養(yǎng)殖刺參“腐皮綜合征”致病菌的鑒定及其滅活菌苗對(duì)刺參免疫作用的研究.pdf

1、刺參(Apostichopus　japonicus，又稱仿刺參)，屬棘皮動(dòng)物門(mén)(Echinodemata)、海參綱(Holothuroidea)、仿刺參屬(Apostichopus)，主要分布于中國(guó)黃渤海、俄羅斯東部海岸、日本和韓國(guó)沿岸，是海參種類中食用和藥用價(jià)值最高的品種。近年來(lái)，我國(guó)大力發(fā)展刺參養(yǎng)殖業(yè)，使其一躍成為中國(guó)北方沿海水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要新興產(chǎn)業(yè)，取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。僅山東省2007年刺參養(yǎng)殖面積達(dá)45萬(wàn)畝，年產(chǎn)量7～

2、8萬(wàn)噸，經(jīng)濟(jì)產(chǎn)值達(dá)到百億元，刺參成為當(dāng)前中國(guó)海水養(yǎng)殖業(yè)中產(chǎn)值最大的養(yǎng)殖品種之一。然而，由于養(yǎng)殖的過(guò)速發(fā)展和不規(guī)范運(yùn)作，刺參病害問(wèn)題日趨突出，出現(xiàn)了多種明顯病癥和大規(guī)模死亡現(xiàn)象。其中，越冬保苗期和養(yǎng)成期出現(xiàn)的“腐皮綜合征”是目前養(yǎng)殖刺參危害最為嚴(yán)重的疾病，給廣大刺參養(yǎng)殖業(yè)者造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，也嚴(yán)重制約了該產(chǎn)業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。 多年來(lái)，人們主要采用抗生素對(duì)其病癥進(jìn)行預(yù)防和治療，但抗生素的大量使用會(huì)造成耐藥性的產(chǎn)生，使疾病的治愈難

3、度越來(lái)越大。同時(shí)，也可能產(chǎn)生藥物殘留影響產(chǎn)品質(zhì)量。由此可見(jiàn)，提高刺參自身的免疫力，增強(qiáng)其抗病力是解決刺參病害問(wèn)題的重要途徑。因此，在水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防治方面，利用外源刺激物(免疫增強(qiáng)劑、疫苗等)有效地提高養(yǎng)殖對(duì)象本身的免疫力顯得非常重要。迄今為止，有關(guān)滅活菌苗對(duì)刺參免疫影響的研究較少見(jiàn)。 2007年6～7月，對(duì)煙臺(tái)三家養(yǎng)殖場(chǎng)患“腐皮綜合征”養(yǎng)成期刺參進(jìn)行了病原學(xué)研究，患病刺參主要癥狀厭食、搖頭、腫嘴、排臟、口部潰爛乃至體表大面積潰瘍

4、，出現(xiàn)大量死亡。從病灶部位分離得到了一種菌落形態(tài)一致的優(yōu)勢(shì)菌HS-yt，通過(guò)形態(tài)學(xué)、生理生化和16S rDNA分子生物學(xué)方法對(duì)其菌株進(jìn)行的分類鑒定表明，HS-yt是氣單胞菌屬(Aeromonas sp.)的一種，與Aeromonas veronii相似性最大。通過(guò)人工感染試驗(yàn)證實(shí)其為刺參“腐皮綜合征”的致病原。 本文首先從預(yù)設(shè)的5個(gè)常用的評(píng)價(jià)免疫增強(qiáng)劑對(duì)無(wú)脊椎動(dòng)物免疫作用的酶活力指標(biāo)中篩選出3個(gè)變化有規(guī)律的指標(biāo)。結(jié)果表明溶菌酶、

5、超氧化物歧化酶及堿性磷酸酶為變化較規(guī)律的3個(gè)指標(biāo)，并將其作為進(jìn)一步試驗(yàn)的免疫指標(biāo)。 將致病菌HS-yt制備成甲醛滅活菌苗后對(duì)健康刺參進(jìn)行體腔注射，測(cè)定了滅活氣單胞菌苗對(duì)刺參免疫指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，刺參血清中溶菌酶活力在注射菌苗后，3.9x108CFU/mL組于6h時(shí)活力就達(dá)到峰值，而4.7x107CFU/mL組的活力在24h時(shí)達(dá)到最高值，試驗(yàn)組的溶菌酶活力明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。在3.9x108CFU/mL組中，堿性磷

6、酸酶活力于48h時(shí)達(dá)到最高值；而4.7x107CFU/mL組在96h時(shí)達(dá)到最高值，試驗(yàn)組的堿性磷酸酶活力明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。相比之下，注射菌苗對(duì)血清的超氧化物歧化酶活力影響卻不顯著?？傮w上，該菌苗在一定程度上可以提高刺參的機(jī)體免疫力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)，注射高濃度菌苗時(shí)，溶菌酶、堿性磷酸酶活力的達(dá)峰時(shí)間較短而且顯著，但其酶活力升高持續(xù)時(shí)間較短。 本研究中滅活氣單胞菌苗能夠顯著的提高刺參堿性磷酸酶和溶菌酶活力，顯示了該菌苗