作用。</p><p>　　靈菌紅素作為一種由微生物產(chǎn)生的天然色素，兼具有多種優(yōu)越的生物活性作用，目前已受到人們的關(guān)注。但主要研究還是集中在抗腫瘤和其生產(chǎn)制備工藝改進(jìn)方面。隨著人們生活水平的不斷提高和科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步發(fā)展, 人們對自身的衛(wèi)生保健意識日益增強(qiáng), 制造具有抗菌功能的抗菌紡織品成為一種新熱潮，而靈菌紅素作為一種天然色素，又具有良好的抑菌性能，

22、因而在天然染料的研究，特別是具有抗菌能力的天然染料的研究方面具有特別意義。隨著畜牧業(yè)規(guī)模化、商業(yè)化的發(fā)展，開發(fā)高效、無殘留、無公害的安全飼料添加劑越來越受到人們的重視，靈菌紅素作為一種微生物產(chǎn)的無公害天然抗生素，有利于大規(guī)模生產(chǎn)，抗病原（微生物或寄生蟲）活性強(qiáng)，且有抗癌、抗突變等作用，與傳統(tǒng)的抗生素比較具有一定的優(yōu)勢，因此，其作為抗生素應(yīng)用于飼料添加劑方面具有很大的研究價(jià)值。雖然靈菌紅素在作為飼料添加劑等方面的研究還很少，還有待于深入研

23、究，但其研究價(jià)值已經(jīng)引起了關(guān)注。本課題將定性定量的考察靈菌紅素對常見的細(xì)菌的抑菌性能，并進(jìn)一步考察其在不同條件下的抑菌性能的穩(wěn)定性，對獲得的靈菌紅素的抗菌性能進(jìn)行進(jìn)一步研究，以期為靈菌紅素在紡織業(yè)、化妝品、飼料產(chǎn)業(yè)上的推廣應(yīng)用提供理論基</p><p>　　2 相關(guān)研究的最新成果及動(dòng)態(tài)和應(yīng)用前景</p><p>　　2.1 PG 的生物活性</p><p><

24、b>　?。?）抗腫瘤作用</b></p><p>　　Montaner 等[5]的研究表明，PG 能誘導(dǎo)人結(jié)腸腺癌細(xì)胞株DLD-1 和SW-620 及人胃癌細(xì)胞株HGT-1 凋亡，對轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞株SW-620 更為有效，其誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性，主要表現(xiàn)為細(xì)胞收縮、染色質(zhì)縮合、肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)構(gòu)重組等。</p><p>　?。?）免疫抑制劑活性</p>

25、<p>　　選擇性免疫抑制包括在自體免疫性疾病治療和臨床器官移植中能抑制信號傳遞，預(yù)防T 細(xì)胞激活。臨床上將PG 與CyA 結(jié)合用于解除器官移植急性排斥反應(yīng)，作用效果好[6]，對其潛伏期和臨床應(yīng)用有待進(jìn)一步的研究。</p><p><b>　?。?） 抗菌作用</b></p><p>　　PG 具有抗細(xì)菌（antibacterial）、抗真菌（antif

26、ungal）的生物活性。PG 結(jié)構(gòu)類似物具有顯著的抗Trichophytonspp.等真菌的活性[7]，在臨床測試中表現(xiàn)出對Coccidmycosis引起的一種地方性真菌傳染病有良好的治愈作用[8]。</p><p><b>　　（4） 抗瘧疾活性</b></p><p>　　PG 對引起查格斯疾病的錐蟲（一種寄生蟲）有很大的殺傷作用，其殺錐蟲活性（IC50=5 μm

27、ol）是經(jīng)典殺錐蟲藥Nifurtimox 活性（IC50=150 μmol）的30倍。PG可作為生物農(nóng)藥用于防治Botrytis cinerea等引起的櫻草屬植物病害.</p><p>　?。?）抗腫瘤活性及其可能的作用機(jī)理</p><p>　　PG具有有效的抗腫瘤活性，美國國立癌癥研究所(NSI)Melvin等發(fā)現(xiàn)PG在平均ICso為2．Ivmol·L-1時(shí)對包括白血病、肺癌、

