725楊再生體系的建立及轉(zhuǎn)Bt基因的研究.pdf

1、楊樹是重要的速生輕工業(yè)原材料，在保護(hù)和維持生態(tài)環(huán)境上發(fā)揮著重要作用。因此，楊樹林種植面積的正在逐年的增加，而楊樹蟲害卻嚴(yán)重制約著楊樹林的發(fā)展。美洲黑楊725楊(Populus deltoides cl.‘725’)的具有優(yōu)良的耐水淹能力，適合種植于安徽淮河以南地區(qū)。蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，Bt)，晶體蛋白具有特異性殺蟲的功能，利用基因工程技術(shù)將蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白基因?qū)氲綏顦渲腥?，這不僅提高

2、楊樹的抗蟲性，也降低了因化學(xué)藥劑的過量使用而對環(huán)境造成的污染。
　　 本實(shí)驗(yàn)選用了美洲黑楊725楊的葉片作為外植體，對其進(jìn)行高效的再生體系建立。同時(shí)將含有Bt基因的質(zhì)粒導(dǎo)入到根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗蟲基因?qū)氲矫乐藓跅?25楊中，在此過程巾對農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了vir基因的活化改良實(shí)驗(yàn)，且對725楊的葉片和分化芽進(jìn)行了潮霉素B的抗性篩選，最終對以轉(zhuǎn)化的抗性植株進(jìn)行分子檢測。實(shí)驗(yàn)獲得了以下結(jié)果：
　　

3、 (1)美洲黑楊725楊葉片的最佳消毒體系為：用75％的酒精消毒時(shí)間8 s，0.1％的升汞消毒3 min，葉片的污染率僅為5.7％，出愈率高達(dá)67.2％。
　　 (2)美洲黑楊725楊葉片的最佳誘導(dǎo)愈傷的培養(yǎng)基是：MS+6-BA0.2 mg/L+2，4-D1.5 mg/L+蔗糖25 g/L+瓊脂6 g/L；最佳誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為：MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.3 mg/L+KT0.3 mg/L+蔗糖25 g/L+瓊脂6

4、 g/L；適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為：MS+6-BA0.3 mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖25 g/L+瓊脂6 g/L；最佳生根培養(yǎng)基：1/2MS+NAA0.01mg/L+IBA0.7 mg/L+蔗糖20 g/L+瓊脂6 g/L。選擇主根發(fā)達(dá)，莖健壯且達(dá)到3～5 cm的組培苗進(jìn)行煉苗移栽。
　　 (3)對725楊葉片分化和不定芽生根進(jìn)行了潮霉素B的敏感性試驗(yàn)，確定葉片分化的臨界濃度為2.5 mg/L，生根的臨界濃度為1.5