根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Barnase和iaaM基因轉(zhuǎn)化柑橘的研究.pdf

1、柑橘是世界上最重要的水果之一。近30年來，世界鮮食柑橘品種的改良主要圍繞品質(zhì)和成熟期等育種目標(biāo)進(jìn)行，而果實(shí)無核、易剝皮、風(fēng)味濃和有香味又是決定品質(zhì)優(yōu)良的標(biāo)準(zhǔn)。運(yùn)用傳統(tǒng)的育種手段進(jìn)行柑橘果實(shí)品質(zhì)的改良，具有周期長、受珠心胚干擾、自交不親和及基因間的緊密連鎖等因素的影響，因而進(jìn)程緩慢。植物基因工程的出現(xiàn)，成為實(shí)現(xiàn)目標(biāo)性狀改良的一種快速、有效的途徑。通過基因工程誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)或特異表達(dá)種子切除的細(xì)胞毒素基因（Barnase）策略成為柑橘無核分子

2、育種的主要手段。本實(shí)驗(yàn)利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系，將目的基因TA29：Barnase及AGL5：iααM轉(zhuǎn)入特色多核柑橘品種，以期獲得高品質(zhì)的無核柑橘新種質(zhì)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1．對(duì)卡那霉素及頭孢霉素進(jìn)行不同濃度梯度的敏感性試驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)卡那霉素篩選濃度為50 mg/L，頭孢霉素的濃度為400 mg/L時(shí)，有利于抗性植株的篩選再生，并可有效地抑制“逃逸體”的產(chǎn)生。
　　 2．優(yōu)化選擇早實(shí)枳實(shí)生苗莖段和椪柑上

3、胚軸切段不定芽的再生體系。結(jié)果表明早實(shí)枳實(shí)生苗莖段和椪柑上胚軸切段不定芽再生的最佳培養(yǎng)基分別為：MT+BA0.5 mg/L+KT0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L和MT+BA0.5 mg/L+NAA0.1mg/L、MT+BA0.5 mg/L+IAA0.2mg/L。
　　 3．利用早實(shí)枳實(shí)生苗莖段和椏柑上胚軸切段進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明早實(shí)枳不定芽再生率明顯高于椪柑。同時(shí)利用椪柑不同的外植體材料，如：子葉、上胚軸切段、根軸連接