魚類蛋白質(zhì)感染因子(PrPc)的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)感染因子(proteinaceous infectious agents,Prions)是蛋白本質(zhì)、導(dǎo)致傳染性海綿樣腦病(transmissible spongiform encephalopathies,TSE)的致病因子,一般指感染因子蛋白(Prion Protein,PrP)的凝聚體。蛋白質(zhì)感染因子蛋白種類多,物種分布廣。魚類也可能通過(guò)飼料蛋白形成魚類Prions和魚類TSE。因此以重要的實(shí)驗(yàn)室魚類孔雀魚及我國(guó)的主要淡水經(jīng)濟(jì)

2、魚類鳙魚、草魚為研究對(duì)象,對(duì)蛋白質(zhì)感染因子蛋白基因的結(jié)構(gòu)、組織表達(dá)及在不同濃度的鹽水中此基因表達(dá)情況進(jìn)行了研究,取得以下結(jié)果:
　　 克隆孔雀魚、鳙魚和草魚的蛋白質(zhì)感染因子蛋白基因,獲得孔雀魚、鳙魚和草魚的PrPC基因序列。分析表明:孔雀魚PrPC含515個(gè)氨基酸,分子量約為54kD,pI約為9.51;鳙魚PrPC含551個(gè)氨基酸,分子量約為57kD,pI約為9.10:草魚PrPC含534個(gè)氨基酸,分子量約為56kD,pI約為8

3、.94。具有蛋白質(zhì)感染因子蛋白全部特征結(jié)構(gòu):信號(hào)肽、基本結(jié)構(gòu)、重復(fù)肽區(qū)域、疏水區(qū)域、二硫鍵、糖基化位點(diǎn)和一個(gè)糖基縮醛磷肌醇位點(diǎn)(GPI)。從魚類PrP的進(jìn)化系統(tǒng)樹中可知道,此次獲得的孔雀魚PrPC屬于PrP-1型魚類蛋白質(zhì)感染因子,鳙魚、草魚PrPC屬于PrP-2型魚類蛋白質(zhì)感染因子。采用染色體步移獲得孔雀魚PrPC對(duì)應(yīng)的基因組DNA片段,長(zhǎng)3,720bp。在孔雀魚中該基因是由單個(gè)外顯子編碼的,該基因至少包括2個(gè)內(nèi)含子和2個(gè)外顯子。

4、r>　　 通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)孔雀魚PrPC基因在各組織當(dāng)中的表達(dá)情況和在不同濃度的鹽水中的表達(dá)情況,結(jié)果表明,孔雀魚PrPC基因在腦、眼、肝胰臟、腸、肌肉和尾中均有表達(dá),但在腦中表達(dá)最豐富。孔雀魚PrPC基因在5‰鹽度的水中的表達(dá)量顯著高于清水中的表達(dá)量,暗示該基因的表達(dá)可能與孔雀魚抵抗鹽脅迫相關(guān)。
　　 本文最后對(duì)不同脊椎動(dòng)物PrPC的球形區(qū)域和重復(fù)序列進(jìn)行了系統(tǒng)學(xué)分析,同時(shí)對(duì)魚類感染Prions的風(fēng)險(xiǎn)性進(jìn)行了分析。