食品中兩種致病菌的特征分析與免疫蛋白鑒定.pdf

1、本研究對(duì)我國北方三個(gè)城市（A市、B市和C市）的大型超市、大型農(nóng)貿(mào)批發(fā)市場和個(gè)體熟食店采集的速凍熟制米面制品、烤肉制品、中式醬肉制品、中式?jīng)霭璨恕㈩A(yù)制制品5大類共計(jì)900份中式菜肴樣品中的致病菌進(jìn)行監(jiān)測和分離鑒定。結(jié)果大腸桿菌O157∶H7未檢出，單增李斯特菌檢出21株。其中A市的單增菌檢出率最高3.00％（9株）;中式醬肉制品中單增菌的檢出率為4.44％（8株），高于其他制品;熟食店中醬肉類和涼菜類的總檢出率最高為8.33％（10株），

2、這為食物中毒的監(jiān)測以及污染源的追蹤提供了依據(jù)。
　　本實(shí)驗(yàn)對(duì)從樣品中分離出的21株單增李斯特菌進(jìn)行了多序列位點(diǎn)分型(MLST)和耐藥性分析。結(jié)果顯示，21株菌共分為12種ST型，其中ST5型7株(31.58％)、ST121型2株(10.53％)、ST9型3株(10.53％)，其他9種ST型各1株;對(duì)21株單增李斯特菌進(jìn)行抗藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示食品來源的單增李斯特菌對(duì)磺胺類、多肽類均呈現(xiàn)耐藥性;其次對(duì)頭孢類的耐藥率為85.71％

3、，對(duì)氨芐西林全部敏感，其余菌株對(duì)抗菌藥物呈不同程度的耐藥性;毒力因子檢測結(jié)果顯示21株單增李斯特菌對(duì)InlA，InlB，ActA，HlyA，PlcA，PlcB6個(gè)毒力基因全部呈現(xiàn)陽性，僅有InlJ呈現(xiàn)陰性。
　　本實(shí)驗(yàn)還對(duì)大腸桿菌和單增李斯特菌進(jìn)行免疫蛋白組學(xué)研究。選取大腸桿菌O157∶ H7和單增李斯特菌ATCC19111，免疫動(dòng)物獲得相對(duì)應(yīng)的多克隆抗體;分別提取兩株菌的總蛋白進(jìn)行雙向電泳，以制備的多抗作為一抗進(jìn)行免疫印跡分析，

4、利用PDquest軟件匹配凝膠和免疫印跡膜完全重合的蛋白點(diǎn)，即有免疫反應(yīng)的蛋白點(diǎn)，用MALDI-TOF/MS對(duì)具有免疫反應(yīng)性的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。初步鑒定了大腸桿菌O157∶H7中的17種免疫反應(yīng)蛋白，經(jīng)過軟件預(yù)測，包括1種外膜蛋白，16種細(xì)胞質(zhì)蛋白。單增李斯特菌鑒定出了16種免疫反應(yīng)蛋白經(jīng)過軟件預(yù)測，包括2種膜蛋白，14種細(xì)胞質(zhì)蛋白。
　　本研究的開展，為大腸桿菌O157∶H7和單增李斯特菌食物污染狀況、特征分析、以及預(yù)防與控制