胚內(nèi)注射雌馬酚對肉雞出雛后生長與肉質(zhì)的影響及機(jī)理研究.pdf

1、本試驗(yàn)采用胚內(nèi)注射的方式，研究雌馬酚（Equol）處理雞胚發(fā)育早期，對其出雛后生長與肉質(zhì)的影響，并從抗氧化角度探討其可能的作用機(jī)理；此外，采用原代細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)一步研究雌馬酚對雞肌細(xì)胞的保護(hù)作用，從而揭示其改善肌肉品質(zhì)的機(jī)理。
　　 1胚內(nèi)注射雌馬酚對肉雞出雛后生長與肉質(zhì)的影響及機(jī)制探索
　　 選取三黃矮腳D種蛋孵化，孵化至第7胚齡時將胚隨機(jī)分為3組，分別向蛋清內(nèi)注射100μL白油乙醇混合溶劑（對照組，C）、0.2 m/m

2、L（低劑量組，L）和1.0 mg/mL（高劑量組，H）雌馬酚白油乙醇溶液。出雛后，記錄肉雞出雛重及每周齡體重，49日齡時宰殺并采集樣品。結(jié)果表明，胚內(nèi)注射低劑量雌馬酚顯著降低肉雞的出雛重（p<0.05），但高、低劑量雌馬酚處理對肉雞1至7周齡體重均無顯著影響（p>0.05）。低劑量雌馬酚顯著提高49日齡公雞的腓腸肌重（p<0.05）；胚內(nèi)注射雌馬酚可顯著增加公雞的腹脂重（p<0.01），低劑量雌馬酚處理顯著增加母雞的腹脂重（p<0.05

3、），但對腹脂重與體重的比率均無顯著影響（p>0.05）.此外，胚內(nèi)注射雌馬酚對子代雞肝臟、總體脂、腿肌、胸肌、肝臟體重比，腓腸肌體重比以及腹脂寬度、胸肌面積等指標(biāo)均無顯著影響（p>0.05）.
　　 生化分析結(jié)果表明，高劑量雌馬酚可顯著降低母雞血清中甘油三酯的含量（p<0.01），但對公雞無顯著影響。高、低劑量雌馬酚均可顯著升高母雞血清中總膽固醇水平（p<0.05），血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量顯著升高，增加血清中低密度脂蛋白

4、膽固醇含量但未達(dá)到顯著性水平（p>0.05）；高、低劑量雌馬酚處理均可顯著提高公雞血清中低密度脂蛋白膽固醇的含量（p<0.05），并增加血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量（P=0.086）。以上結(jié)果提示：胚內(nèi)注射雌馬酚改善雞體內(nèi)甘油三酯的代謝，但對膽固醇代謝具有一定的負(fù)面影響。
　　 肉質(zhì)測定結(jié)果表明，高、低劑量雌馬酚可顯著降低49日齡母雞肌肉紅度值（p<0.01）；高劑量雌馬酚可顯著降低母雞肌肉的黃度值（p<0.05）。然而，高、

5、低劑量雌馬酚對屠宰后肌肉pH45min值及剪切力均無顯著影響（p>0.05）。對系水力的測定結(jié)果顯示，高、低劑量雌馬酚處理均可顯著降低母雞胸肌的蒸煮損失率（p<0.01），高劑量雌馬酚能顯著降低公雞胸肌的蒸煮損失率（p<0.05）；高劑量雌馬酚可顯著降低母雞胸肌的24 h和48 h的滴水損失率（p<0.05），但對公雞無顯著影響（p>0.05）。提示：雌馬酚可改善肌細(xì)胞膜的完整性，從而增強(qiáng)其保守性能。
　　 ATPase染色法測

6、定49日齡肉雞腓腸肌不同類型肌纖維的橫截面積及比例，結(jié)果顯示：高劑量雌馬酚可顯著降低49日齡公雞的肌纖維密度（p<0.05），低劑量雌馬酚則有降低肌纖維密度的趨勢（p=0.076<0.1）；高劑量雌馬酚可顯著降低49日齡母雞Ⅰ型肌纖維的面積（p<0.05），但對公雞Ⅰ型肌纖維的面積無顯著影響（p>0.05）。
　　 對雞血清和肌肉組織中抗氧化相關(guān)指標(biāo)測定結(jié)果表明，高、低劑量雌馬酚對母雞血清中SOD活力及MDA含量均無顯著影響（p

