豬及鼠兔的A型流感流行病學(xué)和病毒學(xué)分析.pdf

1、流感病毒(influenza virus，IV)，引發(fā)流感等呼吸道疾病。目前，歐、美、亞、非等世界各大洲均有流感的發(fā)生，是一種世界范圍的呼吸道傳染病。尤其甲型H1N1和H5N1亞型流感目前已成為嚴重的公共衛(wèi)生問題，對人類健康構(gòu)成巨大威脅。目前對于流感病毒的研究集中在其自然條件下的生態(tài)分布，在動物群體中的循環(huán)，溯源問題和流行病學(xué)研究。本研究圍繞流感病毒在哺乳動物豬、鼠兔中的感染狀況進行，取得以下實驗結(jié)果：檢測了2000年至2008年從浙江

2、省各地228個非免疫豬場采集的全日齡豬血清共計11250份，進行了H1至H13共13個流感亞型的血清學(xué)調(diào)查。其中H1亞型抗體陽性率4.84％，場陽性率39.47％；H3亞型陽性率0.19％，場陽性率5.26％，其它亞型陽性率從0至0.09％不等。研究結(jié)果表明浙江省豬場存在的流感病毒主要流行亞型為H1和H3。其中部分血清對H5/H6/H7/H9亞型血凝抑制效價達到23，臨床判斷為陰性，但這說明豬群可能感染過這些亞型的流感病毒并在豬群中流行

3、過。從2000年至2008年H1亞型抗體變化趨勢看，流感的感染率呈現(xiàn)一定的規(guī)律性，出現(xiàn)了2006年和2001年兩個峰值，血清H1亞型抗體陽性率最高，結(jié)合中國在這兩年中的兩次全國范圍豬病疫情，推測出現(xiàn)了兩次豬流感H1亞型的流行。
　　 本研究從青海鳥島，尕日拉，深河口，黑馬河和泉灣采集82份鼠兔血清，進行了H1-H13共13種亞型的流感病毒抗體檢測。檢測到H1和H5兩種抗體，而且存在兩種抗體共存的現(xiàn)象，陽性率為8.54％。其中H1

4、單一陽性率23.17％，H5單一陽性率3.66％。說明鼠兔中至少存在此兩種亞型的流感病毒感染。
　　 2008年從浙江金華分離到一株H9N2亞型豬流感病毒，A/Swine/Jinhua/0801/2008(H9N2)，HA基因的裂解位點為PAVSSR/GL，無多個連續(xù)性的堿性氨基酸插入，屬低致病性流感病毒的基因特性，受體結(jié)合位點為183H，190E，226Q，227Q，228G。與韓國2004年從豬及雞中分離的毒株一致，具有禽源

5、流感的特征。NA基因與韓國2004年的豬流感分離株同源性較高，在頸部無缺失，與其所在分支G9-like特點一致。除NP基因外，其它基因均與韓國毒株遺傳距離很近，說明它們之間的親緣關(guān)系很近，可能來自相同的祖先。
　　 自2007年4月至今，我們已先后從青海鳥島、深河口、尕日拉、泉灣和黑馬河等地的野生鼠兔中分離到5株H5N1亞型禽流感病毒。通過反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)分別擴增了5株鼠兔分離毒的全部片段，分別克隆測序，并與GenBank

6、已發(fā)表的相應(yīng)基因序列進行比較分析，繪制進化樹。結(jié)果表明：A/pika/BI/07毒株與SHK、GRL、QW以及HMH毒株存在較大差異，后4個毒株之間親緣關(guān)系較近。HA序列分析顯示，呈現(xiàn)兩個進化方向，BI株屬于類青海支而GRL、QW、HMH和SHK毒株屬于混合/越南這一分支。推導(dǎo)的HA氨基酸序列分析，裂解位點均符合高致病性禽流感的分子特征(ERRRKKR/G)，第226位氨基酸是對禽類和哺乳動物細胞均具有親嗜性的蛋氨酸(Methionin

7、e，Met)。神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase，NA)在第48位氨基酸(頸部)后有20個氨基酸的缺失。BI株堿性聚合酶2的627位氨基酸是親哺乳動物類細胞的賴氨酸(Lysine，Lys，K)。
　　 研究了鼠兔分離毒對雞、兔和小鼠的致病力。通過靜脈接種，測定該病毒對雞的靜脈內(nèi)致病指數(shù)，為2.93-3，均為高致病力毒株。雞在感染Pika H5N1毒株后出現(xiàn)明顯的臨床癥狀，引起全身性感染，并導(dǎo)致感染雞100％死亡，在各臟器的病