基于S1蛋白核心中和表位區(qū)的豬流行性腹瀉亞單位疫苗研究.pdf

1、豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的一種豬的急性、高度接觸性腸道傳染病，主要特征為腹瀉、嘔吐、脫水和高死亡率。自2010年以來，以PEDV變異株為主引起的PED在我國各省份廣泛流行，對我國養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。疫苗免疫是目前防控PED的最有效途徑，目前市場主要預防PED的疫苗為多聯(lián)滅活、或弱毒疫苗，以上疫苗存在保護率低、安全性低、成本昂貴等缺點，未對PED實現(xiàn)有限地防控和凈化，市場亟待開發(fā)更加安全、經(jīng)濟、高

2、效的新型疫苗（尤其是亞單位疫苗）用于PED的防制。PEDV S1結構域是介導PED保護性免疫的主要功能區(qū)，核心中和表位(COE)是S1的最重要功能區(qū)，也是目前用于PED亞單位疫苗研究的最小保護抗原。
　　因此，本研究通過畢赤酵母表達系統(tǒng)對PEDV S1的COE進行表達。同時嘗試將COE與人和豬的IgG1 Fc進行融合來提高COE抗原的免疫效果，取得的主要結果如下:
　　a)利用PCR分別擴增出COE、P1Fc、H1Fc片段，

3、通過重疊PCR技術拼接COE-P1Fc和COE-H1Fc片段，成功構建了酵母表達載體pPICZαA-COE、pPICZαA-COE-P1Fc和pPICZαA-COE-H1Fc;
　　b)利用酵母表達系統(tǒng)分泌表達產(chǎn)物經(jīng)Western blotting鑒定，結果表明成功的表達了rCOE、rCOE-P1Fc、rCOE-H1Fc3種蛋白。
　　c)免疫小鼠42 d后采集各組血清通過間接ELASA和中和試驗評價機體產(chǎn)生抗體情況。間接E

4、LASA結果表明3組實驗組都產(chǎn)生了較高水平的抗體。血清中和試驗結果顯示rCOE、r COE-P1Fc、rCOE-H1Fc實驗組中和效價依次為1∶160、1∶640、1∶512，rCOE-P1Fc、rCOE-H1Fc實驗組中和效價顯著高于rCOE實驗組和PBS對照組，結果表明在COE基因基礎上融合佐劑P1Fc、H1Fc，明顯提高了PED亞單位疫苗效果。
　　本研究首次利用畢赤酵母表達系統(tǒng)表達S1蛋白核心中和表位融合蛋白，對研究PED