根癌農桿菌介導愈傷組織遺傳轉化獲得含PTA29-Barnase基因的柑橘植株.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文根癌農桿菌介導愈傷組織遺傳轉化獲得含PTA29Barnase基因的柑橘植株姓名：李東棟申請學位級別：博士專業(yè)：果樹學指導教師：鄧秀新2002.11.1柑粕我十T兩介并愈傷縮螺落傳轉純款褥雒鞭小靜輯橘稽株投癌農轷鎣分嘗愈傷組織遺傳轉化獲得含pTA29Barnase基阪的柑爝檀株摘簧‘剃嚆造世界上最踅要的果樹種類之一。在目前豐廿橘生產中，凍害、熱害以及嚴重的病蟲害蕁在很大程度上阻礙了柑橘種植業(yè)的發(fā)展。消費者對于果品質

2、量(如無核、大果、商含糖量等)要求的不斷提高和土地面積的減，j、，以及中國加入世界貿翁組織后中醋柑橘種植業(yè)所面臨的問題都給柑橘育種工作提池了新的研究課題。而簧解決這些問題的根本出路葩：f培育出新的高產、優(yōu)質、抗瘸、抗逆的稽橘接穗和砧木品種。但是，由于稽稀類植物中存在的珠心聰現(xiàn)象、～些品種中的雌雄性敗育、霆期過長、邋緣有性雜交不親和等待點便通過傳統(tǒng)的有性雜交方式進行品種改良迸稚緩侵，效率不高。遺傳轉純技術可以侮澤個有價值的基因轉入琥有的t

3、|邑庭黼種當中，同時不改變琥有晶稀本身所特有的性狀特征。函詫，可以透過應淆遺傳轉乞掛術實覡抗旱、抗寒、抗鹽堿、抗病等鏊西&々轉化，胰焉雹I造新篷釋震，并提承一種新的培育按穗稅醅本品種鵑途徑。17率研究首先建立了根癌農桿菌介導柑橘愈傷組織遺傳轉化體系，相對于前人常用以上胚軸為外豐贏體的農桿菌轉化體系和以原生質體為外植體的電激轉化體系，本研究所建立的轉化體系具有遺傳背景清晰～致、數(shù)量夫、操作簡便的優(yōu)點。并對其中轉化效率的系列因于避行研究。同

4、時，以柑橘的無核育種為目標，在建立的轉化體系的簸礎上，將人‘工雄性不育基因pTA29barnase轉入三個多籽品種(伏令夏橙、碰柑、晴柳橙)，中，以鞠锏造新的稽橘雄往不育類墅，并為今后裕橘的無核育年卒提供新的思路和毒李辯。注要的結鬈如下：1建立了根瘸農桿菌介導柑橘愈傷組織遺傳轉化體系。以伏令夏橙的胚性愈傷組織為外植體以pCAMBIAl303為質粒載體，對轉化當中影響柑橘轉化效率的預培養(yǎng)方式和時問、共培養(yǎng)瀨度、AS的肖無進行篩選。紿果表明

5、：懸浮培養(yǎng)4d較其它的幾種培養(yǎng)方式獲得更多的抗性愈傷，整異盟著；侵染后共培養(yǎng)中以19“C共培養(yǎng)三天的效果最好(AN=5312)，相比23℃(AN=218)和28℃(AN=275)的共培養(yǎng)溫度，最終的轉化效率顯蔫提高；Asx于于稽橘愈傷組織的轉化起決定性作用，在沒有As存在的情況下幾乎無法贛衙抗往愈傷組織。2列其有不同染色體背景的三種常用的農桿菌菌株(EHAl05、LBA4404、C58)在柑橘轉化中的效率差異進行比較實驗。結果表明：EH