水牛PCNA和FSHR等基因在卵泡發(fā)育過程中表達(dá)模式的初步研究.pdf

1、水牛出生時(shí)卵巢中含有約數(shù)萬個(gè)原始卵泡，但在水牛生命周期中只有約200個(gè)卵泡可以發(fā)育成熟并排卵，約99.9％的卵泡在生長過程中閉鎖、退化。如何挖掘母水牛的繁殖潛能，開發(fā)并應(yīng)用卵巢中的腔前卵泡，是水牛生殖生理研究的重要課題。本研究的目的是對(duì)水牛不同時(shí)期腔前卵泡中候選基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，總結(jié)其表達(dá)特點(diǎn)及差異，為探明水牛卵泡發(fā)生的分子機(jī)制，優(yōu)化水牛腔前卵泡體外培養(yǎng)系統(tǒng)奠定基礎(chǔ)。現(xiàn)將相關(guān)研究結(jié)果總結(jié)如下。
　　 1.水牛PCNA蛋白和VA

2、SA蛋白在卵巢組織中的表達(dá)定位研究。采用石蠟切片結(jié)合免疫組化的方法，對(duì)水牛PCNA蛋白和VASA蛋白在卵巢組織不同時(shí)期卵泡中的表達(dá)情況進(jìn)行定位研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，(1)原始卵泡中，PCNA和VASA蛋白在顆粒細(xì)胞并未檢測(cè)到表達(dá)，卵母細(xì)胞中有表達(dá);(2)初級(jí)卵泡中，PCNA和VASA在卵母細(xì)胞和部分顆粒細(xì)胞中均可檢測(cè)到較低表達(dá);(3)次級(jí)卵泡中，PCNA和VASA在卵母細(xì)胞和大多數(shù)的顆粒細(xì)胞中均可檢測(cè)到表達(dá)，但VASA在卵母細(xì)胞核中未表達(dá);(

3、4)在有腔卵泡中，PCNA在顆粒細(xì)胞、卵泡膜細(xì)胞及卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞中均有很強(qiáng)的表達(dá)，而VASA在這些細(xì)胞中均未檢測(cè)到表達(dá);隨著卵泡的增長，PCNA蛋白的表達(dá)有明顯的上升趨勢(shì)，而VASA在各時(shí)期卵泡中的表達(dá)有明顯差異。
　　 2.水牛不同時(shí)期腔前卵泡中PCNA、FSHR、IGFR-1、IGF-Ⅱ、IGFR-2、FGF-2、FGFR-2 mRNA的表達(dá)研究。分離水牛原始卵泡、初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡，應(yīng)用QRT-PCR的方法檢測(cè)了其

4、mRNA在不同時(shí)期腔前卵泡中的表達(dá)變化。結(jié)果顯示:(1) PCNA在各級(jí)腔前卵泡中均有表達(dá)，且表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，初級(jí)卵泡中的表達(dá)量顯著高于原始卵泡(1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.05)，次級(jí)卵泡中的表達(dá)量約為原始卵泡中的43倍，且極顯著高于初級(jí)卵泡（43.50±0.14 vs1.63±0.09 vs1±0.01，P＜0.01），與免疫組化結(jié)果一致。(2) FSHR在水牛原始卵泡中未能檢測(cè)到表達(dá)，在次級(jí)卵泡中的表達(dá)量顯著高

5、于初級(jí)卵泡（1.64±0.09 vs1±0.10，P＜0.05）。(3) IGFR-1在各級(jí)腔前卵泡中均有表達(dá)，且呈上升趨勢(shì)，其中初級(jí)卵泡中的表達(dá)量顯著高于原始卵泡（1.93±0.004vs1±0.07，P＜0.05），而次級(jí)卵泡中的表達(dá)量極顯著高于原始和初級(jí)卵泡，且約為原始卵泡的12倍（12.07±0.02 vs1.93±0.004 vs1±0.07，P＜0.01）。(4) IGF-Ⅱ在各級(jí)腔前卵泡中均有表達(dá)，且呈上升趨勢(shì)，其中次級(jí)卵

6、泡和初級(jí)卵泡中的表達(dá)量顯著高于原始卵泡（5.59±0.46 vs3.60±0.35 vs1±0.40，P＜0.05），次級(jí)卵泡與初級(jí)卵泡中的表達(dá)量無顯著差異(P＞0.05); IGFR-2在各級(jí)腔前卵泡中的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)，其中次級(jí)卵泡中的表達(dá)量極顯著高于原始卵泡和初級(jí)卵泡的表達(dá)（10.74±0.01 vs1.24±0.07 vs1±0.05，P＜0.01），后兩者之間無顯著差異。(5) FGF-2在各級(jí)腔前卵泡中均有表達(dá)，且呈下降趨勢(shì)

7、，其中原始卵泡中的表達(dá)量顯著高于初級(jí)和次級(jí)卵泡（1±0.16 vs0.60±0.18 vs0.51±0.09，P＜0.05），而初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡中的表達(dá)量無顯著差異;FGFR-2在各級(jí)腔前卵泡中均有表達(dá)，且呈上升趨勢(shì)，其中次級(jí)卵泡中的表達(dá)量顯著高于原始和初級(jí)卵泡，而初級(jí)卵泡中的表達(dá)量又顯著高于原始卵泡中的表達(dá)量（2.74±0.16 vs1.47±0.09 vs1±0.05，P＜0.05）。上述結(jié)果表明，隨著卵泡的發(fā)育，F(xiàn)SHR、IGF