家蠶Flap Endonuclease-1基因的克隆及功能研究.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶FlapEndonuclease1基因的克隆及功能研究姓名：杜娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：潘敏慧魯成20090501兩南大學(xué)碩h學(xué)佗論文蠶BmESWUl細(xì)胞后，細(xì)胞增殖活性隨著照射劑量的增加而逐漸降低；光鏡下可見細(xì)胞膜表面突出或形成小泡，細(xì)胞破裂成凋亡小體。UVB處理24h后，細(xì)胞幾乎全部破裂成凋亡小體。經(jīng)Hoechst染色后，凋亡小體在熒光顯微鏡下清晰可見，細(xì)胞DNA電泳條帶呈梯形分布，這是凋

2、亡細(xì)胞典型的生化特征。3BmFENJ基因功能的初步研究利用RANi技術(shù)，通過轉(zhuǎn)染試劑介導(dǎo)dsRNA(BmFEN1)，轉(zhuǎn)染家蠶胚胎細(xì)胞(BmESWUl)，轉(zhuǎn)染后正常培養(yǎng)48h，用以下三種方法進(jìn)行檢查。MTr檢查顯示干涉組的胚胎細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，存活率為對照組的80％。PI染色后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞周期，干涉組S期細(xì)胞數(shù)占504％，G2／M期細(xì)胞數(shù)為2548％，而對照組S期、G加訂期細(xì)胞數(shù)分別為2373％和1309％，表明dsRNA

3、轉(zhuǎn)染能下調(diào)BmFEN1基因表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯于S期。T17NEL染色后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢查凋亡情況，結(jié)果顯示：干涉組凋亡率為3503％，遠(yuǎn)高于對照組099％的凋亡率。經(jīng)熒光定量PCR檢測BmFEN1基因的表達(dá)，擴(kuò)增結(jié)果表明，轉(zhuǎn)染組的基因表達(dá)量明顯降低，僅為對照組的5％。綜上所述，dsRNA(BmFEN1)轉(zhuǎn)染組的胚胎細(xì)胞中BmFEN1的表達(dá)量明顯降低，將會抑制家蠶胚胎細(xì)胞系的增殖，導(dǎo)致細(xì)胞阻滯于S期，并出現(xiàn)明顯的凋亡。關(guān)鍵詞：家蠶細(xì)胞