農(nóng)桿菌介導(dǎo)獲得可去除選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)CpTI抗蟲(chóng)基因玉米植株.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)將經(jīng)過(guò)修飾的CpTI抗蟲(chóng)基因和hyg選擇標(biāo)記基因分別置于MAR序列之間,使用根癌農(nóng)桿菌超級(jí)雙元載體轉(zhuǎn)化生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用的優(yōu)良玉米自交系18-599的胚性愈傷組織.共培養(yǎng)3天后,在含HygB的培養(yǎng)基上連續(xù)篩選3代,然后分化得到再生植株.PCR擴(kuò)增、PCR-Dot blotting和PCR-Southern blotting檢測(cè)初步證明目的基因已經(jīng)整合到再生玉米植株中.此外,該實(shí)驗(yàn)還探討了共培養(yǎng)溫度、共培養(yǎng)培養(yǎng)基的pH及其它因素對(duì)轉(zhuǎn)化效

2、率的影響.實(shí)驗(yàn)結(jié)論如下:1.由于受多個(gè)因素的影響,液體培養(yǎng)時(shí)根癌農(nóng)桿菌達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的時(shí)間不是固定值,對(duì)侵染液經(jīng)常觀察并檢測(cè)是一種穩(wěn)定可靠的方法.2.較低的溫度和較低的pH能提高玉米愈傷組織的轉(zhuǎn)化率在該實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有得到體現(xiàn),至少對(duì)該實(shí)驗(yàn)使用的玉米基因型來(lái)說(shuō)是不正確的.3.從得到的抗性愈傷組織塊數(shù)來(lái)看,根癌農(nóng)桿菌對(duì)玉米幼胚胚性愈傷組織的轉(zhuǎn)化率偏低.4.PCR擴(kuò)增、PCR-Dot blotting和PCR-Southern檢測(cè)初步證明CpTI