擬南芥DREB1A基因轉(zhuǎn)化紫花苜蓿的研究.pdf

1、植物的生長經(jīng)常受到干旱、高鹽和低溫脅迫的嚴(yán)重影響。因此，提高植物抗逆性的研究有著極為重要的現(xiàn)實(shí)意義。紫花苜蓿(Medicago sativa L.)為世界上重要的豆科牧草，也是優(yōu)良的水土保持植物。利用基因工程技術(shù)來提高苜?？购?、抗旱、耐鹽堿能力具有重要意義。本研究采用了農(nóng)桿菌介導(dǎo)和花粉管通道兩種轉(zhuǎn)基因方法，將擬南芥DREB1A基因?qū)胱匣ㄜ俎?，為提高苜蓿抗逆性打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1.較系統(tǒng)地研究并優(yōu)化了紫花苜蓿組織培養(yǎng)再生

2、體系。本研究通過對(duì)不同紫花苜蓿品種(阿爾岡金、West blend和WL323)、不同外植體(下胚軸和子葉)、不同基本培養(yǎng)基(MS和SH)以及不同激素濃度組合等影響植株再生因子的篩選和優(yōu)化，確定了最理想試驗(yàn)材料為阿爾岡金、最適外植體為下胚軸、最佳基本培養(yǎng)基為MS。在不同激素濃度配比中，2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA愈傷組織誘導(dǎo)率最高，2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA芽分化率最高，在1/2 MS+1.

3、0 mg/L IBA的生根培養(yǎng)基上獲得再生植株。 2.在已建立紫花苜蓿組培再生體系的基礎(chǔ)上，較系統(tǒng)地研究并優(yōu)化了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系。對(duì)影響基因轉(zhuǎn)化的一些因子進(jìn)行了優(yōu)化，確定了外植體最佳預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為7d、最佳共培養(yǎng)時(shí)間為3d、誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)的慶大霉素選擇壓為20mg/L，生根過程選擇壓為10mg/L。獲得的轉(zhuǎn)化再生植株經(jīng)PCR檢測(cè)，結(jié)果證明目的基因已整合到紫花苜?；蚪M中。 3.較系統(tǒng)地研究建立了紫花苜蓿花粉管通