應(yīng)用噬菌體防治弧菌引發(fā)的刺參腐皮綜合征.pdf

1、刺參腐皮綜合征是目前刺參養(yǎng)殖最常見、危害最為嚴(yán)重的疾病之一，嚴(yán)重制約了刺參養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。當(dāng)前刺參腐皮綜合征的防治主要依賴于化學(xué)消毒劑和抗生素，長(zhǎng)期使用會(huì)引發(fā)藥物殘留、病原菌產(chǎn)生耐藥性和水體環(huán)境污染等問題。本研究探索應(yīng)用裂解性噬菌體防治刺參腐皮綜合征，為刺參的健康養(yǎng)殖提供一條新途徑。
　　從大連地區(qū)患腐皮綜合征的刺參體壁組織中，采用平板分離技術(shù)分離細(xì)菌。純化培養(yǎng)后，通過人工回接感染實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證分離的菌株是否為刺參腐皮綜合征的病原

2、菌。利用形態(tài)學(xué)觀察、生理生化指標(biāo)及16SrDNA序列分析對(duì)病原菌進(jìn)行分類鑒定。分離得到兩株弧菌VDL-1和VDL-2，人工回接感染實(shí)驗(yàn)中，患病刺參的癥狀與自然發(fā)病的癥狀相同，說明VDL-1和VDL-2是刺參腐皮綜合征的病原菌，且VDL-2的致病力比VDL-1強(qiáng)。細(xì)菌VDL-1和VDL-2均無莢膜，具有極生單鞭毛，短桿狀，兩端鈍圓。VDL-1和VDL-2的L-苯丙氨酸、PNP-磷酸鹽和甘氨酸生理生化指標(biāo)不同。經(jīng)分類鑒定，VDL-1為嗜環(huán)弧

3、菌（Vibriocyclitrophicus），VDL-2為塔斯馬尼亞弧菌（Vibriotasmaniensis）。
　　將已分離的病原菌作為宿主菌，采用雙層平板法從養(yǎng)殖海水中分離噬菌體，對(duì)噬菌體進(jìn)行透射電鏡觀察，表征氯仿敏感性、宿主譜、潛伏期、裂解量等噬菌體生物特性。通過測(cè)定細(xì)菌與噬菌體共培養(yǎng)物在600nm處的吸光值來考察噬菌體對(duì)病原菌的體外裂解效果。篩選得到裂解VDL-1的噬菌體PVDL-1，PVDL-1屬于長(zhǎng)尾噬菌體科，感染

4、宿主菌的潛伏期約35min，裂解量約218PFU/cell。篩選得到VDL-2的裂解性噬菌體PVDL-2，PVDL-2屬于肌尾噬菌體科，感染宿主菌的潛伏期約30min，裂解量約110PFU/cell。PVDL-1和PVDL-2宿主專一性強(qiáng)，均對(duì)氯仿不敏感。在體外，PVDL-1對(duì)VDL-1有很好的裂解作用，PVDL-2與VDL-2共培養(yǎng)6h后，VDL-2產(chǎn)生抗PVDL-2的抗性菌株。
　　噬菌體治療實(shí)驗(yàn)采用浸浴的給藥方式。通過對(duì)比陰