山新楊轉(zhuǎn)Bt+蜘蛛殺蟲肽基因的研究.pdf

1、楊樹作為用材、防風(fēng)、綠化的主要樹種，在我國各省、區(qū)具有廣泛分布和大面積栽培。由于楊樹的病蟲害種類多、危害重，常常給我國的林業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)建設(shè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。當(dāng)前人類的生態(tài)和環(huán)境安全意識(shí)日益提高，大量使用化學(xué)農(nóng)藥防治病蟲害將受到限制，生物防治的措施又比較薄弱，楊樹有害生物可持續(xù)控制將是森林保護(hù)領(lǐng)域面臨的問題。本研究以山新楊為受體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Bt+蜘蛛殺蟲肽抗蟲基因?qū)朐撌荏w中，不僅為山新楊的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性育種提供了理論基礎(chǔ)，同時(shí)

2、為山新楊抗蟲品種（系）的擴(kuò)繁和野外栽培提供了繁殖材料。
　　1.通過測(cè)定不同濃度頭孢對(duì)山新楊葉片愈傷組織形成及分化的影響，認(rèn)為山新楊葉片對(duì)頭孢噻肟鈉具有一定的抗性，篩選培養(yǎng)中加入濃度為600mg/L的頭孢霉素不會(huì)對(duì)山新楊葉片愈傷形成和分化產(chǎn)生不利影響。
　　2.卡那霉素對(duì)山新楊葉片分化和誘導(dǎo)生根所能忍受的臨界濃度為10mg/L，高于該濃度即可抑制山新楊葉片的分化;卡那霉素對(duì)山新楊誘導(dǎo)生根所能忍受的臨界濃度為15mg/L，濃度

3、達(dá)20mg/L以上時(shí)，組培苗的生長明顯受到抑制。
　　3.在進(jìn)行山新楊遺傳轉(zhuǎn)化時(shí)，預(yù)培養(yǎng)時(shí)間以2～3d為最好，2d的抗性芽率為23.3％，3d的抗性芽率為20％。預(yù)培養(yǎng)時(shí)間低于2d和大于4d抗性芽率下降。
　　4.菌液濃度過高會(huì)使受體材料迅速褐化死亡，菌液濃度過低轉(zhuǎn)化抗性芽率低或?yàn)榱?，適宜于山新楊轉(zhuǎn)化的菌液濃度為OD600=0.1～0.2。侵染時(shí)間在2～5min有利于山新楊葉片的遺傳轉(zhuǎn)化。在菌液濃度一定時(shí)，侵染2～5min抗

4、性芽率隨時(shí)間的增加而提高。侵染5min以上時(shí)，雖葉片的分化率較高，但是形成的抗性芽較低。
　　5.共培養(yǎng)時(shí)間以2～3d為宜，4d以上不僅假陽性芽增加，而且外植體生長變?nèi)酢⑷~片和芽黃化。
　　6.優(yōu)化了山新楊遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，預(yù)培養(yǎng)2～3d、OD600=0.1～0.2菌液侵染2～5min、共培養(yǎng)2～3d和共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加200μmol/LAS為山新楊遺傳轉(zhuǎn)化的最佳組合。
　　7.共侵染山新楊葉盤1570個(gè)，獲得抗性芽植株8