7、>0.05），但低劑量雌馬酚可顯著增加血清中GSH-Px的活力（p<0.01），而高、低劑量雌馬酚均可顯著提高母雞肌肉中SOD的活力（p<0.05），高劑量雌馬酚使肌肉中GSH-Px的活力升高（p=0.059<0.1），但對肌肉中MDA的含量無影響（p>0.05）。
　　 2雌馬酚對雙氧水誘導(dǎo)雞成肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)理研究
　　 由11胚齡三黃矮D雞胚腿肌分離獲得成肌細(xì)胞，用含有10％胎牛血清的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時

8、后，將培養(yǎng)基換成含有1％ITS的完全培養(yǎng)基，穩(wěn)定24小時后開始實(shí)驗(yàn)。采用1μM、10μM和100μM濃度的雌馬酚預(yù)處理1小時后，再用一定劑量的雙氧水損傷處理1小時，觀察雌馬酚對成肌細(xì)胞的保護(hù)作用并探索其作用機(jī)理。結(jié)果顯示：10μM雌馬酚單獨(dú)處理對細(xì)胞活力無顯著影響，1 mM雙氧水損傷處理可以顯著降低細(xì)胞的活力（p<0.05），1μM雌馬酚預(yù)處理對雙氧水誘導(dǎo)損傷成肌細(xì)胞活力的降低無顯著抑制作用（p>0.05），而10μM和100μM雌馬酚

9、進(jìn)一步降低雙氧水誘導(dǎo)損傷下的成肌細(xì)胞活力（p<0.05）。
　　 生化分析測定結(jié)果表明，與對照組相比，10μM Eq單獨(dú)處理對細(xì)胞上清液中MDA含量無顯著影響（p>0.05），1 mM H2O2處理1小時后可顯著增加MDA的含量（p<0.05）；而與H2O2處理組相比，1μM和100μM Eq預(yù)處理可以顯著降低上清中MDA的含量（p<0.05）；10μM Eq預(yù)處理組上清液中MDA的含量降低但無顯著性意義（p>0.05）。1 m

10、M H2O2處理后成肌細(xì)胞上清中LDH的活力顯著升高（p<0.05），1μM Eq預(yù)處理可降低H2O2升高LDH的活力作用，而10μM和100μM Eq預(yù)處理可進(jìn)一步顯著升高H2O2誘導(dǎo)損傷下成肌細(xì)胞上清中LDH活力（P<0.05）。對抗氧化酶SOD的測定結(jié)果表明，10μM Eq單獨(dú)預(yù)處理對成肌細(xì)胞中SOD活力無顯著影響（P>0.05），1 mM H2O2有降低SOD活力的趨勢，而與H2O2組相比，1μM Eq預(yù)處理組細(xì)胞中SOD的活力

11、顯著增加（P<0.05），但10μM和100μM Eq預(yù)處理組細(xì)胞中SOD的活力有所提高，但未達(dá)到顯著性水平。10μM Eq單獨(dú)處理以及1 mM H2O2處理對成肌細(xì)胞中GSH-Px活力均無顯著性影響（P>0.05），而與H2O2處理組相比，1μM和10μM Eq預(yù)處理可以提高成肌細(xì)胞中GSH-Px的活力且10μM Eq預(yù)處理達(dá)到顯著水平（P<0.05），但100μM Eq對H2O2損傷導(dǎo)致的細(xì)胞GSH-Px活力的降低無顯著影響（P>0

12、.05）.
　　 單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)（彗星試驗(yàn)）測定DNA的損傷程度結(jié)果顯示，與對照組比較，10μM Eq單獨(dú)處理顯著降低彗星尾長（P<0.05），但對Olive尾矩、尾/頭比、頭％DNA和尾％DNA均無顯著性影響（P>0.05）；1 mM H2O2處理可顯著增加尾％DNA和顯著降低頭％DNA（P<0.05）；而與H2O2組相比，1、10和100μM Eq預(yù)處理均顯著降低細(xì)胞Olive尾矩和尾％DNA（P<0.05），顯著增加頭

13、％DNA（P<0.05），此外，10和100μM Eq預(yù)處理組彗星尾/頭比顯著降低，10μM Eq還可以顯著降低細(xì)胞的彗星尾長（P<0.05）。
　　 相對定量實(shí)時熒光PCR方法檢測不同處理組細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因Bcl-2和BaxmRNA的表達(dá)豐度。結(jié)果表明，10μM Eq單獨(dú)預(yù)處理不影響細(xì)胞中Bcl-2 mRNA的表達(dá)（P>0.05），H2O2處理下調(diào)細(xì)胞中Bcl-2的基因表達(dá)，但未顯示顯著性差異，而與H2O2處理組相比，Eq處