灰飛虱和褐飛虱bursicon基因的分子特性.pdf

1、Bursicon是首次在麗蠅Calliphora erythocephala中發(fā)現(xiàn)的一種多肽類激素,其主要功能有三方面:骨化、黑化和展翅。為探討灰飛虱Laodelphax striatellus和褐飛虱Nilaparvata lugens的bursicon基因的功能,首先根據(jù)相近物種同源序列比對(duì)結(jié)果設(shè)計(jì)簡并引物,克隆獲得兩種飛虱bursicon基因的部分片段,再利用RACE技術(shù)克隆獲得全長cDNA序列;通過熒光定量PCR研究灰飛虱體內(nèi)b

2、ursicon基因的時(shí)相表達(dá),利用RNAi技術(shù)研究bursicon基因在褐飛虱體內(nèi)的生理功能。相應(yīng)結(jié)果如下:
　　(1)利用RT-PCR(reverse transcription PCR)和RACE技術(shù)從灰飛虱體內(nèi)克隆獲得1,126bp的burs(bursicon alpha)和761bp的pburs(bursicon beta or partner of burs)全長序列,將其分別命名為Lsburs和Lspburs。生物信息

3、學(xué)分析表明:Lsburs開放閱讀框長483bp,5'-非翻譯區(qū)(5'-UTR)共142bp,3'-UTR共501bp,具有真核生物典型的加尾信號(hào)序列AATAAA和poly(A)尾巴,編碼160個(gè)氨基酸,該蛋白具有2個(gè)N-豆蔻?；稽c(diǎn)、3個(gè)酪蛋白激酶II磷酸化位點(diǎn)以及2個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)。Lspburs開放閱讀框長417bp,5'-UTR共66bp,3'-UTR共278bp,具有典型的加尾信號(hào)序列AATAAA和poly(A)尾巴,編碼

4、138個(gè)氨基酸,該蛋白具有2個(gè)N-豆蔻酰化位點(diǎn)、3個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)以及1個(gè)酪氨酸激酶磷酸化位點(diǎn)。qRT-PCR結(jié)果表明:Lsburs和Lspburs在灰飛虱各齡期均有轉(zhuǎn)錄表達(dá),并在若蟲期隨齡期增加呈上升趨勢(shì),在羽化期達(dá)到峰值,成蟲期表達(dá)量逐漸降低。結(jié)果暗示bursicon與灰飛虱蛻皮后的外表皮硬化關(guān)系密切。
　　(2)利用RT-PCR和RACE技術(shù)從褐飛虱體內(nèi)克隆獲得923bp的burs和703bp的pburs全長序列,將

5、其分別命名為Nlburs和Nlpburs。生物信息學(xué)分析表明:Nlburs開放閱讀框長474bp,5'-UTR共149bp,3'-UTR共300bp,具有真核生物典型的加尾信號(hào)序列AATAAA和poly(A)尾巴,編碼157個(gè)氨基酸,該蛋白具有1個(gè)N-豆蔻?；稽c(diǎn)、3個(gè)酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)以及2個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)。Nlpburs開放閱讀框長417bp,5'-UTR共73bp,3'-UTR共213bp,含有典型的poly(A)尾巴,