西瓜內(nèi)生細(xì)菌JK-3菌株的種類鑒定及其拮抗機(jī)理的初步研究.pdf

1、JK-3菌株是從西瓜根部篩選得到的一種革蘭氏陽(yáng)性菌，大小為3.0～4.2μm×0.7～1.0μm，菌落呈淡黃色、圓形、隆起、無褶皺、邊緣整齊。掃描電鏡觀察，該菌周生鞭毛，卵圓形芽孢，孢囊膨大。培養(yǎng)4d后菌落表面有較多粘性物質(zhì)生成。過氧化氫酶反應(yīng)、硝酸鹽反應(yīng)呈陽(yáng)性；氧化酶反應(yīng)、甲基紅反應(yīng)呈陰性。該菌株為兼性厭氧菌，可以水解淀粉和酪蛋白，無法利用檸檬酸鹽和丙二酸鹽。該菌株基因組DNA用16S rDNA通用引物PCR擴(kuò)增，得到1463bp的唯

2、一擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)NCBI的Blastn比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，JK-3菌株的16SrDNA序列與G-14(登錄號(hào)為：EU434620.1)等多粘類芽孢桿菌菌株的序列相似度達(dá)到100％。后經(jīng)過BIOLOG微生物鑒定系統(tǒng)測(cè)定，得到了最為匹配的數(shù)據(jù)Species ID：Paenibacillus polymyxa，即多粘類芽孢桿菌?？赡苄詾?00，相似度0.867，結(jié)合分子鑒定結(jié)果及其常規(guī)生理生化特性可以鑒定JK-3菌株為多粘類芽孢桿菌。
　　

3、JK-3菌株與測(cè)試植物病原真菌的PDA平板對(duì)峙培養(yǎng)結(jié)果表明：JK-3菌株對(duì)8種不同的供試植物病原真菌均具有良好的拮抗作用，其中對(duì)番茄灰霉病菌表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制作用，抑菌圈直徑達(dá)到28mm，對(duì)其它多種病原菌也有良好的抑制作用，表明JK-3菌株的拮抗譜較廣。JK-3菌株的菌液以及其無菌濾液對(duì)西瓜枯萎病菌孢子萌發(fā)的抑制作用，結(jié)果顯示菌液及無菌濾液對(duì)西瓜枯萎病菌的孢子萌發(fā)均有明顯的抑制作用，表明該菌株可以通過分泌抗生物質(zhì)來抑制西瓜枯萎病菌孢子的萌

4、發(fā)。盆栽防效試驗(yàn)證明JK-3菌株保護(hù)處理可以顯著降低西瓜枯萎病菌侵染導(dǎo)致的幼苗發(fā)病率和致死率，防效分別達(dá)74.6％和94.8％的，進(jìn)一步證明了JK-3菌株良好的拮抗性，具有較好的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。
　　 JK-3菌株培養(yǎng)濾液以70％硫酸銨沉淀和透析，獲得抗菌粗蛋白。該抗菌蛋白對(duì)西瓜枯萎病菌和西瓜蔓枯病菌具有明顯的抑制作用。另外該抗菌蛋白對(duì)熱不穩(wěn)定，但對(duì)紫外線、氯仿、蛋白酶K都不敏感。經(jīng)測(cè)定，蛋白組分內(nèi)無α-氨基酸和苯環(huán)結(jié)構(gòu)，不含脂，