拮抗植物寄生線蟲(chóng)的細(xì)菌菌株篩選及其殺線蟲(chóng)相關(guān)基因的鑒定.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文拮抗植物寄生線蟲(chóng)的細(xì)菌菌株篩選及其殺線蟲(chóng)相關(guān)基因的鑒定姓名：夏彥飛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：高學(xué)文201012拮抗植物寄生線蟲(chóng)的細(xì)菌菌株篩選及其殺線蟲(chóng)相關(guān)基因的鑒定2、枯草芽孢桿菌(且s“6行凰)OKBl05菌株對(duì)爪哇根結(jié)線蟲(chóng)(肱，忱以泐)具有較高的殺線活性本試驗(yàn)對(duì)OKBl05菌株分泌的殺線活性物質(zhì)的基本性質(zhì)進(jìn)行了研究結(jié)果表明：該菌株產(chǎn)生的殺線活性物質(zhì)是可隨水分一同蒸發(fā)的非蛋白質(zhì)類物質(zhì)；分子量小

2、于1kDa；該物質(zhì)在4℃、20℃下保存40d仍能保持殺線活性；對(duì)熱不敏感；堿性條件下具有較高的殺線活性；極性強(qiáng)，正丁醇、氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑不能將其活性物質(zhì)從培養(yǎng)濾液中提取3、對(duì)構(gòu)建的枯草芽孢桿菌OKBl05菌株突變體文庫(kù)中的2000個(gè)突變體進(jìn)行篩選，結(jié)果表明：1個(gè)突變體M1在72h時(shí)的殺線率為O％反向PCR擴(kuò)增結(jié)果表明Ml菌株中的礎(chǔ)厄基因被破壞刪厄基因編碼甲酰甘氨脒核苷酸合成酶lI(Phosph嘶bosyl加nyl91ycm吼id

3、iI地s)，IlⅡla酏Ⅱ)在嘌呤生物合成途徑中催化甲酰甘氨酰胺核苷酸合成甲酰甘氨脒核苷酸構(gòu)建兩種質(zhì)粒pMA5刪以和pucl8棚以對(duì)M1突變體進(jìn)行活性回復(fù)，結(jié)果證明pz以基因在0KBl05菌株的殺線活性中起著非常重要的作用這也是首次報(bào)道刪厄基因影響枯草芽孢桿菌的殺線活性M1菌株不僅能通過(guò)功能互補(bǔ)來(lái)回復(fù)殺線活性，而且在含有5氨基咪唑4甲酰胺核苷酸(5距l(xiāng)inoilIlid配ole4calbox鋤ideriboside，趾a咀)或腺嘌呤(A

4、d啪ine)和硫胺(砸觚liIle)的uNDY培養(yǎng)基中發(fā)酵后，其殺線活性也能回復(fù)結(jié)果顯示刪厄基因是通過(guò)調(diào)控嘌呤生物合成中的一些代謝中間產(chǎn)物來(lái)影響OKBl05菌株的殺線活性此外，刪厄基因還影響M1菌株的培養(yǎng)性狀4、從實(shí)驗(yàn)中選出六個(gè)大腸桿菌(盛幽e融記∞菌株用I。AⅫ)Y培養(yǎng)基發(fā)酵，離心后取培養(yǎng)濾液處理線蟲(chóng)，離體條件下測(cè)定菌株的培養(yǎng)濾液原液對(duì)爪哇根結(jié)線蟲(chóng)(M廂陽(yáng)靠泐)的殺線率結(jié)果顯示：處理12h后觀察，6株大腸桿菌的殺線率都為100％，并且

5、都能使線蟲(chóng)蟲(chóng)體內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，但是線蟲(chóng)蟲(chóng)體內(nèi)部結(jié)構(gòu)出現(xiàn)變化的時(shí)間不一致以BL21菌株作為進(jìn)一步研究的對(duì)象結(jié)果顯示BL2l菌株培養(yǎng)濾液原液稀釋至20％，處理36h殺線率仍為100％對(duì)其分泌的殺線活性物質(zhì)的基本性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明：該菌株產(chǎn)生的殺線活性物質(zhì)可隨水分一同蒸發(fā)；4℃、一25℃下保存90d仍能保持殺線活性；對(duì)熱不敏感；在一定的酸性范圍內(nèi)具有較高的殺線活性BL21菌株培養(yǎng)濾液還能抑制爪哇根結(jié)線蟲(chóng)的卵塊孵化，抑制率為989％