農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)ipt基因創(chuàng)造半夏新種質(zhì).pdf

1、半夏（Pinellia ternate(Thunb.)Breit）為天南星科半夏屬植物，是一種常用的傳統(tǒng)中藥材。但有關(guān)半夏遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究極少，本研究以貴州珍珠半夏為材料，探索半夏遺傳轉(zhuǎn)化的技術(shù)參數(shù)，建立和優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化半夏的體系，為利用基因工程技術(shù)對半夏進(jìn)行遺傳改良打下基礎(chǔ)；并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，利用優(yōu)化的轉(zhuǎn)化體系，將細(xì)胞分裂素生物合成限速酶異戊烯基轉(zhuǎn)移酶基因（isopentenyl transferase，ipt）導(dǎo)入半

2、夏體內(nèi)，初步檢驗ipt基因已經(jīng)整合到半夏基因組。取得主要以下研究結(jié)果：
　　1.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的半夏遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
　　以半夏葉柄為轉(zhuǎn)化受體材料，利用根癌農(nóng)桿菌侵染系統(tǒng)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。詳細(xì)探討了外植體預(yù)培養(yǎng)時間、浸染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）濃度等影響因素對半夏遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明，適合半夏葉柄的遺傳轉(zhuǎn)化體系是：以不經(jīng)過預(yù)培養(yǎng)的半夏葉柄作為外植體，置于含60mg.L-1-100m

3、g.L-1AS的OD600為0.4-0.8農(nóng)桿菌菌液侵染20min，期間用頻率是50Hz的超聲波處理5min，25℃條件下在含有60mg.L-1-100mg.L-1AS的MS+0.5mg.L-16-BA+0.2mg.L-1IBA分化培養(yǎng)基上共培養(yǎng)3d后，再接種至含有100mg.L-1卡那霉素（Kanamysin，Kan）和300mg.L-1頭孢霉素（Cefotaxine，Cef）的篩選培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
　　2.抗性植株的檢測