小麥紋枯病菌的多樣性和分子檢測.pdf

1、2001年春從江蘇省13個市的65個縣(市)采集到的小麥紋枯病典型癥狀病株上共分離到171株絲核菌,其中雙核絲核菌169株,占98.83％,多核絲核菌2株,占1.17％.雙核絲核菌中CAG1融合群(禾谷絲核菌,Rhizoctonia cerealis Vander Hoeven)158株,占93.49％,其它融合群共11株,占6.51％.兩株多核絲核菌屬于立枯絲核菌(R.solani Kühn)的AG2融合群.對這171株絲核菌進(jìn)行了室

2、內(nèi)和室外3個小麥品種的致病力測定,結(jié)果表明:菌株間致病力強(qiáng)弱存在明顯差異;雙核絲核菌的致病力水平顯著高于立枯絲核菌;雙核絲核菌間不同融合群菌株致病力無明顯差異;全省13個市的菌株間致病力差異明顯,以無錫、連云港、泰州、蘇州、鹽城地區(qū)菌株致病力最中,南通、常州最弱.在這171株絲核菌中選取7株代表性菌株,經(jīng)PD液體培養(yǎng)提取病菌DNA,采用通用引物ITS1(TCC GTA GGT GAA CCT GCG G)和ITS4(TCC TCC GC

3、T TAT TGA TAT GC),對病菌rDNA的內(nèi)轉(zhuǎn)錄區(qū)(ITS)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,測序,從NCBI(美國國立生物信息中心)中搜索得到與這些菌株親緣關(guān)系最近的菌株序列,明確了該原菌的分類地位,對這些菌株序列進(jìn)行Alignment分析,探明了雙核絲核菌與立枯絲核菌之間、雙核絲核菌中CAG1融合群與非CAG1融合群之間、CAG1融合群中致病力強(qiáng)弱菌株間遺傳多樣性關(guān)系,繪制了病原菌親緣關(guān)系系統(tǒng)樹.該文通過分子生物學(xué)手段分析了江蘇省小麥紋枯病

4、菌的復(fù)雜性和多樣性,有助于病菌生態(tài)學(xué)和病害流行學(xué)研究.根據(jù)禾谷絲核病菌(R.cerealis)與立枯絲核菌(R.solani)、長蠕孢菌(Helminthosporium spp.)、交鏈孢菌(Alternaria spp.)、小麥全蝕病菌(Gaeumannomyces graminis var.tritici)、禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum)rDNA ITS區(qū)序列差異,設(shè)計合成了2對特異性引物:DNF77:5′

5、-cac ctg tgc acc tgt tta gac g-3′,DNR554:5′-gtt cat cca tga atc cgg cca c-3′和DNF81:5′-tgt gca cct gtt gat acg tg-3′,DNR564:5′-gtt aga agc ggt tca tcc at-3′.用兩對特異性引物分別擴(kuò)增能引起小麥莖基部病害的各病菌,結(jié)果表明:設(shè)計合成的引物能夠?qū)π←溂y枯病菌擴(kuò)乖到約480bp特異性分子片段