28、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、黑素瘤、乳腺癌、前列腺癌、腎癌、卵巢癌在內(nèi)的八種癌細(xì)胞株中的57種不同的人癌細(xì)胞均有抗性作用。研究者們認(rèn)為PG的這種抗癌特性與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性密切相關(guān)，目前就其機(jī)理提出了四種可能：作為pH調(diào)節(jié)器；作為細(xì)胞分裂周期抑制劑；作為DNA裂解因子；作為胞外信號調(diào)節(jié)激酶調(diào)節(jié)器[9I。</p><p>　　（6）抑制癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移活性</p><p>　　癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是造成癌癥患者死

29、亡的主要原因。PG可促進(jìn)細(xì)胞濃集，同時(shí)抑制細(xì)胞附著于胞外基質(zhì)(ECM)并抑制癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移[10l。</p><p>　　2.2 PG的生產(chǎn)現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢以及應(yīng)用前景</p><p>　　當(dāng)前PG的生產(chǎn)以生物合成為主。PG是微生物的次級代謝產(chǎn)物，可由多種細(xì)菌和放線菌產(chǎn)生，包括鏈霉菌屬(Streptomyces)、沙雷氏菌屬(Serratia)和假單胞菌屬(Pseudo—mona5)，其中

30、關(guān)于沙雷氏菌屬(Serratia)的研究最多。在對其代謝途徑的研究發(fā)現(xiàn)，PG是通過一條二叉的途徑合成的【11】。該途徑的關(guān)鍵步驟是最后一步酶促縮合反應(yīng)，即2-甲基-3-戊基吡咯(MAP)和4-甲氧基-2，7-二吡咯-5-羧甲基乙醛(MBC)在酶的作用下縮合生成PG(Prodigiosin)【12】，而催化此反應(yīng)的關(guān)鍵酶是PG縮合酶(Prodigiosin condensing enzyme，PCE)E33l【13】。 <

31、;/p><p>　　隨著PG應(yīng)用的逐漸推廣和其市場需求的不斷增大，其合成研究也在不斷發(fā)展。盡管全合成生產(chǎn)PG產(chǎn)量高且價(jià)格低廉，但相較于全合成，生物合成更具優(yōu)勢【14】。通過生物合成生產(chǎn)PG安全可靠，符合人們對綠色天然的追求。然而，生物合成也有產(chǎn)量較低、分離困難等自身的缺點(diǎn)。因此，如何改造菌株，優(yōu)化發(fā)酵工藝，尋求一條經(jīng)濟(jì)可行的生物合成PG的途徑，將成為今后PG研究的熱點(diǎn)。</p><p>　　綜

32、上所述，不難看出靈菌紅素在抗腫瘤，抗菌方面具有良好的效果，已經(jīng)引起很多關(guān)注和研究[15]。其獨(dú)特的抗菌性能和天然色素的生理屬性，可作為新型的飼料添加劑應(yīng)用于畜牧業(yè)[16]，作為天然染料及抑菌劑應(yīng)用于抗菌紡織品的制造[17]。但由于紅色素的生理活性及一些生理特性還沒有被人們徹底了解，對其抗菌、抗瘧疾和抗原生動(dòng)物等的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。紅色素的研究方向多集中于醫(yī)療方面，其多種應(yīng)用還有待深入研究拓展。還需要更加深入了解靈菌紅素的產(chǎn)生和作用

33、機(jī)制，解決未來需要的大量生產(chǎn)制備以及應(yīng)用等方面的具體問題。相信不久以后靈菌紅素必定可以造福人類。本課題主要對其在細(xì)菌真菌的抑菌穩(wěn)定性方面進(jìn)行了初步的研究，從而為在這方面的研究提供一定的依據(jù)。</p><p><b>　　2 方法與材料</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p><

