番茄潰瘍病菌的富集和快速分子生物學檢測方法研究.pdf

1、目的：番茄潰瘍病(Bacterial canker of tomato)是導致番茄大幅減產的最重要細菌性病害，嚴重影響番茄的產量和品質。種子帶菌是該病大規(guī)模流行和遠距離傳播的最主要途徑，種子上攜帶的微量病菌就可以引起該病的大規(guī)模流行。由于種子的帶菌率較低，傳統(tǒng)的種子檢測方法常常導致微量病菌被漏檢，不能滿足種子帶菌檢測的要求。因此，建立一種準確、快速、靈敏的番茄種子帶菌檢測方法，對有效阻止有害生物入侵和蔓延具有重要的科學意義和實用價值。<

2、br>　　 方法：采用不經過病原富集的方法如免疫學和分子生物學方法中的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、直接PCR(Direct-PCR)、巢式PCR(Nested-PCR)直接對番茄潰瘍病菌純菌液和模擬帶菌種子提取液進行檢測，并與經過病原富集后再結合PCR技術的方法如膜過濾PCR、BIO-PCR，以及將免疫學富集和PCR技術結合起來的硝酸纖維素膜捕獲法PCR、免疫捕捉PCR(IC-PCR)和免疫磁珠分離PCR(IMS-PCR)等檢測方法

3、進行比較，并從檢測靈敏度、檢測周期，檢測穩(wěn)定性及檢測成本等角度對上述方法進行評價。
　　 結果：免疫學方法如ELISA在梯度稀釋的純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測靈敏度均為106CFU/ml。單純的分子生物學方法如Direct-PCR和Nested-PCR在純菌液中的檢測靈敏度分別為104CFU/ml和102CFU/ml，在模擬帶菌種子提取液中的檢測靈敏度分別為106CFU/ml和104CFU/ml。膜過濾PCR在純菌液中的檢

4、測靈敏度為102CFU/ml。BIO-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測靈敏度均為101CFU/ml，但檢測周期較長。硝酸纖維素膜捕獲法PCR在純菌液中的檢測靈敏度為101CFU/ml。IC-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測靈敏度分別為102CFU/ml和104CFU/ml，且檢測周期短、穩(wěn)定性高。IMS-PCR在純菌液和模擬帶菌種子提取液中的檢測靈敏度均為102CFU/ml，而且該方法簡便快捷、檢測穩(wěn)定性高。