楊樹優(yōu)良無性系再生體系的建立及轉(zhuǎn)Bt基因的研究.pdf

1、楊樹是我國重要的造林樹種，具有適應(yīng)性強(qiáng)、速生、豐產(chǎn)等特性，是我國主要的短周期工業(yè)用材林樹種，在生態(tài)環(huán)境治理和解決木材短缺等方面占有重要地位。蟲害是楊樹造林生產(chǎn)上面臨的一大難題。培育轉(zhuǎn)基因抗蟲楊樹是近年來興起的一種新的害蟲防治技術(shù)，蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis，簡稱Bt)是一類非常重要的昆蟲病原體，它能產(chǎn)生特異性的殺蟲晶體蛋白，對農(nóng)業(yè)和林業(yè)上的許多害蟲具有毒殺作用，是世界范圍內(nèi)廣泛使用的抗蟲基因。
　

2、　 本研究以中渦1號楊樹(Populus deltoides cv. Zhongwol)葉片為外植體，較系統(tǒng)地研究了該楊樹品種組織培養(yǎng)再生體系的建立過程。同時(shí)構(gòu)建了含Bt基因的表達(dá)載體pBI121+Bt，以南林95楊(Populus×euramericana cv. Nanlin95)葉片為材料，開展了農(nóng)桿菌介導(dǎo)下的楊樹遺傳轉(zhuǎn)化，并對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行了抗性篩選和PCR檢測，獲得了如下主要結(jié)果：
　　 1、以中渦1號楊樹葉片為外植體

3、建立其再生體系，最佳的消毒時(shí)間為使用75％的酒精消毒15s，0.1％HgC12消毒4min，葉片的污染率為15％，出愈率達(dá)到82％。
　　 2、中渦1號楊樹葉片適宜的誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基為MS+6-BA0.2mg/L+NAA1.0mg/L；適宜的分化培養(yǎng)基為MS+KT0.1mg/L+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L;生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.6mg/L。
　　 3、進(jìn)行了中渦1號楊樹無

4、菌苗葉片直接誘導(dǎo)不定芽的研究，獲得葉片分化的最佳培養(yǎng)基配方為MS+NAA0.2mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖25g/L。
　　 4、通過酶切、純化、連接、轉(zhuǎn)化等基因工程操作方法構(gòu)建了含Bt Cry1C基因的表達(dá)載體pBI121+Bt，通過凍融法將其直接導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中。
　　 5、以南林95楊組培苗葉片為材料，采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。經(jīng)卡那霉素抗性篩選，共獲得11株卡那霉素抗性苗，通過PC