34、b>　　2.1.1 菌種</b></p><p>　　沙雷氏菌( Serratia jx.1)，本實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　大腸埃希菌（Escherichia coli），本實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　金黃色葡萄球菌（staphylococcus aureus），本實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　枯草芽孢桿

35、菌（Bacillus subtilis），本實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa），本實(shí)驗(yàn)室保藏。</p><p>　　2.1.2 主要儀器與試劑</p><p>　　QYC-211型全溫空氣搖床（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；</p><p>　　H2050R型臺式高速冷凍離心機(jī)（長沙

36、湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；</p><p>　　VS-1300型潔凈工作臺（蘇州時(shí)速為凈化設(shè)備有限公司）；</p><p>　　PHS-3C型精密pH計(jì)（上海安亨昌吉149號雷磁儀器廠）；</p><p>　　AL-204型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；</p><p>　　DGX-914381型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥器（上海?，攲?shí)驗(yàn)

37、設(shè)備有限公司）；</p><p>　　LRH-250A型生化培養(yǎng)箱(廣東省醫(yī)療器械廠）。</p><p><b>　　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀</b></p><p>　　DK-S24型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）</p><p>　　752s紫外可見分光光度計(jì)</p><p><b>

38、　　移液槍</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)所用丙酮、氯化鈉等均為分析純；PN5247蛋白胨、牛肉浸膏等均為生化試劑。</p><p>　　2.1.3 培養(yǎng)基</p><p>　　種子培養(yǎng)基(g/L)：牛肉膏3.0，蛋白胨10.0，NaCl 5.0，瓊脂15，pH 7.4-7.6。</p><p>　　種子擴(kuò)大培養(yǎng)基（g/L）

39、：蛋白胨 13.0，甘油 20.0，Nacl 5.0，搖瓶裝液量20mL/250mL（V/V），pH自然，28℃，170r/min，培養(yǎng)24h。</p><p>　　發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)：蛋白胨16.0，甘油20.0，MgSO4 1.2，NaCl 2.0，Gly 0.75，pH 5.7，搖瓶裝液量50 mL/250mL(V/V)，接種量5％(V/V)，28℃，170r/min，培養(yǎng)48h。</p>

40、<p>　　固體培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl 5g，瓊脂 15~20g，水1000mL，pH 7.0~7.2。</p><p>　　液體培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl 5g，水1000mL，pH 7.0~7.2。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p&

41、gt;<p>　　2.2.1 靈菌紅素的制備</p><p>　　2.2.2 平板抑菌圈法定性測定靈菌紅素對常見微生物的抗菌性能</p><p>　　待測菌種活化，制成了一定濃度的菌懸液。菌液含量采用分光光度計(jì)法及稀釋法測定。取0.1ml菌懸液涂布平板，再于平板中央加入經(jīng)靈菌紅素浸泡的濾紙片，37℃±1℃倒置培養(yǎng)24h，記錄抑菌圈大小，初步判斷抑菌效果。<

42、/p><p>　　2.2.3 液體倍數(shù)稀釋法測定靈菌紅素對各菌的MIC </p><p>　　用液體倍數(shù)稀釋法測定最小抑菌濃度（Mininum Inhibitory Concentration MIC），即液體培養(yǎng)基按每管3ml分裝試管，再加入不同量的靈菌紅素溶液，配成一系列濃度梯度的培養(yǎng)基。每支試管培養(yǎng)基接種0.15ml的待測菌液，于37℃恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，另取加入與靈菌紅素等量的

43、二甲亞砜試管作為對照。以肉眼觀察培養(yǎng)基澄清，無細(xì)菌生長時(shí)的最低濃度為MIC。</p><p>　　2.2.4 靈菌紅素抑菌的穩(wěn)定性研究</p><p>　?。?）不同PH值對靈菌紅素抑菌性的影響</p><p>　　在6根試管中加入3ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，用0.1%的檸檬酸和2%的NaOH溶液調(diào)節(jié)PH為4、5、6、7、8、9，再按待試菌種的MIC濃度加入靈菌

