免疫應(yīng)激斷奶仔豬胸腺相關(guān)miRNAs篩選及分析.pdf

1、隨著現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，仔豬的早期斷奶已經(jīng)成為國內(nèi)外集約化養(yǎng)豬生產(chǎn)的關(guān)鍵技術(shù)。然而，斷奶仔豬由于免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，容易受飼養(yǎng)環(huán)境中各種病原體的侵襲，導(dǎo)致免疫應(yīng)激，使用于生長(zhǎng)和骨骼肌蛋白質(zhì)沉積的養(yǎng)分轉(zhuǎn)而用于維持機(jī)體免疫應(yīng)答，導(dǎo)致其代謝行為發(fā)生改變，進(jìn)而引起生長(zhǎng)發(fā)育緩慢和生產(chǎn)效率降低，給畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，直接影響到豬場(chǎng)的生產(chǎn)水平和經(jīng)濟(jì)利益。免疫應(yīng)激嚴(yán)重影響胸腺的發(fā)育，胸腺做為中樞免疫器官在免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用，目前的研究主要集中

2、在蛋白質(zhì)編碼基因，miRNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后水平為免疫應(yīng)激分子機(jī)制提供了新的視角。本研究通過建立斷奶仔豬的免疫應(yīng)激模型，從胸腺中篩選相關(guān)差異表達(dá)miRNA，并對(duì)其進(jìn)行鑒定和生物信息分析，其研究結(jié)果有利于進(jìn)一步闡明斷奶仔豬免疫應(yīng)激的分子機(jī)制，也為利用miRNA及其靶基因信息來降低斷奶仔豬免疫應(yīng)激提供新的思路。本研究主要結(jié)果如下:
　　 1.將6頭大約克夏斷奶仔豬（21天斷奶）按胎次相同、出生體重相近、隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每個(gè)組別各

3、3頭豬。試驗(yàn)組注射100μg/kg BW的LPS，對(duì)照組注射等量的生理鹽水，3h后，采集斷奶仔豬胸腺及其他各種組織。檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組仔豬血漿中白細(xì)胞介素-2(IL-2)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、前列腺素(PGE2)及生長(zhǎng)激素(GH)的含量發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組免疫應(yīng)激較對(duì)照組血漿中炎性細(xì)胞因子(IL-2、IL-6、PGE2)的分泌量增加，而生長(zhǎng)激素分泌量顯著下降。這說明經(jīng)過LPS刺激后，試驗(yàn)組斷奶仔豬產(chǎn)生了急性免疫應(yīng)激，發(fā)生炎癥反應(yīng)。

4、>　　 2.在對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組仔豬胸腺總RNA進(jìn)行提取之后，我們采用Solexa測(cè)序技術(shù)對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組的miRNA文庫進(jìn)行了測(cè)序，結(jié)果分別獲得了高達(dá)14.5和13.3百萬條短序列讀數(shù)。通過Solexa深度測(cè)序?qū)φ战M得到126個(gè)新miRNA，實(shí)驗(yàn)組得到149個(gè)新miRNA。Solexa測(cè)序得到的對(duì)照組和試驗(yàn)組的共15個(gè)表達(dá)差異顯著的miRNA，利用qPCR進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果與Solexa測(cè)序結(jié)果一致。對(duì)于可能在免疫應(yīng)激中起重要作用的2個(gè)m

5、iRNA進(jìn)行組織表達(dá)譜構(gòu)建。
　　 3.將驗(yàn)證后的miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)以及WEGO功能分析發(fā)現(xiàn)，ssc-miR-129a、ssc-miR-1271、ssc-miR-1307、ssc-miR-23a等miRNAs的靶基因參與了免疫應(yīng)答、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬、應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)胞分化等重要的生物進(jìn)程。結(jié)合KEGG通路分析，我們發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)的miRNAs對(duì)MAPK通路、T細(xì)胞受體途徑、Toll樣受體途徑、凋亡和自噬的調(diào)控起著重要的作用。<