IFN-τ調(diào)控奶牛子宮上皮細(xì)胞表達(dá)MICB及BoLA-A的研究.pdf

1、在正常妊娠過程中胎兒作為一種同種半異體被母體所接受而不出現(xiàn)免疫排斥現(xiàn)象，主要依賴于胎生動(dòng)物母胎界面細(xì)胞上MHC表達(dá)情況。MHC-Ⅰ類相關(guān)鏈基因(MIC)和牛白細(xì)胞抗原A基因(BoLA-A)分別屬于非經(jīng)典和經(jīng)典的MHC-Ⅰ類基因。MICB作為NK細(xì)胞激活受體NKG2D的配基，其表達(dá)的增強(qiáng)將激活NK細(xì)胞的活性；而BoLA-A是目前唯一確定的BoLA-Ⅰ類基因的基因座位，主要功能是表達(dá)Ⅰ類分子的α重鏈。研究表明MICB與BoLA-A在動(dòng)物圍植

2、入期胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞中的表達(dá)具有時(shí)相性，并且其表達(dá)的沉默有利于母體識(shí)別不排斥胎兒這一妊娠過程的建立。IFN-τ屬于Ⅰ型干擾素，只在反芻動(dòng)物胚胎圍植入期滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)和分泌，被公認(rèn)為是反芻動(dòng)物妊娠識(shí)別的信號分子，然而，IFN-τ的受體卻在母體的子宮上皮細(xì)胞?；贗FN-τ與MIC和BoLA-A表達(dá)的時(shí)間和空間上的高度一致性，可以認(rèn)為其可能存在某種關(guān)聯(lián)。研究IFN-τ對奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞MICB和BoLA-A表達(dá)的調(diào)控作用，并藉此進(jìn)一步探討

3、奶牛妊娠圍植入期BoLA-I參與的妊娠免疫調(diào)控的分子機(jī)制具有指導(dǎo)意義。
　　 本試驗(yàn)以健康的荷斯坦奶牛子宮為材料，運(yùn)用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞，建立了奶牛子宮上皮細(xì)胞的高效體外培養(yǎng)方法。采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞長勢良好、形態(tài)密度正常。作為原代細(xì)胞，我們可以對其繼代培養(yǎng)，多次試驗(yàn)表明在繼代培養(yǎng)到第八代之前細(xì)胞形態(tài)良好可以用于本次試驗(yàn)，第八代之后細(xì)胞出現(xiàn)衰老凋亡現(xiàn)象，為保證試驗(yàn)結(jié)果不予采用。
　　 設(shè)置奶牛子宮

4、上皮細(xì)胞密度5×105個(gè)/mL作為IFN-τ對MIC和BoLA-A表達(dá)干預(yù)試驗(yàn)的模型。不同的干預(yù)濃度(50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL)和干預(yù)時(shí)間(3h、6h、12h)的外源性IFN-τ對子宮上皮細(xì)胞作用后，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IFN-τ對奶牛子宮上皮細(xì)胞MICB和BoLA-A表達(dá)的調(diào)控作用。結(jié)果顯示，IFN-τ對奶牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞MICB和BoLA-A的表達(dá)具有顯著調(diào)控作用。在3h～6h內(nèi)，IFN-τ對子宮上

5、皮細(xì)胞MICB表達(dá)具有明顯的抑制作用(P<0.01)；12h后其抑制作用減弱，MICB的表達(dá)水平與未添加IFN-τ的試驗(yàn)對照組差異不顯著(P>0.05)。IFN-τ對子宮上皮細(xì)胞BoLA-A表達(dá)在3～6h內(nèi)具有明顯的抑制作用(P<0.01)；但在12h后，BoLA-A的表達(dá)水平顯著高于未添加IFN-τ的試驗(yàn)對照組(P<0.01)。IFN-τ對MICB和BolA-A表達(dá)水平的抑制作用在不同濃度(50ng/mL、100ng/mL、200ng