44、紅素溶液，接種待測菌懸液0.15ml，將上述試管放入搖床，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)菌的生長情況，確定靈菌紅素在不同的PH條件下的抑菌穩(wěn)定性。</p><p>　?。?）不同溫度對靈菌紅素抑菌穩(wěn)定性的影響</p><p>　　將靈菌紅素溶液置于20度、40度、60度、80度、100度條件下水浴加熱30min，再分別加入3ml牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，接種待測菌懸液0.15ml，將上述試管放

45、入搖床，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察細(xì)菌的生長情況，確定靈菌紅素在不同的溫度條件下的抑菌穩(wěn)定性。</p><p>　?。?）不同作用時(shí)間下靈菌紅素抑菌性測定</p><p>　　將1ml的靈菌紅素溶液和0.1ml的菌懸液混合，分別處理1、3、6、12h后，將其倒入無菌平板涂布，以無菌水作為對照，37度倒置培養(yǎng)24h，觀察菌落生長情況，計(jì)算其抑菌率。</p><p>&l

46、t;b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 靈菌紅素對不同微生物抑菌性能的研究</p><p>　　通過平板抑菌圈法定性測定靈菌紅素的抑菌性，結(jié)果如圖表所示。靈菌紅素對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌都有一定的抑制作用。而在這幾種待試菌株中，靈菌紅素對枯草芽孢桿菌的抑制能力最強(qiáng)，這與Cang【17】等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，金黃色葡萄球

47、菌和銅綠假單胞菌次之，而對大腸桿菌的抑制能力最弱。且對銅綠假單胞菌的抑菌圈出現(xiàn)內(nèi)外兩層，內(nèi)層抑菌圈較小，無菌生長，外層抑菌圈較大，但是有一些稀疏的菌落分布，這可能與靈菌紅素在培養(yǎng)基中的擴(kuò)散有關(guān)。</p><p>　　表1 靈菌紅素對不同微生物抑菌性能的研究</p><p>　　大腸桿菌 枯草芽孢桿菌</p><

48、p>　　金黃色葡萄球菌 銅綠假單胞菌</p><p>　　圖1 靈菌紅素對不同菌的抑菌圈實(shí)驗(yàn)</p><p>　　3.2最小抑菌濃度MIC：</p><p>　　通過測定最小抑菌濃度（MIC）來進(jìn)一步量化靈菌紅素的抑菌性能，結(jié)果如表所示。</p><p>　　結(jié)果表明，靈菌紅素對于金黃

49、色葡萄球菌的MIC為0.002g/L，對于銅綠假單胞菌的g/L 為0.005 g/L，對于枯草芽孢桿菌的MIC為0.0125 g/L，而對于大腸桿菌的MIC為0.05 g/L。因此，靈菌紅素對常見細(xì)菌的抑菌能力表現(xiàn)為：金黃色葡萄球菌>銅綠假單胞菌>枯草芽孢桿菌>大腸桿菌。這與平板抑菌結(jié)果基本相符，但是在對枯草芽孢桿菌的抑菌能力方面有所出入，可能是由于枯草芽孢桿菌屬于專性好氧菌，在試管培養(yǎng)時(shí)集中分布于試管液面部分，因此靈

50、菌紅素作用效果沒有平板培養(yǎng)時(shí)均勻，從而使得其平板抑菌圈最大，而MIC濃度卻要大于金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌。</p><p>　　表2 靈菌紅素對于待測細(xì)菌的MIC實(shí)驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　注：+++表示待測菌生長良好，++表示待測菌生長一般，+表示有待測菌生長，-表示無待測菌生長</p><p>　　3.3 靈菌紅素抑菌的穩(wěn)定性研究</p>

51、<p>　　3.3.1 不同PH值對靈菌紅素抑菌性的影響：</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PH為9和4、5時(shí)，靈菌紅素添加組和未添加組都沒有菌體生長，可能是因?yàn)榇藭r(shí)的PH值在菌體的最適生長PH值范圍外。在PH為6和7時(shí)，靈菌紅素添加組沒有菌生長，而未加靈菌紅素組則長勢良好，說明靈菌紅素在PH6和7時(shí)具有良好的抑菌性。PH為8時(shí)，靈菌紅素添加組和未添加組菌體生長都較好，可能是靈菌紅素在偏堿性的情況下被分

