家豬13-17羅伯遜易位染色體著絲粒的研究.pdf

1、著絲粒是細胞有絲分裂和減數(shù)分裂過程中，保證染色體正常分裂、分離到子細胞的結(jié)構(gòu)、功能元件。它參與減數(shù)分裂中同源染色體的配對、姊妹染色單體的連接與細胞分裂后期的分離及細胞分裂后期啟動的調(diào)控。染色體運動和分離的分子機制的研究是遺傳學(xué)的熱點課題。因此，著絲粒的研究也是染色體功能研究的焦點之一。研究認為染色體的分離機制在真核生物中是保守的。過去認為這種保守性來自于DNA序列的特化，現(xiàn)在研究顯示著絲粒的功能是保守的，但組成著絲粒的DNA和蛋白質(zhì)在不

2、斷進化。
　　 豬著絲粒DNA重復(fù)序列分為兩個家族，即MC1和AC2。MC1是由340bp的重復(fù)單體串聯(lián)組成，分布于豬的中或亞中著絲粒染色體(1-12)和X染色體上，而AC2主要是由14bp單體構(gòu)成的重復(fù)序列組成，位于所有的端著絲粒染色體(13-18)上，目前還沒有獲得豬Y染色體著絲粒DNA重復(fù)序列的報道。
　　 本研究采用微量全血培養(yǎng)法制備13/17羅伯遜易位豬染色體標(biāo)本片，通過顯微切割方法獲得13/17羅伯遜易位染色

3、體著絲粒區(qū)域。經(jīng)兩輪DOP-PCR擴增獲得100bp～2000bp左右的連續(xù)帶。擴增產(chǎn)物經(jīng)純化后用T載體克隆方法構(gòu)建該區(qū)域DNA文庫。用NCBI及DNAMAN等軟件分析該文庫序列分析。用克隆質(zhì)粒作為探針前體，采用PCR法將Dig-dUTP隨機插入DNA中，而使DNA被標(biāo)記，通過熒光原位雜交方法從文庫中篩選出豬13/17羅伯遜易位染色體著絲粒特異性序列091026。表明著絲粒DNA在進化演變過程中產(chǎn)生特異性序列。
　　 獲得豬13