HPV陽性宮頸腺癌相關(guān)miRNAs篩選和功能分析.pdf

1、中山大學(xué)博士后學(xué)位論文HPV陽性宮頸腺癌相關(guān)miRNAs篩選和功能分析姓名：吳維光申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士后專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：林仲秋20081101H P V 陽性宮頸腺癌相關(guān)m i R N A s 篩選和功能分析 中山大學(xué)博士后出站報(bào)告機(jī)制開拓了新方向。M i c r o R N A ( m i R N A ) 是1 9 ～2 4 個(gè)核苷酸( n u c l e o t i d e ，n t ) 長度的單鏈R N A分子，是內(nèi)源性、不

2、編碼蛋白的短小R N A ，在基因表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮重要作用。m i R N A 基因首先由R N AP o l y m e r a s eI I 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生幾百甚至幾千n t 的初級(jí)產(chǎn)物，在核內(nèi)被R n a s eI I I 內(nèi)切酶家族中的D r o s h a 酶切割成7 0 個(gè)n t 左右的發(fā)夾狀前體( p r e - m i R N A ) ，p r e —m i R N A 在R a n _ G T P 和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白E x p o

3、r t i n 一5 的協(xié)同作用下轉(zhuǎn)運(yùn)出核。在細(xì)胞漿中，p r e - m i R N A 經(jīng)D i c e r 酶切割成約1 9 ～2 4 個(gè)n t 的雙鏈m i R N A 。其中一條R N A 鏈進(jìn)入核蛋白復(fù)合體，形成R N A 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體( R N A —i n d u c e ds il e n c i n gc o m p l e x ，R I S C ) ，這條單鏈R N A 稱為成熟m i R N A ，而別一條R

4、 N A 單鏈則被降解。R I S C 引導(dǎo)m i R N A 與互補(bǔ)的m R N A 形成完全或不完全的配對(duì)，降解m R N A或阻遏其轉(zhuǎn)錄后翻譯，產(chǎn)生基因沉默。人類基因組中約有1 0 0 0 多個(gè)m i R N A 基因，每個(gè)m i R N A 可調(diào)節(jié)2 0 0 多個(gè)靶基因，因此約三分之一編碼蛋白基因受m i R N A 調(diào)控。m i R N A s 參與了動(dòng)植物多種生命過程，包括增殖、凋亡、發(fā)育、分化和代謝等。m i R N A

5、s 表達(dá)異常與病毒感染關(guān)系密切，參與了病毒的致病過程，同時(shí)有證據(jù)顯示m i R N h s 參與了惡性腫瘤的發(fā)生。對(duì)基因組中腫瘤相關(guān)基因區(qū)域序列分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，有5 2 ．5 ％的m i R N A 基因位于其附近。多種腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)m i R N A s 表達(dá)異常，形成了不同腫瘤的m i R N A 表達(dá)譜。有學(xué)者認(rèn)為在腫瘤組織中低表達(dá)的m i R N A本身可能就是癌基因，而在腫瘤組織中高表達(dá)的m i R N A 本身可能就是抑癌基因，

6、m i R N A 在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。目前，關(guān)于m i R N A s 在高危型H P V誘導(dǎo)宮頸上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中的作用還不明確，有必要進(jìn)一步探討。研究目的：( 1 ) 篩選H P V 陽性宮頸腺癌組織特異的m i R N A 表達(dá)譜；( 2 ) 調(diào)控H P V陽性宮頸腺癌組織特異表達(dá)m i R N A ，探討其對(duì)宮頸腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的作用；( 3 ) 調(diào)控H P V 陽性宮頸腺癌組織特異表達(dá)m i R N A

7、 ，探討其對(duì)宮頸腺癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響。研究方法：( 1 ) 應(yīng)用m i R N A 芯片檢測(cè)l l 例H P V 陽性宮頸腺癌組織和癌旁組織m i R N A s 表達(dá)，篩選H P V 陽性宮頸腺癌組織特異表達(dá)的m i R N A s ，并應(yīng)用定量P C R方法進(jìn)行驗(yàn)證；( 2 ) 應(yīng)用A m b i o n 公司調(diào)控m i R N A 表達(dá)的系列試劑，上調(diào)H e L a 細(xì)胞m i R - 9 9 b 表達(dá)；( 3 ) 應(yīng)用M T