17α-Methyltestosterone和Letrozole對尼羅羅非魚性轉(zhuǎn)化影響及其性別決定機制的初步研究.pdf

1、自然條件下,羅非魚的繁殖周期較短,繁殖后代需消耗大量的能量而影響其生長速度。針對羅非魚個體在生長方面的性別二態(tài)性,生產(chǎn)上采用單雄性養(yǎng)殖以提高養(yǎng)殖產(chǎn)量與效益。全雄羅非魚苗種的獲得主要通過種間雜交或性激素誘導獲得。本文用雄性激素17α-甲基睪酮(MT)處理尼羅羅非魚魚苗,研究MT對尼羅羅非魚雄性率的影響及殘留情況,并通過熒光定量PCR的方法測定激素處理后類固醇酶基因的表達情況,同時用微衛(wèi)星方法檢測尼羅羅非魚性別相關(guān)標記。嘗試從分子機理上闡明

2、影響性別決定的基因位點及影響魚類性別決定的分子機制,為人工控制魚類性別、培育單性魚以及為生產(chǎn)實踐中有效地提高群體生長率、控制繁殖速度、提高商品魚的艦格和質(zhì)量提供理論基礎(chǔ),對羅非魚生產(chǎn)有指導意義。主要研究結(jié)果如下:
　　 1、本文采用不同濃度梯度17α-甲基睪酮(17α-Methyltestosterone,MT)飼料(5,10,30,50和60mg·kg-1)處理孵化后10天的尼羅羅非魚魚苗30天,之后改喂lF常飼料繼續(xù)進行養(yǎng)殖

3、。經(jīng)過4個月的飼喂后,MT處理組的絕對增長率、絕對增重率、瞬時增長率和瞬時增重率等參數(shù)均與對照組間存在顯著差異(P<0.05)。統(tǒng)計魚茁雄性率,發(fā)現(xiàn)高濃度處理組(50mg·kg-1和60 mg·kg-1)雄性率超過99％,低濃度處理組(5mg·kg-1和10mg·kg-1)雄性率則低于80％。MT處理30天后,對照組與處理組MT殘留量分別為0μg·kg-1(對照組)<23.19μg·kg-1(5mg·kg-1)<30.82μg·kg-1

4、(10 mg·kg-1)<37.76μg·kg-1(30 mg·kg-1)<44.75μg·kg-1(50mg·kg-1)<68.41μg·kg-1(60mg·kg-1)。殘留量與MT添加量呈現(xiàn)正相關(guān)。繼續(xù)投喂正常飼料30天后,在各濃度處理組均未檢測到MT殘留。以上研究結(jié)果表明:MT處理30天可提高羅非魚苗雄性率,促進生長；MT處理后60天,均檢測不出MT殘留。
　　 2、本實驗用濃度為l0mg·kg-1的MT、Letrozol

5、e分別腹腔注射尼羅羅非魚,在注射后12h、24h、48h、7d、14d、21d時檢測P450arom、11β-HSD2、P450Scc基因表達量。發(fā)現(xiàn)三個基因初始表達量均下降,而后回升。在用MT注射尼羅羅非魚后,檢測發(fā)現(xiàn)P450Scc基因最先受到抑制,P450arom和11β-HSD2次之；而用芳香化酶抑制劑Letrozole注射尼羅羅非魚后,檢測發(fā)現(xiàn)P450arom和P450Scc較先受到抑制,而11β-HSD2次之。這表明:MT可能

6、是通過調(diào)節(jié)P450Scc基因水平進而降低了P450arom的表達量,而芳香化酶抑制劑Letrozole為直接調(diào)節(jié)P450arom基因進而對魚類的性別造成影響。
　　 3、從GenBank上選取10對(UNH104,GM041,GM663,UNH168,UNH846,UNH931,UNH148,UNH985,UNH995,GM258)微衛(wèi)星引物,分別對雌雄尼羅羅羅非魚基因組進行擴增。結(jié)果表明:雌性尼羅羅非魚群體各位點的多態(tài)信息含量