Gas8多抗制備及相互作用蛋白的篩選.pdf

1、目的：生長抑制特異性基因（growth arrest—specific gene）是指在培養(yǎng)過程中由于血清饑餓或細胞接觸性抑制時表達上調的基因，編碼多種具有不同功能的蛋白質。Gas8（growth arrest—specific8）是生長抑制特異性基因編碼的蛋白之一。本實驗的目的是制備Gas8抗體，檢測小鼠各組織中Gas8表達情況，并利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選Gas8相互作用蛋白。方法：在大腸桿菌E．coli BL21（DE3）中表達帶Hi

2、s標簽的Gas8融合蛋白。以純化后的重組蛋白為抗原，免疫新西蘭大耳白兔，制備Gas8多抗血清，并且進一步利用親和純化方法分離Gas8多克隆抗體。為檢測Gas8抗體特異性，利用抗Flag單克隆抗體，通過Western blot分析瞬時表達的Flag—Gas8融合蛋白作為參照。利用制備的抗體通過Western blot方法檢測Gas8在小鼠各組織中的表達譜。以Gas8為誘餌蛋白，采用酵母雙雜交方法篩選Gas8相互作用蛋白。結果：結果顯示獲得