52、解，失去抗菌活性，這與前期靈菌紅素在偏酸環(huán)境穩(wěn)定，在偏堿環(huán)境分解的穩(wěn)定性研究結(jié)果相符?？傊?，本研究說明，靈菌紅素在PH為5-7時(shí)具有良好的抑菌穩(wěn)定性。 </p><p>　　表3 不同PH值對靈菌紅素抑菌性的影響</p><p>　　靈菌紅素組 對照組（不加靈菌紅素）</p><p>　　圖2 PH對靈菌紅素

53、的抑菌穩(wěn)定性影響</p><p>　　圖2顯示靈菌紅素組的PH4，5，6，7，9無菌體，8號和對照組有菌體；</p><p>　　對照組（不加靈菌紅素）中的PH4，5，9無菌體，PH6，7，8和對照組有菌體。</p><p>　　不同溫度對靈菌紅素抑菌穩(wěn)定性的影響：</p><p>　　表4圖3和表明加入了經(jīng)過不同水浴溫度處理過的靈菌紅素的金

54、黃色葡萄球菌均未長菌，不加靈菌紅素的對照組長菌，說明了20-100度范圍內(nèi)靈菌紅素的抑菌能力比較穩(wěn)定。與前期靈菌紅素具有良好的熱穩(wěn)定性的研究結(jié)果相符。</p><p>　　表4 不同溫度對靈菌紅素抑菌穩(wěn)定性的影響</p><p>　　圖3 溫度對靈菌紅素抑菌穩(wěn)定性影響</p><p>　　不同接觸時(shí)間下靈菌紅素抑菌性測定：</p><p>　

55、　將1ml的靈菌紅素溶液和0.1ml的菌懸液混合，分別處理1、3、6、12h后，將其倒入無菌平板涂布，以無菌水作為對照，37度倒置培養(yǎng)24h，觀察菌落生長情況，考察其在不同接觸時(shí)間下靈菌紅素的抑菌性，結(jié)果如圖4、圖5和表5所示。結(jié)果表明，隨著靈菌紅素與菌液的接觸時(shí)間延長，靈菌紅素的抑菌性能也隨之增強(qiáng)。</p><p>　　1h 3h</p&

56、gt;<p>　　6h 12h</p><p>　　圖4 靈菌紅素和菌接觸時(shí)間對靈菌紅素抑菌性影響</p><p>　　表5 不同接觸時(shí)間下靈菌紅素的抑菌率</p><p>　　圖5 不同接觸時(shí)間下靈菌紅素的抑菌率 </p><p><b>　　4．

57、結(jié)論</b></p><p>　　本實(shí)驗(yàn)對靈菌紅素的抑菌性能及抑菌穩(wěn)定性進(jìn)行初步研究，結(jié)論如下：</p><p>　　4.1 本研究表明，靈菌紅素對常見的細(xì)菌具有一定的抑菌效果，其中對于金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌效果良好，對大腸桿菌效果一般。</p><p>　　4.2 本研究表明，靈菌紅素對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、大

58、腸桿菌的MIC分別為0.002 g/L、0.005g/L、0.0125 g/L和0.05g/L，與平板抑菌實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果基本吻合。</p><p>　　4.3 考察靈菌紅素對于金黃色葡萄球菌的抑菌穩(wěn)定性發(fā)現(xiàn)，靈菌紅素在PH為6-7左右，具有良好的抑菌性能；在溫度為20-100℃范圍內(nèi)抑菌性穩(wěn)定；且靈菌紅素抑菌時(shí)與待測菌種接觸時(shí)間越長，抑菌效果越好。</p><p><b>　　參

59、考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] Han S B, Lee C W, Yoon Y D, et al. Effective prevention of lethalacute graft-versus-host disease by combined immunosuppressivetherapy with prodigiosin and cyclosporine[J]. BiochemP

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