擬南芥NCED4基因和紫花苜蓿MsFTa基因的克隆及功能鑒定.pdf

1、本研究以紫花苜蓿和擬南芥為研究對象，主要利用基因工程、轉(zhuǎn)基因技術(shù)和表型分析，分析MsFTa和NCED4的功能，為相關(guān)功能基因研究及紫花苜?；虻霓D(zhuǎn)基因應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。主要試驗(yàn)結(jié)果如下：
　?、爬肞CR技術(shù)從野生型擬南芥中克隆出NCED4基因，全長1785bp，編碼595氨基酸，不含有內(nèi)含子，從擬南芥中分離出的NCED4蛋白與其他物種的同源蛋白相比，具有較高程度的同源性和相似的保守區(qū)，且不存在信號肽。
　?、仆ㄟ^DNA重組技

2、術(shù)將其連接到pBI121載體上，成功構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI-NCED4;將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到感受態(tài)農(nóng)桿菌株GV3101中，利用花序浸泡法獲得具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)基因擬南芥植株。對再生植株進(jìn)行檢測表明，目的基因轉(zhuǎn)入擬南芥基因組中，并在轉(zhuǎn)基因擬南芥中成功過量表達(dá)。基因功能與植物體內(nèi)脫落酸的調(diào)控有關(guān)。
　　⑶實(shí)時(shí)定量分析顯示，NCED4基因在擬南芥不同組織中存在著明顯的差異性表達(dá)，在葉片中表達(dá)量最高，在花中表達(dá)量較低;NCED4基因表達(dá)量受

3、外援激素的影響較為明顯:在一定脫落酸的作用下，基因相對表達(dá)量隨著時(shí)間的累積先升高后降低，而在一定量赤霉素的作用下，基因相對表達(dá)量隨著時(shí)間的累積降低。
　?、壤肞CR技術(shù)從紫花苜蓿中克隆出MsFTa基因，全長528bp，編碼176氨基酸，從紫花苜蓿中分離出的MsFTa蛋白與其他物種的同源蛋白相比，具有較高的同源性和相似的保守區(qū)，不存在信號肽。
　　⑸構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI-MsFTa，并最終獲得具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)基因擬南芥