人工誘導(dǎo)雌性花鰻鱺性腺發(fā)育成熟的研究.pdf

1、花鰻鱺是我國(guó)珍貴的食用魚,經(jīng)濟(jì)價(jià)值高、營(yíng)養(yǎng)豐富,資源十分匱乏,屬國(guó)家二級(jí)野生保護(hù)動(dòng)物。近年來(lái),海南、廣東等地積極發(fā)展花鰻鱺養(yǎng)殖業(yè),但苗種短缺是制約養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要因素之一。開(kāi)展人工繁殖技術(shù)的研究對(duì)于花鰻鱺自然資源的保護(hù)和養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展都有重要意義。但至今為止,花鰻鱺生殖內(nèi)分泌和人工繁殖的研究未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。本研究首次成功地利用外源激素誘導(dǎo)塘養(yǎng)花鰻鱺卵巢發(fā)育成熟,并研究了人工催熟過(guò)程中花鰻鱺卵巢發(fā)育的組織形態(tài)學(xué)特征;分析了卵巢發(fā)育不

2、同時(shí)期,促性腺激素mRNA的表達(dá)以及血清中性類固醇激素濃度的變化規(guī)律。同時(shí),對(duì)處于不同卵巢發(fā)育時(shí)期的肝臟及消化道的結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行比較和分析,主要研究如下:
　　 1.采用多次肌肉注射lHRH-A2和CPE混合物的方法,誘導(dǎo)雌性花鰻鱺性腺發(fā)育成熟。其中,5尾肌肉注射生理鹽水的對(duì)照組雌性花鰻鱺經(jīng)20周后解剖觀察,無(wú)1尾卵巢發(fā)育成熟,組織切片結(jié)果表明卵巢發(fā)育停留在Ⅰ-Ⅱ期,平均GSI為1.18％。15尾注射LHRH-A2和鯉魚腦垂體勻漿

3、(CPE)的實(shí)驗(yàn)組雌性花鰻鱺經(jīng)20周后解剖觀察,卵巢均有不同程度的發(fā)育,性腺系數(shù)明顯升高,激素作用效果良好。
　　 2.用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)了卵巢發(fā)育成熟過(guò)程中GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA表達(dá)量。結(jié)果表明:對(duì)照組GtHα、LHβ和FSHβ的mRNA表達(dá)均較低(GtHα為0.65±0.44;FSHβ為0.0015±0.00056;LHβ為0.003±0.0014;n=5);實(shí)驗(yàn)組魚當(dāng)性腺發(fā)育至卵黃生成期時(shí),三個(gè)亞

4、基的表達(dá)量(GtHα為4.14±0.42;FSHβ為0.53±0.18;LHβ為1.5±0.69;n=5)都明顯高于對(duì)照組:當(dāng)性腺發(fā)育到成熟階段,三個(gè)亞基的表達(dá)量不同程度降低(GtHα為1.57±1.11;FSHβ為0.00089±0.00022;LHβ為0.088±0.63;n=6),其中LHβ的含量只比卵黃生成期略有下降,仍然呈現(xiàn)高表達(dá)量,而FSHβ在卵巢發(fā)育成熟時(shí)的表達(dá)量明顯下降,且比對(duì)照組低。
　　 3.利用放射性免疫測(cè)

5、定技術(shù)(RIA)測(cè)定血清中類固醇激素的水平。結(jié)果顯示,對(duì)照組雌性花鰻鱺血清中E2的含量較高(含量為48.79±29.75,ng/ml,n=5);實(shí)驗(yàn)組魚卵巢發(fā)育到卵黃生成期時(shí),血清中E2含量較對(duì)照組為低(含量為9.81±6.94,ng/ml,n=5);卵巢發(fā)育到成熟期時(shí),血清中E2的含量較實(shí)驗(yàn)組為低(含量為4.1±2.12,ng.ml,n=5);卵巢發(fā)育完全成熟時(shí),血清中E2含量最低(含量為1.27±0.95,ng/ml,n=5)。結(jié)果

6、表明,隨著花鰻鱺卵巢的發(fā)育成熟,血清中E2的含量逐漸減少。對(duì)照組雌性花鰻鱺血清中T含量極低不在試劑盒靈敏度范圍內(nèi),因此檢測(cè)不到T的實(shí)際含量。實(shí)驗(yàn)組魚卵巢發(fā)育到卵黃生成期時(shí),血清中T含量為0.26±0.33,ng/ml(n=5);卵巢發(fā)育到成熟期時(shí),血清中T的含量較高(含量為0.38±0.29,ng/ml,n=5);卵巢發(fā)育完全成熟時(shí),血清中T含量達(dá)到最高(含量為1.43±0.41,ng/ml,n=5)。結(jié)果表明,隨著花鰻鱺卵巢的發(fā)育成熟

7、,血清中T的含量有增加的趨勢(shì)。
　　 4.利用過(guò)碘酸雪夫反應(yīng)(PAS),對(duì)肝糖原進(jìn)行特異性染色。觀察結(jié)果表明,對(duì)照組魚肝糖原含量豐富,糖原骨架呈密集的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),幾乎看不到脂滴顆粒,平均肝臟系數(shù)為0.65％;實(shí)驗(yàn)組魚性腺發(fā)育到Ⅱ期時(shí),肝糖原含量減少,糖原骨架呈稀疏的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),脂滴顆粒呈圓形或橢圓形,數(shù)量急劇增加,肝臟內(nèi)幾乎充滿了脂滴顆粒,此時(shí)的平均肝臟系數(shù)為0.89％;性腺發(fā)育到Ⅲ-Ⅳ期時(shí),肝糖原繼續(xù)減少,糖原骨架所形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)

8、幾乎消失,脂滴顆粒開(kāi)始減少,平均肝臟系數(shù)為1.07％;性腺發(fā)育到Ⅴ期時(shí),肝糖原含量基本與Ⅲ-Ⅳ期時(shí)保持一致,而脂滴顆粒數(shù)量大量減少,平均肝臟系數(shù)為1.57％。結(jié)果表明隨著卵巢的不斷發(fā)育,肝臟系數(shù)隨之增加。
　　 5.對(duì)照組平均消化道系數(shù)為1.242％,實(shí)驗(yàn)a組平均消化道系數(shù)和對(duì)照組幾乎沒(méi)有變化,為1.241％;實(shí)驗(yàn)b組平均消化道系數(shù)則極顯著下降,為0.453％;實(shí)驗(yàn)c組平均消化道系數(shù)最低,僅為0.407％?；狑~的胃和腸道則分為