苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖及酶蛋白基因表達(dá)的影響.pdf

1、本試驗以組織塊法分離培養(yǎng)，采用刮除法和相差消化法純化傳代獲取山羊乳腺上皮細(xì)胞，以2～3代的細(xì)胞為對象，研究大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔?？傇碥諏ζ湓鲋澈挺羢l和β兩種酪蛋白基因表達(dá)的影響。
　　 1山羊乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
　　 運(yùn)用組織塊法分離培養(yǎng)山羊乳腺上皮細(xì)胞，經(jīng)形態(tài)學(xué)和免疫組化鑒定為上皮細(xì)胞，采用刮除法和相差消化法純化細(xì)胞，并用0.25％胰蛋白酶和0.04％EDTA進(jìn)行傳代，傳代初始細(xì)胞活力保持良好，形態(tài)均

2、一。傳至20代，細(xì)胞活力下降。至25代，細(xì)胞開始凋亡。傳至30代細(xì)胞發(fā)生完全凋亡。本章試驗結(jié)果為山羊乳腺上皮細(xì)胞系的建立奠定了基礎(chǔ)。
　　 2苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖的影響
　　 采用MTT法研究了不同濃度的大豆苷、染料木苷、淫羊藿苷和桔?？傇碥諏ι窖蛉橄偕掀ぜ?xì)胞增殖的影響。結(jié)果表明：苷類納克級別濃度組較微克級別濃度組對細(xì)胞增殖的影響更明顯；處理細(xì)胞48h較24h和72h對細(xì)胞增殖的影響更明顯；10ng/mL大豆苷

3、顯著促進(jìn)山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖；10ng/mL和100ng/mL染料木苷顯著促進(jìn)山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖；山羊MEC增殖與淫羊藿苷納克級別濃度有一定的劑量依賴性關(guān)系，而且所有濃度處理組(1、5、10、100和1000ng/mL)都能顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖；說明這三種苷能促進(jìn)細(xì)胞增殖。低濃度(1和5ng/mL)桔?？傇碥漳芤种萍?xì)胞的增殖。
　　 3苷類物質(zhì)對山羊乳腺上皮細(xì)胞酪蛋白基因表達(dá)的影響
　　 應(yīng)用Real Time PCR測定

4、不同濃度的四種苷處理細(xì)胞48h后對伍αsl和β兩種酪蛋白基因相對表達(dá)量的影響。結(jié)果表明：低濃度(1ng/mL、10ng/mL)的大豆苷有所提高αsl-酪蛋白基因的表達(dá)，10ng/mL的大豆苷有所提高β-酪蛋白基因的表達(dá)；10ng/mL和100ng/mL的染料木苷顯著提高αsl-酪蛋白基因的表達(dá)，1和10ng/mL的染料木苷能顯著提高β-酪蛋白基因的表達(dá)量，10ng/mL染料木苷是提高酪蛋白基因表達(dá)的最優(yōu)濃度；1ng/mL、10ng/mL