雞生殖系干細(xì)胞培養(yǎng)與睪丸組織移植研究.pdf

1、雞的生殖系干細(xì)胞包括原始生殖細(xì)胞(Primordial Germ Cells，PGCs)、性原細(xì)胞(Gonocyte Cells)和精原干細(xì)胞(Spermatogonial Stem Cells，SSCs)，它們都具有增殖和自我更新的能力，能在體外進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)，是早期胚胎分化研究的體外模型。本研究分別以5.5日齡的雞胚生殖嵴，18日齡雞胚和出雛20-30日齡的公雞睪丸為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)PGCs、性原細(xì)胞、SSCs進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)，并采用PAS、

2、AKP和免疫組化染色進(jìn)行干細(xì)胞特征鑒定，在細(xì)胞形態(tài)、體外培養(yǎng)和生物學(xué)特征鑒定等方面比較PGCs、性原細(xì)胞和SSCs這三種干細(xì)胞的差異性。 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下： 1.在細(xì)胞形態(tài)上，PGCs個(gè)體要大于其它兩種細(xì)胞，PGCs的細(xì)胞集落呈鳥(niǎo)巢狀，細(xì)胞有偽足；性原細(xì)胞和SSCs細(xì)胞集落多呈葡萄串狀，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞偽足。 2.PGCs.性原細(xì)胞、SSCs原代培養(yǎng)24h后，PGCs的貼壁細(xì)胞數(shù)明顯少于性原細(xì)胞和SSCs(P<0.0

3、1)，但是三種細(xì)胞的增殖率差異不顯著(P>0.05)。 3.PGCs、性原細(xì)胞、SSCs傳代培養(yǎng)過(guò)程中，在貼壁細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞增殖率兩方面，都是PGCs最少，性原細(xì)胞其次，SSCs最多，三者之間差異極顯著(P<0.01)。 4.經(jīng)PAS染色法、AKP染色法和免疫化學(xué)染色鑒定，PGCs、性原細(xì)胞和SSCs均呈陽(yáng)性，但是在AKP染色中，PGCs和性原細(xì)胞呈弱陽(yáng)性，SSCs呈強(qiáng)陽(yáng)性。 睪丸組織移植是將同種或者異種供體的睪

4、丸從體內(nèi)取出后切成組織塊，異位移植到受體的皮下、腹腔等血管豐富的部位。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)禽類的睪丸進(jìn)行自體移植和異體移植的研究，對(duì)移植組織的生長(zhǎng)發(fā)育狀況作較為全面的檢測(cè)，比較了不同移植部位、組織回收時(shí)間和供體種類對(duì)移植組織生長(zhǎng)發(fā)育的影響。 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果如下： 1.禽類睪丸組織自體移植和異體移植都是可行的。 2.在移植部位上，腹腔和腹腔皮下移植組織生長(zhǎng)發(fā)育情況差異不顯著(P>0.05)，但是移植于腹腔皮下操作簡(jiǎn)單，而且受體

5、雞的感染情況較少，組織存活率要高。因而腹部皮下是睪丸組織移植較為理想的移植部位。 3.根據(jù)供受體和移植部位的不同，睪丸移植組織的回收時(shí)間也有一定的差異。自體移植中，腹腔中的移植組織的理想回收時(shí)間為移植后3周，腹部皮下的移植組織理想回收時(shí)間為移植后1個(gè)月。異體移植的理想回收時(shí)間應(yīng)為移植后120天。 4.在供體選擇上，40日齡的廣西土雞自體移植1個(gè)月后生長(zhǎng)發(fā)育狀況良好，并且有高度活率的精子產(chǎn)生，因而適合作為睪丸組織自體移植的