利用dsRNA體外飼喂和轉(zhuǎn)基因水稻沉默褐飛虱相關(guān)基因的研究.pdf

1、水稻是世界上一半以上人口的主食，如何提高水稻單位面積產(chǎn)量來滿足人類的需求是一個經(jīng)久不衰的課題。褐飛虱（Nilaparvata lugens Sti(a)l）屬于半翅目飛虱科昆蟲，是一種對水稻極具破壞性的單食性害蟲。褐飛虱是刺吸式口器昆蟲，它直接吸食水稻韌皮部汁液危害水稻，同時它能充當水稻草狀叢矮病的媒介向水稻傳播這種病毒而對水稻產(chǎn)生危害。目前我國防治褐飛虱主要采用化學農(nóng)藥結(jié)合選擇抗蟲品種的策略。但是殺蟲劑的濫用使褐飛虱對其產(chǎn)生了一定的抗

2、性，并且殺蟲劑的大量使用對環(huán)境造成了嚴重的污染。對水稻進行遺傳改良從而提高其對褐飛虱的抗性是目前研究的一大熱點。而植物介導的RNAi抗蟲在鱗翅目和鞘翅目害蟲中已有過成功報道。鑒于以上情況，本研究的目的是通過dsRNA體外喂食褐飛虱篩選出對褐飛虱有干涉效果的基因，將這些基因的干涉載體導入水稻，希望開拓水稻抗褐飛虱的新渠道。
　　 本研究主要內(nèi)容包括：⑴利用本室害蟲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫挑選出7個褐飛虱生長發(fā)育重要的基因，分別命名為ds1、d

3、s2、ds3、ds5、ds6、ds7和ds10。⑵合成了5個靶標基因(ds1、ds2、ds3、ds6及ds10)和2個對照基因(GFP1和GFP2)的dsRNA，這些靶標基因同源的dsRNA喂食褐飛虱后褐飛虱的死亡率較對照（喂食dsGFP）都有明顯的提高。實時熒光定量PCR對體外喂食dsRNA后的褐飛虱進行靶標基因表達量檢測，證實褐飛虱體內(nèi)相關(guān)同源基因的表達量都有所降低。⑶將所構(gòu)建的7個基因的干涉載體導入粳稻品種中花11，對轉(zhuǎn)化單株進行